石斛来源外泌体样囊泡及其制备和在改善脱发症中的应用制造技术

本发明专利技术公开了石斛来源外泌体样囊泡及其制备和在改善脱发症中的应用。石斛来源外泌体样囊泡预防、改善脱发症的效果明显高于石斛提取物。该外泌体样囊泡作为一种天然的纳米级囊泡结构，具有良好的生物相容性和口服安全性，并可以跨越生物学屏障，相对于一般植物提取物，对活性成分的传递具有更高促进作用，植物来源外泌体样囊泡可以更好的穿过皮肤屏障作用于毛囊干细胞。此外，本文采用差速离心法结合密度梯度离心从石斛中获得石斛外泌体样囊泡，进一步提高了纯度，增加了其预防、改善脱发症的效果。症的效果。症的效果。

【技术实现步骤摘要】
石斛来源外泌体样囊泡及其制备和在改善脱发症中的应用


[0001]本专利技术属于精细化工领域，涉及石斛来源外泌体样囊泡及其制备和在改善脱发症中的应用，具体涉及石斛来源外泌体样囊泡及其制备和在预防、改善脱发症方面的应用。

技术介绍

[0002]脂溢性脱发(seborrheic alopecia，SA)是临床最为常见的脱发性疾病。现代医学认为其是一种雄激素依赖的常染色体显性多基因遗传性禿发，雄激素过多或对雄激素敏感增加是该病发生的主要因素，SA的发生与睾酮(testosterone,T)及其代谢产物二氢睾酮(Dihydrotestosterone，DHT)和雄激素受体(Androgen receptor，AR)的水平增高直接相关，而5α
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还原酶(5α
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reductase，5a
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R)在其中起到重要作用，另外长期精神紧张、饮食失调、心理失衡及病菌感染为诱发或加重本病的重要因素。
[0003]治疗脱发方法包括自体毛囊移植术、口服非那雄胺、外用米诺地尔等，但存在副作用、停药后脱发进程会继续，因此探索新的有效的方法很有必要。
[0004]中医认为脱发的原因为肾血亏虚、身体机能失调引起。因此在治疗脱发问题上往往采用固肾补血的方法来治疗。肺开窍于皮毛，发为血之余，中医将脱发分虚与实二类，虚指气血不足，肝肾亏虚，实指血热或血瘀。
[0005]石斛又名仙斛兰韵、不死草、还魂草、是我国最珍贵的中药材之一被尊为「中华九大仙草之首」、素有「药中黄金」之美称。其茎入药，属补益药中的补阴药，具有益胃生津，滋阴清热效果。
[0006]外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30
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150nm)，现今，其特指直径在40
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100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。至今为止，科学家已经相继从生姜、葡萄柚、梨、柠檬等数十种果蔬中分离得到外泌体样囊泡(exosome
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like nanoparticles，ELNs)，对其结构和化学组成进行了表征，并对其生理功能进行了评价，发现果蔬来源的外泌体样囊泡具有递送药物的潜在载体功能，显示出了广阔的应用前景。
[0007]目前，外泌体样囊泡通常采用离心法、超滤法、排阻色谱法、免疫亲和法、聚合物，沉淀法以及微流控技术获得。离心法是根据外泌体样囊泡的密度和尺寸进行分离的一种方法，目前最为常用，离心法包括差速离心法和密度梯度离心法，差速离心法是通过逐步提高离心速度，依次去除较大的颗粒，最终通过超高的离心速度得到外泌体样囊泡，为了进一步提高纯度，可在差速离心基础上对得到的外泌体样囊泡进行再次密度梯度离心。
[0008]从获得手段可知，植物来源外泌体样囊泡与一般植物提取物具有明显区别，植物来源外泌体样囊泡是石斛内具有的直径为20
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500nm囊泡结构，植物提取物往往为某类成分，如石斛中的石斛多糖。
[0009]目前暂无对石斛外泌体样囊泡加以应用的报道。

技术实现思路

[0010]本专利技术的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供石斛来源外泌体样囊泡及其制备和在改善脱发症中的应用。
[0011]本文采用差速离心法结合密度梯度离心从石斛中获得石斛外泌体样囊泡，制备工艺与传统的石斛提取物具有明显不同，研究发现，通过次此工艺制备的石斛外泌体样囊泡具有预防、改善脱发症方面的效果。
[0012]为实现上述目的，本专利技术的技术方案为:
[0013]一种石斛来源外泌体样囊泡，其从石斛的茎部位中分离得到。
[0014]作为优选，所述石斛选自铁皮石斛、金钗石斛、细茎石斛、小粉花石斛、鼓槌石斛、马鞭石斛、黄草石斛、环草石斛，蝴蝶石斛中的一种或多种。
[0015]进一步优选，所述石斛选自：铁皮石斛、金钗石斛、细茎石斛中的一种或多种。
[0016]在某些具体的实施方式中，石斛来源外泌体样囊泡，通过以下步骤分离得到：
[0017]1)粉碎石斛茎获得石斛茎汁液；
[0018]2)离心分离所述石斛茎汁液获得上清液；
[0019]3)密度梯度离心步骤2)所得上清液，取密度范围为1.00
‑
1.20g/ml的级层继续超速离心，即得颗粒状的石斛来源外泌体样囊泡。
[0020]在某些更具体的实施方式中，步骤2)所述的离心具体为将所述石斛茎汁液在4℃，500
‑
1000g条件下离心10
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20min获得第一上清液；然后，将第一上清液在4℃，2000
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4000g条件下再次离心15
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30分钟获得上清液。
[0021]在某些更具体的实施方式中，所述步骤3)中的密度梯度离心具体为：先将80％蔗糖溶液、30％蔗糖溶液、所述上清液添加至超速离心管中，在4℃、80,000g条件下密度梯度离心4h，取位于80％蔗糖溶液层和30％蔗糖溶液层之间的分离层；再将分离层配置成50％碘克沙醇溶液，并将其与35％碘克沙醇溶液、20％碘克沙醇溶液、150mM NaCl/20mM HEPES溶液依次添加至超速离心管中，在4℃和220,00g下进行密度梯度离心3小时。
[0022]在某些更具体的实施方式中，所述步骤3)超速离心具体为将密度范围为1.00
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1.20g/ml的级层稀释后，在4℃和120,000g下超速离心1小时。
[0023]本专利技术还提供了一种石斛来源外泌体样囊泡在预防、改善脱发症方面的应用。
[0024]作为优选，可以将其用于头部护理产品。
[0025]本专利技术的有益效果在于：
[0026]石斛来源外泌体样囊泡预防、改善脱发症的效果明显高于石斛提取物，可能是由于植物来源外泌体样囊泡作为一种天然的纳米级囊泡结构，具有良好的生物相容性和口服安全性，并可以跨越生物学屏障，相对于一般植物提取物，对活性成分的传递具有更高促进作用，植物来源外泌体样囊泡可以更好的穿过皮肤屏障作用于毛囊干细胞。此外，本文采用差速离心法结合密度梯度离心从石斛中获得石斛外泌体样囊泡，进一步提高了纯度。
[0027]本专利技术所公开的石斛来源外泌体样囊泡具有较好的预防、改善脱发症的效果。
附图说明
[0028]图1为试验例1中睾酮5α
‑
还原酶的抑制作用对比图；
[0029]图2为试验例2中毛乳头细胞生长促进作用对比图；
[0030]图3为试验例3中促进FGF
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7基因、VEGF基因及BMP
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2基因的mRNA的表达的对比图。
具体实施方式
[0031]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种石斛来源外泌体样囊泡，其特征在于，从石斛的茎部位中分离得到。2.根据权利要求1所述的石斛来源外泌体样囊泡，其特征在于，所述石斛选自铁皮石斛、金钗石斛、细茎石斛、小粉花石斛、鼓槌石斛、马鞭石斛、黄草石斛、环草石斛，蝴蝶石斛中的一种或多种。3.根据权利要求2所述的石斛来源外泌体样囊泡，其特征在于，所述石斛选自：铁皮石斛、金钗石斛、细茎石斛中的一种或多种。4.根据权利要求1
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3任一所述的石斛来源外泌体样囊泡，其特征在于，通过以下步骤分离得到：1)粉碎石斛茎获得石斛茎汁液；2)离心分离所述石斛茎汁液获得上清液；3)密度梯度离心步骤2)所得上清液，取密度范围为1.00
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1.20g/ml的级层继续超速离心，即得颗粒状的石斛来源外泌体样囊泡。5.根据权利要求4所述的石斛来源外泌体样囊泡，其特征在于，步骤2)所述的离心具体为将所述石斛茎汁液在4℃，500
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1000g条件下离心10
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20min获得第一上清液；然后，将第一...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱云，周秋娜，金炫延，金荣熙，申彦晟，金延埈，
申请(专利权)人：科丝美诗中国化妆品有限公司，
类型：发明
国别省市：