用于抑制HMGB1表达的组合物和方法技术

本公开内容涉及用于减少HMGB1表达、特别是在肝细胞中的表达的寡核苷酸、组合物和方法。公开的用于减少HMGB1表达的寡核苷酸可以是双链的或单链的，并且可以被修饰以改善特性，诸如对核酸酶的更强抗性和更低的免疫原性。公开的用于减少HMGB1表达的寡核苷酸还可以被设计成包括靶向配体以靶向特定细胞或器官，例如肝脏的肝细胞，并且可以用于治疗肝纤维化和相关病症。维化和相关病症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于抑制HMGB1表达的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用本申请要求2018年12月28日提交的美国临时申请号62/786,287、2018年12月31日提交的美国临时申请号62/787,038和2019年1月3日提交的美国临时申请号62/788,111在35 U.S.C.
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119(e)下的权益，它们中的每一篇的整个内容通过引用并入本文。
[0002]对序列表、表格或计算机程序的引用序列表的正式副本作为ASCII格式的文本文件通过EFS
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Web与说明书并行地提交，其文件名称为“400930
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014WO_ST25.txt”，创建日期为2019年12月12日，且大小为306千字节。通过EFS
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Web提交的序列表是说明书的一部分，并特此通过引用整体并入本文。


[0003]本申请涉及寡核苷酸及其用途，特别是与涉及纤维化的病症的治疗有关的用途。

技术介绍

[0004]组织纤维化是一种以细胞外基质和炎症因子的异常积累为特征的病症，其导致瘢痕形成并促进慢性器官损伤。在肝脏中，纤维化是对可导致肝硬化和肝细胞癌的肝损伤的多细胞应答。该应答经常由与病症诸如酒精滥用、病毒性肝炎、代谢疾病和肝疾病诸如胆汁郁积性肝病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关的肝损伤触发。研究已经表明高速泳动族框1 (HMGB1)蛋白在肝纤维化中具有促纤维化作用(参见，例如，Li L
‑
C, 等人, J. Cell. Mol. Med., 2014, 18(12):2331
‑
39)。HMGB1是一种从受损细胞释放的核蛋白，其作为促炎介质发挥作用，并已被证实将肝星形细胞和肝内皮细胞募集到肝损伤部位(Seo等人, Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol., 2013, 305:G838
‑
G848)。据信肝星形细胞通过转化为促进肝脏中的纤维发生活性的增殖性肌成纤维细胞而在肝纤维化的进展中发挥核心作用(参见，Kao YH, 等人, Transplant Proc., 2008, 40:2704
‑
5)。

技术实现思路

[0005]本公开内容的方面涉及使用选择性地抑制HMGB1表达的寡核苷酸治疗受试者的纤维化(例如，肝纤维化)的组合物和方法。在某些实施方案中，已经开发了用于选择性地抑制HMGB1表达的有效RNAi寡核苷酸。因此，在某些实施方案中，本文提供的RNAi寡核苷酸可用于减少HMGB1表达，特别是在肝细胞中的表达，并从而减少或预防纤维化。在某些实施方案中，将掺入有切口的四环结构的RNAi寡核苷酸与GalNAc部分缀合以促进递送至肝脏肝细胞以抑制HMGB1表达从而治疗肝纤维化(参见，例如，实施例3和4，其评价原代猴或人肝细胞中的GalNAc
‑
缀合的HMGB1寡核苷酸)。在某些实施方案中，本文提供的方法涉及使用RNAi寡核苷酸治疗患有或疑似患有肝病症例如胆汁郁积性肝病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的受试者。在其它实施方案中，本公开内容是基于HMGB1 mRNA的关键靶向序列的鉴定，其特别适合使用基于RNAi寡核苷酸的方案实现mRNA敲低。此外，本文开
发了具有特定修饰模式的RNAi寡核苷酸(如表2中的概述)，并且本文提供了特别适用于降低体内HMGB1 mRNA表达水平的RNAi寡核苷酸。
[0006]本公开内容的一些方面提供了用于减少HMGB1表达的寡核苷酸，该寡核苷酸包含15
‑
50个核苷酸长度的有义链和15
‑
30个核苷酸长度的反义链，其中有义链与反义链形成双链体区域，其中有义链包含如SEQ ID NO.: 1
‑
13中的任一个所示的序列，并且其中反义链包含选自SEQ ID NO: 14
‑
26的互补序列。
[0007]在某些实施方案中，所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 27
‑
39中的任一个中所示的序列或由其组成。在某些实施方案中，所述反义链序列由在SEQ ID NO: 14
‑
26中的任一个中所示的序列组成。
[0008]在某些实施方案中，所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 27中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 14中所示的序列。
[0009]在某些实施方案中，所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 28中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 15中所示的序列。
[0010]在某些实施方案中，所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 29中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 16中所示的序列。
[0011]在某些实施方案中，所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 30中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 17中所示的序列。
[0012]在某些实施方案中，所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 31中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 18中所示的序列。
[0013]在某些实施方案中，所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 32中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 19中所示的序列。
[0014]在某些实施方案中，所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 33中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 20中所示的序列。
[0015]在某些实施方案中，所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 34中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 21中所示的序列。
[0016]在某些实施方案中，所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 35中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 22中所示的序列。
[0017]在某些实施方案中，所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 36中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 23中所示的序列。
[0018]在某些实施方案中，所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 37中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 24中所示的序列。
[0019]在某些实施方案中，所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 38中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 25中所示的序列。
[0020]在某些实施方案中，所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 39中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 26中所示的序列。
[0021]在某些实施方案中，所述寡核苷酸包含至少一个修饰的核苷酸。
[0022]在某些实施方案中，本文描述的寡核苷酸的所有核苷酸都被修饰。在某些实施方案中，经修饰的核苷酸包含本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于减少HMGB1的表达的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含15
‑
50个核苷酸长度的有义链和15
‑
30个核苷酸长度的反义链，其中所述有义链与所述反义链形成双链体区域，其中所述有义链包含在SEQ ID NO: 1
‑
13中的任一个中所示的序列，且其中所述反义链包含选自SEQ ID NO: 14
‑
26的互补序列。2.权利要求1的寡核苷酸，其中所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 27
‑
39中的任一个中所示的序列或由其组成。3.权利要求1或权利要求A2的寡核苷酸，其中所述反义链序列由在SEQ ID NO: 14
‑
26中的任一个中所示的序列组成。4.权利要求1的寡核苷酸，其中所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 27中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 14中所示的序列。5.权利要求1的寡核苷酸，其中所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 28中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 15中所示的序列。6.权利要求1的寡核苷酸，其中所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 29中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 16中所示的序列。7.权利要求1的寡核苷酸，其中所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 30中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 17中所示的序列。8.权利要求1的寡核苷酸，其中所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 31中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 18中所示的序列。9.权利要求1的寡核苷酸，其中所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 32中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 19中所示的序列。10.权利要求1的寡核苷酸，其中所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 33中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 20中所示的序列。11.权利要求1的寡核苷酸，其中所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 34中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 21中所示的序列。12.权利要求1的寡核苷酸，其中所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 35中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 22中所示的序列。13.权利要求1的寡核苷酸，其中所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 36中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 23中所示的序列。14.权利要求1的寡核苷酸，其中所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 37中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 24中所示的序列。15.权利要求1的寡核苷酸，其中所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 38中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 25中所示的序列。16.权利要求1的寡核苷酸，其中所述有义链序列包含在SEQ ID NO: 39中所示的序列且所述反义链序列包含在SEQ ID NO: 26中所示的序列。17.权利要求1
‑
16中任一项的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含至少一个修饰的核苷酸。18.权利要求17的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸的所有核苷酸被修饰。19.权利要求17或权利要求18的寡核苷酸，其中所述修饰的核苷酸包含2
′‑
修饰。20.权利要求19的寡核苷酸，其中所述2
′‑
修饰是2
′‑
氟或2
′‑
O
‑
甲基。
21.权利要求17
‑
20中任一项的寡核苷酸，其中有义链的位置1、2、4、6、7、12、14、16、18
‑
27和31
‑
36中的一个或多个、和/或反义链的位置1、4、6、8、9、11、13、15、18和20
‑
22中的一个或多个被2
′‑
O
‑
甲基修饰。22.权利要求21的寡核苷酸，其中有义链的位置1、2、4、6、7、12、14、16、18
‑
27和31
‑
36的全部和反义链的位置1、4、6、8、9、11、13、15、18和20
‑
22的全部被2
′‑
O
‑
甲基修饰。23.权利要求17
‑
22中任一项的寡核苷酸，其中有义链的位置3、5、8
‑
11、13、15和17中的一个或多个和/或反义链的位置2、3、5、7、10、12、14、16、17和19中的一个或多个被2
′‑
氟修饰。24.权利要求23的寡核苷酸，其中有义链的位置3、5、8
‑
11、13、15和17的全部和反义链的位置2、3、5、7、10、12、14、16、17和19的全部被2
′‑
氟修饰。25.权利要求17
‑
20中任一项的寡核苷酸，其中有义链的位置1
‑
7、12
‑
27和31
‑
36中的一个或多个和/或反义链的位置1、4、6、8、9、11
‑
13和15
‑
22中的一个或多个被2
′‑
O
‑
甲基修饰。26.权利要求25的寡核苷酸，其中有义链的位置1
‑
7、12
‑
27和31
‑
36的全部和反义链的位置1、4、6、8、9、11
‑
13和15
‑
22的全部被2
′‑
O
‑
甲基修饰。27.权利要求17
‑
20、25和26中任一项的寡核苷酸，其中有义链的位置8
‑
11中的一个或多个和/或反义链的位置2、3、5、7、10和14中的一个或多个被2
′‑
氟修饰。28.权利要求27的寡核苷酸，其中有义链的位置8
‑
11的全部和反义链的位置2、3、5、7、10和14的全部被2
′‑
氟修饰。29.权利要求17
‑
20中任一项的寡核苷酸，其中有义链的位置1、2、4
‑
7、9、11、14
‑
16、18
‑
27和31
‑
36中的一个或多个和/或反义链的位置1、6、8、9、11、13、15、18和20
‑
22中的一个或多个被2
′‑
O
‑
甲基修饰。30.权利要求29的寡核苷酸，其中有义链的位置1、2、4
‑
7、9、11、14
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：迪克纳制药公司，
类型：发明
国别省市：