一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用。所述菌株为命名为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）ZJK2，于2020年6月8日保藏在中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.20037。本发明专利技术菌株及经过液体发酵制备得到的菌体、无菌体发酵液，均可对灰霉病或炭疽病具有良好的拮抗效果；本发明专利技术生物制剂可对桑树、葡萄和草莓等灰霉病及炭疽病起到显著的防治效果，与传统化学药剂相比，其具绿色安全，环境友好等优势，在灰霉病、炭疽病的生物防治方面拥有广阔的应用前景。景。景。

【技术实现步骤摘要】
一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用


[0001]本专利技术属于微生物学科领域，具体涉及一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]目前，对于灰霉病和炭疽病的防治主要以化学手段为主.而灰霉菌和炭疽病被认为很容易产生抗药性。在防治上多采用速克灵等进口药物喷雾，收到较好的防治效果，但在连续使用的情况下，防效降低，易使灰霉病菌和灰霉病产生抗药性，甚至产生多重抗药性，浙渐失去对灰霉病和炭疽病的控制能力。而且在使用这些化学农药时，往往会造成环境污染和生态破坏。同时，这些化学农药都有一定毒性，人们若长期食用这些残留有化学农药的果蔬，可能会严重损害人体健康。
[0003]当前生物菌剂防治逐渐引起人们的关注和重视。与化学杀菌剂明显不同，微生物防治可以降低病原菌抗药性产生的机率，减少环境污染，有利于生态平衡，生产工艺简单。贝莱斯芽孢杆菌作为芽孢杆菌中新发现的一个种。在自然界中广泛分布，可从海洋和河流沉积物、土壤、植株根际、植物组织中分离得到，其对人畜无害，对环境无污染，并且能产生对多种病原微生物有拮抗作用的次生代谢物。近年来，关于贝莱斯芽孢杆菌的研究主要集中在饲料、医药、纺织、水产、污水处理、植物保护等领域。微生物菌剂防治是一种环境友好型防治保护地农业病害的途径，把微生物防治与病害综合治理联系起来，对绿色农业的可持续发展有着重要的意义和深远的影响。因此，筛选具有优良生防能力的贝莱斯芽孢杆菌具有广阔的应用前景。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中的不足，本专利技术提供了一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用，所筛选的贝莱斯芽孢杆菌为桑树、草莓和葡萄的灰霉病或炭疽病的防治与治疗提供良好的应用前景。
[0005]为解决现有技术问题，本专利技术采取的技术方案为：
[0006]一种贝莱斯芽孢杆菌，命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZJK2，于2020年6月8日保藏在中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.20037。
[0007]作为改进的是，所述贝莱斯芽孢杆菌的菌落呈淡黄色，形状为圆形且直径较小，表面光滑水润、有凸起，较透明，边缘整齐，能够形成芽孢；可在pH值为7～7.5、生长温度为28～37℃的环境中生长。
[0008]作为改进的是，所述贝莱斯芽孢杆菌为革兰氏阳性杆菌。
[0009]作为改进的是，所述贝莱斯芽孢杆菌对桑树、草莓或葡萄的灰霉病具有拮抗作用。
[0010]作为改进的是，所述贝莱斯芽孢杆菌对桑树、草莓或葡萄的炭疽病具有拮抗作用。
[0011]上述贝莱斯芽孢杆菌在作为桑树、草莓或葡萄的灰霉病拮抗菌上的应用。
[0012]上述贝莱斯芽孢杆菌在作为桑树、草莓或葡萄的灰霉病炭疽病上的应用。
[0013]有益效果：
[0014]分离的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZJK2对桑树、草莓或葡萄灰霉病和炭疽病起到较好的防治作用；且该菌的繁殖速度快，抗逆能力强，安全无毒，不会对环境产生污染，是一种理想的生物杀菌剂；该菌剂的制备方法简单，能够人工大规模培养，易于实现工业化生产，具有良好的开发应用前景。
附图说明
[0015]图1为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZJK2菌株的菌落形态；
[0016]图2为基于16S rRNA基因序列的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZJK2系统发育树；
[0017]图3为稀释菌液对草莓叶片灰霉病防治效果。
具体实施方式
[0018]下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。
[0019]实施例1
[0020](1)从镇江句容白兔镇采集的草莓灰霉病果中，首先切取患有灰霉病的草莓果实的未患病部分，用0.1％氯化汞溶液对其表面进行消毒3min，然后在无菌的条件下进行研磨；用梯度稀释法在LB培养基中进行筛选；
[0021](2)平板上出现单一菌落后，根据菌落形态、颜色的差异区分不同菌落，用接种环分别挑取不同菌落在PDA固体培养基平板上划线培养；
[0022](3)进行拮抗菌初筛：取大小基本一致的灰霉菌块置于PDA平板中央，用接种环取划线培养的细菌在霉菌菌块周围划一条较短的线，在该平板上共做四种细菌的划线，置于30℃恒温培养箱培养5天，选出对病原菌生长有抑制作用，且被抑制病原菌菌丝边缘平齐，拮抗作用持久的细菌；
[0023](4)进入拮抗菌复筛：采用对峙培养法，取大小一致的霉菌菌块置于PDA平板中央，用接种环挑取拮抗性好的细菌点接在距平板中央3cm处的4个角点上，置于30℃培养箱培养3天，观察抑菌圈大小(细菌菌落中心至病原菌菌丝边缘)；
[0024](5)对抑菌圈较大的拮抗菌用平板画线法进行纯化，先在平板上画一条线，然后将接种环上残菌烧掉，待接种环冷却后从上一条线的末端开始再画一条线，按此步骤连续画4
‑
5条线，倒置于37℃恒温培养箱培养1至2天，长出单一菌落后按上述对峙培养法再做一次对峙实验；
[0025](6)重复上述步骤(5)，即可培养出下一代细菌，连续继代培养3
‑
4代，得到拮抗性能较好的菌株。
[0026]本专利技术所用的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZJK2，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏号为CGMCC NO.20037，保藏日期为2020年6月8日。
[0027]实施例2
[0028]将实施例1分离得到的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZJK2在LB培养基上进行恒温培养，菌落颜色呈淡黄色，形状为圆形且直径较小，表面光滑水润、有凸起，较透
明，边缘整齐，见图1。
[0029]生理生化实验表明接触酶试验、VP试验、柠檬酸盐利用试验均为阳性，MR试验、H2S产生试验均为阴性，详见表1。
[0030]表1生防菌ZJK2生理生化试验结果
[0031][0032]注:“+”表示阳性；
“‑”
表示阴性
[0033]提取贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZJK2的DNA，经PCR反应确定片段后进行16S rRNA基因测序，序列在NCBI网站Blast比对并以构建系统发育树(图2)，从发育树结果结合形态观察和生理生化实验，确定拮抗菌ZJK2为贝莱斯芽孢杆菌。
[0034]实施例3
[0035]首先，对采集到的草莓植株上的叶子进行前处理，将叶子用水充分浸泡以去除叶片表面一些杂质，并用75％浓度酒精棉球轻轻擦拭叶片表面，对叶片表面进行消毒。随后给草莓叶片接种上灰葡萄孢菌，使其感染灰霉病，具体方法为用无菌针在叶片主脉两边各划5道1cm长的伤口，再将叶片浸泡在事先调配好的1
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106个/mL灰葡萄孢子悬浊液中5s后拿出，自然晾干2h。最后将晾干后的草莓叶片本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，命名为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）ZJK2，于2020年6月8日保藏在中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 20037。2.根据权利要求1所述的一种贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌的菌落呈淡黄色，形状为圆形且直径较小，表面光滑水润、有凸起，较透明，边缘整齐，能够形成芽孢；可在pH值为7~7.5、生长温度为28~37℃的环境中生长。3.根据权利要求1所述的一种贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，所述贝...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨统一，翟德丽，黄锡春，胡毅翀，刘典三，张正杨，谌剑，许明敏，杨庆根，邱荣俊，徐信超，赵玉媛，李静，
申请(专利权)人：江苏科技大学，
类型：发明
国别省市：