通过QPCR分析的胃癌诊断方法技术

本发明专利技术涉及一种通过qPCR分析的胃癌诊断方法，就是涉及一种通过测定想要分析的粪便样品中含有的微生物量对胃癌进行诊断的方法。根据本发明专利技术的诊断方法利用从想要接受诊断的对象不经受任何痛苦就能够容易获取的粪便、在确保具有高准确性及灵敏度的前提下可以对胃癌进行预测及/或诊断，因此值得期待的是，不仅可以广泛用于胃癌诊断领域，而且还可以通过这种方法对胃癌进行早期诊断，从而能够显著增强胃癌治疗的效果。癌治疗的效果。癌治疗的效果。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过QPCR分析的胃癌诊断方法


[0001]本专利技术涉及一种通过qPCR分析的胃癌诊断方法，更具体地，就是涉及一种通过qPCR分析对粪便内存在的微生物基因进行分析从而对胃癌进行诊断的方法。
[0002]本申请主张于2019年05月24日申请的韩国专利申请第10
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2019
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0061097号的优先权，该申请的说明书及附图中公开的所有内容均被引用到本专利技术中。

技术介绍

[0003]从全世界范围来看，胃癌(gastric cancer)在韩国、中国、日本等东亚地区的发病率很高，而在美国、欧洲等西方国家的发病率相对较低。就韩国来说，男女总的发病率排第一，死亡率仅次于肺癌排第二，而在60多岁的人群中发病率最高。胃癌包括在胃粘膜上皮产生的胃腺癌(gastric adenocarcinoma)和在粘膜下层产生的恶性淋巴瘤、肌肉瘤及间质瘤等，但是胃腺癌占全部胃癌的95％。大部分的胃癌患者都处于进展阶段，大部分预后都非常不好。胃是食物从口中进入后与其长时间接触的脏器，因此推测食物中所含有的因子成为胃癌原因的概率高，通过动物实验证明，食物中含有的致癌物质是导致胃癌的最重要的因素。有关病毒、细菌等生物因子引发的慢性炎症是导致癌症的事实很早之前就被提出过，众所周知，在胃部共生的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)会引发胃癌。
[0004]胃癌是从胃内壁(lining)开始产生，此后，癌症会向身体的其它部位特别是肝、肺、骨头、腹部的内壁及淋巴结扩散。一般来说，治疗方法包括单独实施或并用手术、化学疗法、放射线疗法及靶向疗法。胃癌可以利用内窥镜等的定期检查能够在早期发现，如果是早期胃癌，可通过恰当的治疗，90％左右都能够被完全治愈，但是目前胃癌仍然在处于发展阶段才被发现的情况较多，而且根据分类胃癌是一种死亡率高的癌症。因此，可通过提前预测胃癌是否会发生，从而针对早期诊断及治疗采取差异化的应对方法是重要的，这就要求对此开展研究及技术开发。
[0005]另外，众所周知，在人体共生的微生物数量达到100兆，比人类细胞多10倍，微生物的基因数量超过人体基因数量的100倍。微生物区系(microbiota或者microbiome)是指所在给定的居住地中存在的、包括细菌(bacteria)、古细菌(archaea),真核生物(eukarya)在内的微生物群落(microbial community)，肠道内微生物区系对于人的生理现象起到重要的作用，通过与人类细胞的相互作用而对人类的健康与疾病产生大的影响。但是，在胃癌诊断中，目前尚未提出源自人体的如从粪便的物质中仅分离出细菌并通过基因分析从而对胃癌进行诊断的方法。
[0006]本专利技术人针对以高准确性及灵敏度来预测或诊断胃癌的方法开展了研究，最终开发了通过可获得的粪便中分离出细菌从而具有高准确性及灵敏度的胃癌诊断方法。

技术实现思路

[0007]所要解决的技术问题
[0008]本专利技术就是为了解决所述现有技术中存在的问题而研发的，其目的在于，提供一
种胃癌的预测或诊断方法，通过从能够容易获得的粪便样品中分离出微生物的基因并利用qPCR对其进行分析，从而可以对胃癌进行预测或诊断。
[0009]但是，本专利技术所要解决的技术问题并非限定于上面提到的问题，有关尚未提到的其它问题，具有本领域普通知识的技术人员可通过以下的记载将会有一个明确的理解。
[0010]解决技术问题的方法
[0011]为了实现所述目的，本专利技术提供一种用于胃癌诊断的信息提供方法，包括：
[0012](a)从被检体粪便样品中提取DNA的步骤；
[0013](b)针对所述提取的DNA，利用针对从由瘤胃球菌(Ruminococcus)属、梭杆菌(Fusobacterium)属、拟杆菌(Bacteroides)属、不动杆菌(Acinetobacter)属及链型杆菌(Catenibacterium)属细菌的16S rDNA构成的组中选择的一种以上具有特异性的引物对及探针(Probe)进行qPCR(定量PCR；quantitative PCR)的步骤；以及
[0014](c)通过所述qPCR分析对DNA进行定量并与源自正常人粪便的DNA的量进行比较的步骤。
[0015]另外，本专利技术提供一种胃癌诊断方法，包括：
[0016](a)从被检体粪便样品中提取DNA的步骤；
[0017](b)针对所述提取的DNA，利用针对从由瘤胃球菌(Ruminococcus)属、梭杆菌(Fusobacterium)属、拟杆菌(Bacteroides)属、不动杆菌(Acinetobacter)属及链型杆菌(Catenibacterium)属细菌的16S rDNA构成的组中选择的一种以上具有特异性的引物对及探针执行qPCR(quantitative PCR)的步骤；以及
[0018](c)通过所述qPCR分析对DNA进行定量并与源自正常人粪便的DNA的量进行比较的步骤。
[0019]另外，本专利技术提供一种用于胃癌判定的信息提供方法，包括：
[0020](a)从被检体粪便样品中提取DNA的步骤；
[0021](b)针对所述提取的DNA，利用针对从由瘤胃球菌(Ruminococcus)属、梭杆菌(Fusobacterium)属、拟杆菌(Bacteroides)属、不动杆菌(Acinetobacter)属及链型杆菌(Catenibacterium)属细菌的16S rDNA构成的组中选择的一种及以上具有特异性的引物对及探针进行qPCR(quantitative PCR)的步骤；以及
[0022](c)通过所述qPCR分析对DNA进行定量并与源自正常人粪便的DNA的量进行比较的步骤。
[0023]另外，本专利技术提供一种用于预测胃癌发病的信息提供方法，包括：
[0024](a)从被检体粪便样品中提取DNA的步骤；
[0025](b)针对所述提取的DNA，利用针对从由瘤胃球菌(Ruminococcus)属、梭杆菌(Fusobacterium)属、拟杆菌(Bacteroides)属、不动杆菌(Acinetobacter)属及链型杆菌(Catenibacterium)属细菌的16S rDNA构成的组中选择的一种以上具有特异性的引物对及探针进行qPCR(quantitative PCR)的步骤；以及
[0026](c)通过所述qPCR分析对DNA进行定量并与源自正常人粪便的DNA的量进行比较的步骤。
[0027]另外，本专利技术提供一种胃癌发病危险程度预测方法，包括：
[0028](a)从被检体粪便样品中提取DNA的步骤；
[0029](b)针对所述提取的DNA，利用针对从由瘤胃球菌(Ruminococcus)属、梭杆菌(Fusobacterium)属、拟杆菌(Bacteroides)属、不动杆菌(Acinetobacter)属及链型杆菌(Catenibacterium)属本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于胃癌诊断的信息提供方法，其特征在于，包括：(a) 从被检体粪便样品中提取DNA的步骤；(b) 针对所述提取的DNA，利用针对从由瘤胃球菌(Ruminococcus)属、梭杆菌(Fusobacterium)属、拟杆菌(Bacteroides)属、不动杆菌(Acinetobacter)属及链型杆菌(Catenibacterium)属细菌的16S rDNA构成的组中选择的一种以上具有特异性的引物对及探针进行qPCR(定量PCR)的步骤；以及(c) 通过所述qPCR分析对DNA进行定量并与源自正常人粪便的DNA的量进行比较的步骤。2.根据权利要求1所述的用于胃癌诊断的信息提供方法，其特征在于，所述(a)步骤的DNA是从源自粪便内细菌的细胞外囊泡分离的DNA。3.根据权利要求1所述的用于胃癌诊断的信息提供方法，其特征在于，所述(b)步骤中的引物对是以下中的任意一种以上：能够将瘤胃球菌(Ruminococcus)属细菌的16S rDNA特异性扩增的、由序列号3及4组成的引物对；能够将梭杆菌(Fusobacterium)属细菌的16S rDNA特异性扩增的、由序列号6及7组成的引物对；能够将拟杆菌(Bacteroides)属细菌的16S rDNA特异性扩增的、由序列号9及10组成的引物对；能够将不动杆菌(Acinetobacter)属细菌的16S rDNA特异性扩增的、由序列号12及13组成的引物对；以及由能够将链型杆菌(Catenibacterium)属细菌的16S rDNA特异性扩增的、由序列号15及16组成的引物对。4.根据权利要求1所述的用于胃癌诊断的信息提供方法，其特征在于，所述(b)步骤中的探针是以下中的任意一种以上：能够与瘤胃球菌(Ruminococcus)属细菌的16S rDNA进行特异性结合的、用序列号5表示的探针；能够与梭杆菌(Fusobacterium)属细菌的16S rDNA进行特异性结合的、用序列号8表示的探针；能够与拟杆菌(Bacteroides)属细菌的16S rDNA进行特异性结合的、用序列号11表示的探针；能够与不动杆菌(Acinetobacter)属细菌的16S rDNA进行特异性结合的、用序列号14表示的探针；以及能够与链型杆菌(Catenibacterium)属细菌的16S rDNA进行特异性结合的、用序列号17表示的探针。5.根据权利要求1所述的用于胃癌诊断的信息提供方法，其特征在于，所述(c)步骤还包括：将所述(b)步骤中通过qPCR定量的基因量按照以下的基因量进行补正(normalization)的步骤，该基因量为利用针对细菌的16S rDNA(细菌通用16S rDNA ，bacterial universal 16S rDNA)或人类18S rDNA具有特异性的引物对及探针进行qPCR后定量的基因量。
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【专利技术属性】
技术研发人员：金润根，
申请(专利权)人：MD保健株式会社，
类型：发明
国别省市：