一种黄曲霉毒素产毒真菌的产毒力指示分子快检试剂盒及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种黄曲霉毒素产毒真菌的产毒力指示分子快检试剂盒及其用途。包括孔底包被有指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子的纳米抗体或单克隆抗体的酶标板、指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子的多克隆抗体、起标准物质作用的指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子纯品溶液、察氏培养基、辣根过氧化物酶标记抗体、ELISA显色液与终止液、样品稀释液；所述的指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子是指AFT

【技术实现步骤摘要】
一种黄曲霉毒素产毒真菌的产毒力指示分子快检试剂盒及其用途


[0001]本专利技术涉及黄曲霉毒素产毒真菌的产毒力指示分子快检试剂盒及用途。

技术介绍

[0002]黄曲霉毒素毒性强、危害大，是污染食品种类最多的污染物，近年总体呈现污染加重趋势，严重威胁食品安全和人民健康。黄曲霉毒素是自然界毒性最强的一类真菌毒素，其中黄曲霉毒素B1是国际癌症研究组织(International Agency for Research on Cancer,IARC)认定的I类致癌物，已引发过多起人畜群体中毒事件，成为肝癌病例高发的主要原因之一。根据近5年Web of Science检索数据统计：黄曲霉毒素污染食品及原料种类超过了110种，高居污染物首位。然而，迄今国内外仍没有黄曲霉毒素等微生物毒素污染前的分子预警研究范例，难以满足事前预警的迫切需求。
[0003]现有黄曲霉毒素预警方法主要是基于黄曲霉毒素检测技术建立，用于毒素污染水平评价或产后污染程度与消费风险评估，一旦检测发现，污染往往已经发生，难以满足事前预警与指导防控的迫切要求。利用黄曲霉毒素检测技术开展污染预警，是欧美等发达国家开展食品安全监管的成功经验。欧盟食品和饲料快速预警系统(Rapid Alert System for Food andFeed，RASFF)就是利用限量标准与检测获得食品与饲料中黄曲霉毒素含量，对各国输入欧盟的食品与饲料进行快速预警。美国研究机构基于黄曲霉毒素检测技术与污染监测数据，研究建立了多元罗吉斯蒂回归分析和叠加高斯处理等预警模型，主要用于评估产后玉米等农产品真菌毒素污染程度与消费风险。
[0004]综合国内外近二十年研究进展，当前黄曲霉毒素早期预警分子检测技术缺乏是根本原因。针对这一瓶颈难题，专利技术人团队经过十多年攻关研究，成功发现了一种指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子及其早期预警作用，成为首个早期预警分子，在此基础上成功专利技术了黄曲霉毒素产毒真菌的产毒力指示分子快检试剂盒，并用于鉴别菌株产黄曲霉毒素能力——即产毒力，以及用于发现农田、农产品及饲料中是否存在强产毒力的黄曲霉毒素产毒菌株，为及时发现黄曲霉毒素污染风险与早防早控提供科学依据。

技术实现思路

[0005]本专利技术针对现有技术存在的不足，提供一种黄曲霉毒素产毒真菌的产毒力指示分子快检试剂盒及其用途，其用于鉴别曲霉属菌株产黄曲霉毒素能力和鉴别农田、农产品、中药材、饲料等产品中是否存在强产毒力的黄曲霉毒素产毒菌株，容易推广应用。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案为：
[0007]提供黄曲霉毒素产毒真菌的产毒力指示分子快检试剂盒，包括孔底包被有指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008的纳米抗体或单克隆抗体的酶标板、指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008的多克隆抗体、起标准物质作用的指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008纯品溶液、察氏培养基或其他适宜产毒黄曲霉菌生长
的培养基、与指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008多克隆抗体发生结合反应的辣根过氧化物酶标记抗体、ELISA显色液与终止液、样品稀释液；
[0008]所述的指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子是指AFT
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YJFZP008肽，其氨基酸序列如 SEQ ID NO.1所示。
[0009]按上述方案，所述的孔底包被有指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008的纳米抗体或单克隆抗体的酶标板，是通过如下方法制备获得：将上述AFT
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YJFZP008的纳米抗体或单克隆抗体溶解在ELISA包被缓冲液中，形成0.2
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8.0μg/mL的包被液，再加入至酶标板中(以100
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200μL/孔)，4℃放置过夜或者37℃放置不少于2h后，去除上述酶标板中包被液，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板；然后加入ELISA常规封闭液(每孔加200
‑ꢀ
300μL)，放置室温或37℃封闭不少于1h后，再弃去封闭液，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板。
[0010]所述的ELISA包被缓冲液是指常规碳酸盐缓冲液，配制方法为：称取NaHCO
3 1.465g、Na2CO30.795g,加入去离子水定容至500mL即可。
[0011]上述方案中，指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008的多克隆抗体为指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008兔源多克隆抗体，所述的辣根过氧化物酶标记抗体为辣根过氧化物酶标记羊抗兔抗体。
[0012]上述方案中，指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008的多克隆抗体与指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008的纳米抗体或单克隆抗体的动物源不同，具体可利用研究获得的指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子直接用作抗原，制备获得纳米抗体或单克隆抗体、以及兔源多克隆抗体；
[0013]所述的指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008的纳米抗体或单克隆抗体，可利用AFT
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YJFZP008作为免疫抗原，采用常规方式免疫羊驼或者Balb/c鼠，再利用已知常规的纳米抗体或鼠源单克隆抗体制备技术方案即可制备获得。
[0014]所述的指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008的兔源多克隆抗体，可利用 AFT
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YJFZP008作为免疫抗原，采用常规方式免疫新西兰大白兔等试验兔，再利用已知常规的兔多克隆抗体制备技术方案即可制备获得。
[0015]所述的察氏培养基为常规察氏培养基，可以自配，也可以直接购买商品获得。
[0016]所述的辣根过氧化物酶标记羊抗兔抗体可以直接购买商品获得。
[0017]按上述方案，所述的ELISA显色液是指ELISA常规的双氧水与TMB显色液。
[0018]所述的终止液是指ELISA常规的显色终止液：2mol/L硫酸水溶液，配制方法为：取44 mL浓硫酸加入到300mL去离子水中，搅拌到冷却，最后定容至400mL即可。
[0019]所述的样品稀释液是指含有0.1％山梨醇和绵糖的0.01mol/L磷酸盐缓冲液，配制方法为：山梨醇与糖各0.5g、NaCL 4.0g、Na2HPO4·
12H2O 1.45g、KCL 0.1g、KH2PO40.1g，加入去离子水定容至500mL。
[0020]提供上述黄曲霉毒素产毒真菌的产毒力指示分子快检试剂盒在鉴别曲霉属菌株产黄曲霉毒素能力或鉴别农田、农产品及饲料中是否存在强产毒力的黄曲霉毒素产毒菌株中的应用。
[0021]应用方法：
[0022]用试剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.黄曲霉毒素产毒真菌的产毒力指示分子快检试剂盒，其特征在于：包括孔底包被有指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008的纳米抗体或单克隆抗体的酶标板、指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008的多克隆抗体、起标准物质作用的指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008纯品溶液、察氏培养基或其他适宜产毒黄曲霉菌生长的培养基、与指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008多克隆抗体发生结合反应的辣根过氧化物酶标记抗体、ELISA显色液与终止液、样品稀释液；所述的指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子是指AFT
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YJFZP008肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素产毒真菌的产毒力指示分子快检试剂盒，其特征在于：所述的孔底包被有指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008的纳米抗体或单克隆抗体的酶标板，是通过如下方法制备获得：将上述AFT
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YJFZP008的纳米抗体或单克隆抗体溶解在ELISA包被缓冲液中，形成0.2
‑
8.0μg/mL的包被液，再加入至酶标板中，4℃放置过夜或者37℃放置不少于2h后，去除上述酶标板中包被液，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板；然后加入ELISA常规封闭液，放置室温或37℃封闭不少于1h后，再弃去封闭液，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板。3.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素产毒真菌的产毒力指示分子快检试剂盒，其特征在于：指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008的多克隆抗体为指示黄曲霉毒素产毒菌产毒力的分子AFT
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YJFZP008兔源多克隆抗体，所述的辣根过氧化物酶标记抗体为辣根过氧化物酶标记羊抗兔抗体。4.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素产毒真菌的产毒力指示分子快检试剂盒，其特征在于：所述的ELISA显色液是指ELISA常规的双氧水与TMB显色液；所述的终止液是指ELISA常规的显色终止液：2mol/L硫酸水溶液。5.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素产毒真菌的产毒力指示分子快检试剂盒，其特征在于：所述的样品稀释液是指含有0.1％山梨醇和0.1％糖的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。6.权利要求1所述的黄曲霉毒素产毒真菌的产毒力指示分子快检试剂盒的使用方法，包括以下步骤：用试剂盒中的察氏培养基适宜产毒黄曲霉菌生长的培养基培养并制备待鉴别菌株或待鉴别样品的待测液；将待鉴别菌株的待测液用样品稀释液稀释，将稀释后待鉴别菌株的待测液或上述待鉴别样品的待测液，以每孔100
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200μL加入到试剂盒中的酶标板孔...

【专利技术属性】
技术研发人员：李培武，张奇，唐晓倩，姜俊，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：