一种细胞松弛素类化合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及微生物代谢产物及其在药物研究领域的应用技术，具体是微生物代谢产生细胞松弛素类化合物的制备方法与应用。所述细胞松弛素类化合物的化学结构如式I所示，由糙壁弯孢菌Curvularia verruculosa经发酵培养制备获得。经实验表明此类化合物具有抗肿瘤活性，可作为细胞增殖抑制剂或抗肿瘤制剂。本发明专利技术制备所得的细胞松弛素类化合物是利用微生物进行发酵培养生产的，具有操作简单、生产周期短、成本低等特点。成本低等特点。成本低等特点。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞松弛素类化合物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及微生物代谢产物及其在药物研究领域的应用技术，具体是一种从糙壁弯孢菌(Curvularia verruculosa)的发酵产物中获得细胞松弛素类化合物及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]恶性肿瘤是严重威胁人类健康的重要疾病。中国是恶性肿瘤的发病大国，据国家癌症中心的《2017中国肿瘤登记年报》报道，中国恶性肿瘤病人占全球癌症病人总量的将近40％。每天约1万人确诊癌症，平均每分钟就有7人确诊。肝癌、结肠癌、女性乳腺癌等依然是我国主要的恶性肿瘤，而乳腺癌为女性发病首位。
[0003]虽然研究人员一直致力于恶性肿瘤的研究，但目前来看我国恶性肿瘤发病、死亡数持续上升，医疗支出巨大，社会负担沉重，急需开发新型药物来防控日益严峻的恶性肿瘤发展趋势。
[0004]目前市面上用于治疗恶性肿瘤的药物多为有机合成产物或微生物的次级代谢产物。
[0005]糙壁弯孢菌(Curvularia verruculosa)可从多种植物中提取获得，对于该菌株形态学特征及其生物学作用已经被本领域所熟知，并且有文献对其进行报道，可从狗牙根(习平根等，华南农业大学学报，2005，26(2)，31
‑
34)中分离得到，也可从长春花中分离得到(R.Parthasarathy et al,Analytical Biochemistry,2020,593,113530)。据报道，该菌经发酵可产生长春花碱，对海拉细胞具有细胞毒活性，可用于治疗恶性淋巴瘤、绒毛膜癌等(R.Parthasarathy et al,Analytical Biochemistry,2020,593,113530)。但目前为止并未有对糙壁弯孢菌(Curvularia verruculosa)次级代谢产物进行系统研究的报道，本专利技术首次从该菌中分离得到具有抗肿瘤活性的细胞松弛素类化合物。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种从糙壁弯孢菌(Curvularia verruculosa)的发酵产物中获得细胞松弛素类化合物及其制备方法与肿瘤防治方面的应用。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：
[0008]一种细胞松弛素类化合物，细胞松弛素类化合物结构如式I中所示：
[0009][0010]一种细胞松弛素类化合物的制备方法，
[0011]1)将糙壁弯孢菌Curvularia verruculosa经发酵培养，而后将发酵液用乙酸乙酯萃取3
‑
4次，合并提取液进行浓缩，获得发酵液粗提物；
[0012]所述糙壁弯孢菌(Curvularia verruculosa)孢子通常呈弯曲状，壁粗糙；该菌株在多篇文献中报道，并且可在多个保藏中心通过流通方式获得；
[0013]比如中国典型培养物保藏中心(China Center for Type Culture Collection,CCTCC,保藏号CCTCC HF2008198)、美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection,ATCC，保藏号ATCC 60943
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60948)、德国微生物菌种保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen,DSMZ，保藏号DSM 1157)、荷兰真菌菌种保藏中心(Central Bureau voor Schimmel
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Cultures,CBS，保藏号CBS 147.63和CBS 444.70)等。另外，本领域的技术人员可根据文献公开报道的方法方便地从狗牙根(习平根等，华南农业大学学报，2005，26(2)，31
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34)和长春花(R.Parthasarathy et al,Analytical Biochemistry,2020,593,113530)等植物中分离获得；并可方便地获得菌株ITS在基因库中的登记信息，例如，NCBI(MK995628)、NCBI(KJ748697.1)等等。
[0014]2)将步骤1)中的发酵液粗提物进行减压硅胶柱层析，依次采用梯度为50:1至1:1(v/v)的石油醚
‑
乙酸乙酯和梯度为20:1至1:1(v/v)的二氯甲烷
‑
甲醇进行洗脱；
[0015]3)将步骤2)中以二氯甲烷
‑
甲醇10：1(v/v)梯度洗脱下的组分以甲醇
‑
水(甲醇
‑
水的比例10：90至100：0)作为洗脱液进行反相柱层析，收集甲醇
‑
水60：40(v/v)洗脱得到的组分，再用薄层层析(TLC)纯化，所采用的展开体系为20：1(v/v)的二氯甲烷
‑
甲醇，后经过凝胶柱层析制得目标化合物。
[0016]具体为：
[0017]1)将所述糙壁弯孢菌(Curvularia verruculosa)在PDA(马铃薯蔗糖琼脂)培养基上于28℃下培养7天，取其菌丝体接种于固体培养基中，室温下静置发酵30天，发酵产物经石油醚萃取脱除小极性产物后，采用乙酸乙酯充分浸泡反复萃取，合并萃取液进行浓缩，获得粗提物；
[0018]2)将上述粗提物进行减压硅胶柱层析，依次使用梯度分别为50:1至1:1(v/v，下同)的石油醚
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乙酸乙酯和20:1至1:1的二氯甲烷
‑
甲醇洗脱体系进行梯度洗脱；
[0019]3)收集上述步骤2)中的二氯甲烷
‑
甲醇10:1洗脱的组分浓缩，进行反相硅胶柱层析，使用梯度为10:90至100:0的甲醇
‑
水洗脱体系进行梯度洗脱；
[0020]4)收集上述步骤3)中的甲醇
‑
水60:40的组分，进行薄层层析(TLC)纯化，后采用
Sephadex LH
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20甲醇凝胶柱层析进行纯化(以MeOH作为洗脱剂)，得到式I所示细胞松弛素类化合物。
[0021]一种细胞松弛素类化合物的应用，所述式I中的细胞松弛素类化合物在作为细胞增殖抑制剂或抗肿瘤制剂或其先导化合物中的应用。
[0022]所述式I中的细胞松弛素类化合物在作为抗肝癌、结肠癌和乳腺癌药物或先导化合物中的应用。
[0023]所述肝癌为HepG
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2肝癌细胞；所述结肠癌为HCT
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16结肠癌细胞；所述乳腺癌为MCF
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7乳腺癌细胞。
[0024]本专利技术所具有的优点：
[0025]1.本专利技术制备所得的细胞松弛素类化合物来源于糙壁弯孢菌(Curvularia verruculosa)的发酵产物，采用微生物发酵的方法制备该化合物，具有高效、环保的特点；
[0026]2.本专利技术制备所得的细胞松弛素类化合物具有显著抗HepG
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞松弛素类化合物，其特征在于：细胞松弛素类化合物结构如式I中所示：2.一种权利要求1所述的细胞松弛素类化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：1)将糙壁弯孢菌Curvularia verruculosa经发酵培养，然后将发酵液用乙酸乙酯萃取3
‑
4次，合并提取液进行浓缩，获得发酵液粗提物；2)将步骤1)中的发酵液粗提物进行减压硅胶柱层析，依次采用梯度为50:1至1:1(v/v)的石油醚
‑
乙酸乙酯和梯度为20:1至1:1(v/v)的二氯甲烷
‑
甲醇进行洗脱；3)将步骤2)中以二氯甲烷
‑
甲醇10：1(v/v)梯度洗脱下的组分以甲醇
‑
水(10：90至100：0，v/v)作为洗脱液进行反相柱层析，收集甲醇
‑
水60：40(v/v)洗脱得到的组分，再用制备型薄层层析(prep.
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TLC)纯化，所采用的展开体系为二氯甲烷
‑
甲醇(20：1，v/v)，然后经过凝胶柱层析，制得目标化合物。3.按权利要求2所述的细胞松弛素类化合物的制备方法，其特征在于：1)将所述糙壁弯孢菌(Curvularia verruculosa)在PDA(马铃薯蔗糖琼脂)培养基上于28℃下培养7天，取其菌丝体接种于固体培养基中，室温下静置发酵30天，发酵产物经石油醚萃取脱除小极性产物后，采用乙酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：王斌贵，胡雪怡，李晓明，孟令红，李鑫，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：