一种分子包裹萘莫司他及其在治疗三阴性乳腺癌中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种分子包裹萘莫司他及其在治疗三阴性乳腺癌中的应用，属于医药技术领域。萘莫司他与递送载体mATF

【技术实现步骤摘要】
一种分子包裹萘莫司他及其在治疗三阴性乳腺癌中的应用


[0001]本专利技术属于医药
，具体涉及一种分子包裹萘莫司他及其在治疗三阴性乳腺癌中的应用。

技术介绍

[0002]萘莫司他（Nafamostat，NM）是一种成熟的合成丝氨酸蛋白酶抑制剂，其结构式为：该药物已被证明是弥散性血管内凝血，全身性炎症反应和胰腺炎的有效治疗药物。据报道萘莫司他还通过抑制核因子κB（NF
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κB）活化在实验性胰腺癌模型中产生有效结果。由于萘莫司他已经被批准作为治疗药物并且其安全性已经确定为高剂量，因此其在一些癌症类型中的抗癌活性在与化疗或其他抗癌联合时可产生有益效果。在具有高相关死亡率的胰腺癌中，体外评估了萘莫司他与吉西他滨或奥沙利铂的组合的协同作用，然而，尚未有专利报道萘莫司他在乳腺癌中的治疗作用。
[0003]尿激酶（uPA）是一种细胞外的丝氨酸蛋白水解酶，血浆中的生理浓度约为 2 ng/ml，其半衰期为3
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5 min。尿激酶参与了许多生理和病理过程，如纤维蛋白块的降解、炎症细胞的迁移、创伤的愈合、受精过程、血管外血肿的消散、肿瘤细胞的侵袭和转移等。目前关于尿激酶的研究主要集中在血栓溶解和肿瘤转移两个方面。一些肿瘤细胞能够合成并分泌尿激酶激活细胞周围的纤溶酶原来降解肿瘤细胞的胞外基质和基底膜，肿瘤细胞因失去固定而进行迁移，导致肿瘤细胞的侵袭和转移，形成恶性肿瘤。研究表明，尿激酶及其受体（uPAR）是抗癌药物的一个有效靶点，抑制uPA/uPAR的相互作用能够抑制肿瘤的侵袭和转移。因此尿激酶的研究对于癌症的临床预后和抗癌转移具有重要的意义。
[0004]乳腺癌是一种复杂且异质性的恶性疾病，在全世界范围内导致女性癌症相关死亡的主要部分。其中三阴性乳腺癌（TNBC）占所有乳腺癌的10
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20％。与其他类型的乳腺癌相比，这种类型的癌症在性质上具有高度侵袭性，并且导致转移性病例的比例较高。不幸的是，因为尚未确定TNBC的经验证的分子靶标，即使是目前标准的化学治疗方案通常也会受到短期反应和抵抗有效性的限制。因此，TNBC 的划时代治疗的发展代表了提高乳腺癌患者总体存活率的最大挑战之一。根据最近的研究，涉及化学治疗药物和新型靶向药物（如血管生成和表皮生长因子受体抑制剂）的联合治疗方法可能是一种有益的策略。此外，了解癌症侵袭和转移的机制以及控制转移的药物的开发可能会降低 TNBC 相关的死亡率。
[0005]在本专利技术中，通过药物载体与萘莫司他形成大分子复合物的方式，来提高萘莫司他靶向肿瘤的能力以及防止其被水解。我们采用重组蛋白mATF
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HSA作为萘莫司他的药物载体，在大量的药物载体中，人血清白蛋白（HSA）是一种理想的药物载体，其在人体血液中大
量存在，是一种天然的药物载体，这就避免了非天然药物载体所造成的生物相容性差的问题。尿激酶是尿激酶受体的天然配体，它们之间有非常强的结合力（解离常数在nM数量级以下），ATF结构域是尿激酶中主要与受体结合的区域，对尿激酶与尿激酶受体的结合起到主导的作用。由于肿瘤细胞会过量表达尿激酶受体，所以，可以利用ATF特异性结合到肿瘤部位的尿激酶受体，起到对肿瘤的靶向作用。另外，我们对萘莫司他进行的负载是通过非共价的结合方式，这就避免了萘莫司他结构的改变所造成的药物代谢和药物疗效方面的不确定性。该专利技术通过制备mATF
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HSA:NM这一大分子复合物来提高NM对三阴性乳腺癌的治疗效果，为三阴性乳腺癌的药物研发提供一个新思路。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供一种分子包裹萘莫司他及其在治疗三阴性乳腺癌中的应用。制备mATF
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HSA:NM这一分子包裹萘莫司他的大分子复合物，验证mATF
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HSA:NM对三阴性乳腺癌的增殖和转移的抑制作用，提供萘莫司他的一种新应用，即在治疗乳腺癌方面的治疗应用。提供了萘莫司他在制备治疗乳腺癌的药物方面的应用，并利用递送载体mATF
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HSA提高该药物在治疗乳腺癌上的药用价值。
[0007]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：一种分子包裹萘莫司他大分子复合物mATF
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HSA:NM，以mATF
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HSA为递送载体，萘莫司他埋在mATF
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HSA的HSA内部，mATF
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HSA与萘莫司他结合形成大分子复合物mATF
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HSA:NM。
[0008]上述分子包裹萘莫司他大分子复合物mATF
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HSA:NM利用分子包裹方法进行制备，包括以下步骤：（1）将mATF
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HSA目的基因片段（核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示）连接至pPICZαA载体上构建获得pPICZα
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mATF
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HSA重组质粒，pPICZα
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mATF
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HSA重组质粒转入毕赤酵母菌株X
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33构建毕赤酵母基因工程菌X
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33，甲醇诱导毕赤酵母基因工程菌X
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33表达重组蛋白mATF
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HSA，纯化获得重组蛋白mATF
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HSA（氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示）；（2）将mATF
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HSA在20 mM Tris
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HCl，150 mM NaCl，pH8.0溶液中搅拌扩散，按1:5~1:50的摩尔比例逐滴滴加萘莫司他，在4℃冰箱内搅拌12~48小时；（3）反应结束后用10 kDa截留率的透析袋在PBS溶液中对上述产物进行搅拌透析，达到除去未结合的萘莫司他，并用PBS替换mATF
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HSA原始Tris
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HCl溶液的目的；（4）步骤（3）的透析产物mATF
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HSA:NM，用10 kDa截留率的超滤浓缩管在3500 rpm条件下进行浓缩；（5）通过测定荧光变化检测mATF
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HSA与萘莫司他成功结合。
[0009]一种包含上述分子包裹萘莫司他大分子复合物mATF
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HSA:NM的在制备预防和/或治疗乳腺癌药物中的应用。
[0010]上述应用中所述乳腺癌为三阴性乳腺癌。
[0011]上述应用中大分子复合物mATF
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HSA:NM通过抑制尿激酶介导三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。所述乳腺癌细胞包括人源三阴性乳腺癌MDA
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MB231、鼠源三阴性乳腺癌4T1。
[0012]一种包含上述分子包裹萘莫司他大分子复合物mATF
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HSA:NM的预防和/或治疗乳腺癌的药物。所述药物的剂型包括但不限于片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、注射剂。
nM ~ 0.005080526 nM，3倍梯度稀释)的萘莫司他预先孵育15分钟，然后加入80 μM发光底物S2444（Chro本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分子包裹萘莫司他大分子复合物mATF
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HSA:NM，其特征在于：以mATF
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HSA为递送载体，萘莫司他埋在mATF
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HSA的HSA内部，mATF
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HSA与萘莫司他结合形成大分子复合物mATF
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HSA:NM。2.根据权利要求1所述的分子包裹萘莫司他大分子复合物mATF
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HSA:NM的制备方法，其特征在于：利用分子包裹方法进行制备，包括以下步骤：（1）将mATF
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HSA目的基因片段连接至pPICZαA载体上构建获得pPICZα
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mATF
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HSA重组质粒，pPICZα
‑
mATF
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HSA重组质粒转入毕赤酵母菌株X
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33构建毕赤酵母基因工程菌X
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33，甲醇诱导毕赤酵母基因工程菌X
‑
33表达重组蛋白mATF
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HSA，纯化获得重组蛋白mATF
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HSA；（2）将mATF
‑
HSA在20 mM Tris
‑
HCl, 150 mM NaCl, pH8.0溶液中搅拌扩散，按1:5~1:50的...

【专利技术属性】
技术研发人员：江龙光，周阳，黄明东，雪光浦，李翰林，陈丹，袁彩，
申请(专利权)人：福州大学，
类型：发明
国别省市：