干血片样本采集质量的监控方法技术

本发明专利技术公开了干血片样本采集质量的监控方法，属于代谢组学干血片样本质量控制技术领域。以甘氨鹅脱氧胆酸和/或甘油三酯TAG 56:4在干血片样本中的相对含量作为质检指标，当甘氨鹅脱氧胆酸的相对含量小于式(I)表示的X1，和/或甘油三酯TAG 56:4的相对含量小于式(II)表示的X2时，干血片样本的采集质量符合要求。本发明专利技术还提供干血片样本代谢组学检测结果的评价方法，可以快速、准确地对代谢组学干血片样本的采集质量进行判断和监控，并保证干血片样本代谢组学检测结果的准确性和可靠性。样本代谢组学检测结果的准确性和可靠性。样本代谢组学检测结果的准确性和可靠性。

【技术实现步骤摘要】
干血片样本采集质量的监控方法


[0001]本专利技术属于血液(尤指指尖血)样本采集中干血片样本采集质量控制
，具体涉及一种利用甘氨鹅脱氧胆酸(Glycochenodeoxycholic acid)和/或甘油三酯TAG 56:4作为判断干血片样本采集质量的质检指示物的应用，还涉及通过利用甘氨鹅脱氧胆酸和/或甘油三酯TAG 56:4在干血片样本中的相对含量为指标进行判断的干血片样本采集质量的监控方法以及干血片样本代谢组学检测结果的评价方法。

技术介绍

[0002]血液是研究、诊断、健康和药物监测中最常用的生物样本，也是代谢组学研究的常用样本，检测其中的代谢物已成为诊断疾病和评估健康水平等的有效手段。随着精准医疗、个性化治疗和健康管理等多种代谢组学应用场景的扩展，已提出多种血液样本采集方式的应用需求，主要包括末梢采血、静脉采血、动脉采血等血液检验的常见样本采集方式，其中静脉采血最为常用，末梢采血操作最为简单。指尖血干血片采样作为末梢采血的一种方式，与静脉采血相比，具有很多优势：1.微创，成本低；2.样本需求量少；3.在常规环境下稳定，方便运输和储存；4.操作简单，简单培训即可操作，为居家检测提供了可能性；5.适合医疗条件不足或偏远地区的采样和多个中心的大队列研究。
[0003]尽管指尖血干血片采样操作简单，但相对于其他采血方式更容易受到环境、个体差异(出血量)、饮食和组织液及细胞内液混入等情况的影响。因此，指尖血干血片样本的采集需标准化，并把握质控关键点，以保证样本的质量和稳定性。然而，目前尚未有针对血液代谢组学研究的指尖血干血片样本采集中质量监控的方法，尤其缺少基于干血片样本采集质量对样本中代谢组学检测结果是否可用的评价方法和判定标准。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本专利技术的一个方面提供一种干血片样本采集质量的监控方法，其包括对采集后的干血片样本中的甘氨鹅脱氧胆酸或/和甘油三酯TAG 56:4及外加的各自的标定物质的信号强度(以液相色谱质谱(LC
‑
MS)和气相色谱质谱(GC
‑
MS)之一检测的峰面积或峰高表示)进行检测，以甘氨鹅脱氧胆酸及其标定物质赤霉酸的信号强度比值表示的甘氨鹅脱氧胆酸在干血片样本中的相对含量(M)，或/和甘油三酯TAG 56:4及其标定物质磷脂酰乙醇胺PE(17:0/17:0)的信号强度比值表示的甘油三酯TAG 56:4在干血片样本中的相对含量(N)作为监控指标，当M或/和N满足某数值时，判定干血片样本的采集质量符合要求。
[0005]上述监控方法中，其中当所述甘氨鹅脱氧胆酸在干血片样本中的相对含量M小于由以下式(I)表示的X1，优选不大于由下式(II)表示的X2，进一步优选处于由以下式(III)表示的X3的范围内时，所述干血片样本的采集质量符合要求(例如：用于采集所述干血片样本的受试者处于空腹状态，优选至少禁食12小时)：
[0006][0007][0008][0009]式(I)中，K1＝0.413；式(II)中，K2＝0.168；式(III)中，K3＝0.051～0.168；
[0010]式(I)、(II)和(III)中，Ra为0.84μg/mL，R1表示实际上机检测时样品中赤霉酸的上机终浓度(检测浓度)，其单位为μg/mL；
[0011]优选地，其中当采用液相色谱质谱联用仪(LC
‑
MS)测定甘氨鹅脱氧胆酸在干血片样本中的相对含量时，具体包括以下步骤：
[0012]T1)将干血片样本置于冷(甲基叔丁基醚:甲醇，体积比3:1)溶液(在该溶液中预先加入甘氨鹅脱氧胆酸的标定物质赤霉酸)中，涡旋混匀提取血液样品，获得第一样品提取液；
[0013]T2)向第一样品提取液中加入(甲醇:水，体积比3:1)溶液，涡旋并离心分层；
[0014]T3)样品分层后，取下层水相的澄清部分至离心管中，并向其中加入冰甲醇沉淀蛋白质，蛋白质沉淀后离心，取上清液转移至新的离心管中，并干燥过夜；
[0015]T4)向步骤T3)干燥后的离心管中加入水，并孵化；
[0016]T5)孵化后，将离心管涡旋混匀，并在超声处理后离心；
[0017]T6)取步骤T5)离心后的上清液作为水相，上机检测获得甘氨鹅脱氧胆酸及其标定物质赤霉酸的质谱数据；
[0018]T7)由步骤T6)上机检测获得的质谱数据中的峰面积或峰高作为检测信号强度，计算出干血片样本中甘氨鹅脱氧胆酸的相对含量。
[0019]上述监控方法中，其中当所述甘油三酯TAG 56:4在干血片样本中的相对含量N小于由以下式(IV)表示的Y1，优选不大于由以下式(V)表示的Y2，进一步优选处于由以下式(VI)表示的Y3的范围内时，所述干血片样本的采集质量符合要求(例如：用于采集所述干血片样本的受试者处于空腹状态，优选至少禁食12小时)：
[0020][0021][0022][0023]式(IV)中，L1＝0.0295；式(V)中，L2＝0.0253；式(VI)中，L3＝0.0129～0.0253；
[0024]式(IV)、(V)和(VI)中，Rb为2.33μg/mL，R2表示实际上机检测时样品中磷脂酰乙醇胺PE(17:0/17:0)的上机终浓度(检测浓度)，其单位为μg/mL；
[0025]优选地，其中当采用液相色谱质谱联用仪(LC
‑
MS)测定甘油三酯TAG 56:4在干血片样本中的相对含量时，具体包括以下步骤：
[0026]S1)将干血片样本置于冷(甲基叔丁基醚:甲醇，体积比3:1)溶液(在该溶液中预先加入甘油三酯TAG 56:4的标定物质磷脂酰乙醇胺PE(17:0/17:0))中，涡旋混匀提取血液样
品，获得第二样品提取液；
[0027]S2)向第二样品提取液中加入(甲醇:水，体积比3:1)溶液，涡旋并离心分层；
[0028]S3)样品分层后，取上层有机相至离心管中；
[0029]S4)有机相干燥后，加入(乙腈:异丙醇，体积比3:1)溶液，孵化后涡旋混匀，并在超声处理后离心；
[0030]S5)取步骤S4)离心后的上清液作为有机相，上机检测获得甘油三酯TAG 56:4及其标定物质磷脂酰乙醇胺PE(17:0/17:0)的质谱数据；
[0031]S6)由步骤S5)上机检测获得的质谱数据中的峰面积或峰高作为检测信号强度，计算出干血片样本中甘油三酯TAG 56:4的相对含量。
[0032]上述监控方法中，其中当所述甘氨鹅脱氧胆酸在干血片样本中的相对含量M小于由式(I)表示的X1，优选不大于式(II)表示的X2，进一步优选处于式(III)表示的X3的范围内，且
[0033]所述甘油三酯TAG 56:4在干血片样本中的相对含量N小于由式(IV)表示的Y1，优选不大于式(V)表示的Y2，进一步优选处于式(VI)表示的Y3的范围内时，所述干血片样本的采集质量符合要求(例如：用于采集所述干血片样本的受试者处于空腹状本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.干血片样本采集质量的监控方法，其包括对采集后的干血片样本中的甘氨鹅脱氧胆酸或/和甘油三酯TAG 56:4及外加的各自的标定物质的信号强度(以液相色谱质谱(LC
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MS)和气相色谱质谱(GC
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MS)之一检测的峰面积或峰高表示)进行检测，以甘氨鹅脱氧胆酸及其标定物质赤霉酸的信号强度比值表示的甘氨鹅脱氧胆酸在干血片样本中的相对含量(M)，或/和甘油三酯TAG 56:4及其标定物质磷脂酰乙醇胺PE(17:0/17:0)的信号强度比值表示的甘油三酯TAG 56:4在干血片样本中的相对含量(N)作为监控指标，当M或/和N满足某数值时，判定干血片样本的采集质量符合要求。2.根据权利要求1所述的监控方法，其中当所述甘氨鹅脱氧胆酸在干血片样本中的相对含量M小于由以下式(I)表示的X1，优选不大于由下式(II)表示的X2，进一步优选处于由以下式(III)表示的X3的范围内时，所述干血片样本的采集质量符合要求(例如：用于采集所述干血片样本的受试者处于空腹状态，优选至少禁食12小时)：优选至少禁食12小时)：优选至少禁食12小时)：式(I)中，K1＝0.413；式(II)中，K2＝0.168；式(III)中，K3＝0.051～0.168；式(I)、(II)和(III)中，Ra为0.84μg/mL，R1表示实际上机检测时样品中赤霉酸的上机终浓度(检测浓度)，其单位为μg/mL；优选地，其中当采用液相色谱质谱联用仪(LC
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MS)测定甘氨鹅脱氧胆酸在干血片样本中的相对含量时，具体包括以下步骤：T1)将干血片样本置于冷(甲基叔丁基醚:甲醇，体积比3:1)溶液(在该溶液中预先加入甘氨鹅脱氧胆酸的标定物质赤霉酸)中，涡旋混匀提取血液样品，获得第一样品提取液；T2)向第一样品提取液中加入(甲醇:水，体积比3:1)溶液，涡旋并离心分层；T3)样品分层后，取下层水相的澄清部分至离心管中，并向其中加入冰甲醇沉淀蛋白质，蛋白质沉淀后离心，取上清液转移至新的离心管中，并干燥过夜；T4)向步骤T3)干燥后的离心管中加入水，并孵化；T5)孵化后，将离心管涡旋混匀，并在超声处理后离心；T6)取步骤T5)离心后的上清液作为水相，上机检测获得甘氨鹅脱氧胆酸及其标定物质赤霉酸的质谱数据；T7)由步骤T6)上机检测获得的质谱数据中的峰面积或峰高作为检测信号强度，计算出干血片样本中甘氨鹅脱氧胆酸的相对含量。3.根据权利要求1所述的监控方法，其中当所述甘油三酯TAG 56:4在干血片样本中的相对含量N小于由以下式(IV)表示的Y1，优选不大于由以下式(V)表示的Y2，进一步优选处于由以下式(VI)表示的Y3的范围内时，所述干血片样本的采集质量符合要求(例如：用于采集所述干血片样本的受试者处于空腹状态，优选至少禁食12小时)：
式(IV)中，L1＝0.0295；式(V)中，L2＝0.0253；式(VI)中，L3＝0.0129～0.0253；式(IV)、(V)和(VI)中，Rb为2.33μg/mL，R2表示实际上机检测时样品中磷脂酰乙醇胺PE(17:0/17:0)的上机终浓度(检测浓度)，其单位为μg/mL；优选地，其中当采用液相色谱质谱联用仪(LC
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MS)测定甘油三酯TAG 56:4在干血片样本中的相对含量时，具体包括以下步骤：S1)将干血片样本置于冷(甲基叔丁基醚:甲醇，体积比3:1)溶液(在该溶液中预先加入甘油三酯TAG 56:4的标定物质磷脂酰乙醇胺PE(17:0/17:0))中，涡旋混匀提取血液样品，获得第二样品提取液；S2)向第二样品提取液中加入(甲醇:水，体积比3:1)溶液，涡旋并离心分层；S3)样品分层后，取上层有机相至离心管中；S4)有机相干燥后，加入(乙腈:异丙醇，体积比3:1)溶液，孵化后涡旋混匀，并在超声处理后离心；S5)取步骤S4)离心后的上清液作为有机相，上机检测获得甘油三酯TAG 56:4及其标定物质磷脂酰乙醇胺PE(17:0/17:0)的质谱数据；S6)由步骤S5)上机检测获得的质谱数据中的峰面积或峰高作为检测信号强度，计算出干血片样本中甘油三酯TAG 56:4的相对含量。4.根据权利要求1所述的监控方法，其中当所述甘氨鹅脱氧胆酸在干血片样本中的相对含量M小于由权利要求2提及的式(I)表示的X1，优选不大于式(II)表示的X2，进一步优选处于式(III)表示的X3的范围内，且所述甘油三酯TAG 56:4在干血片样本中的相对含量N小于由权利要求3提及的式(IV)表示的Y1，优选不大于式(V)表示的Y2，进一步优选处于式(VI)表示的Y3的范围内时，所述干血片样本的采集质量符合要求(例如：用于采集所述干血片样本的受试者处于空腹状态，优选至少禁食12小时)；优选地，其中当采用液相色谱质谱联用仪(LC
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MS)测定甘氨鹅脱氧胆酸和甘油三酯TAG56:4在干血片样本中的相对含量时，具体包括以下步骤：1)将干血片样本置于冷(甲基叔丁基醚:甲醇，体积比3:1)溶液(在该溶液中预先加入甘氨鹅脱氧胆酸的标定物质赤霉酸和甘油三酯TAG 56:4的标定物质磷脂酰乙醇胺PE(17:0/17:0))中，涡旋混匀提取血液样品，获得第三样品提取液；2)向第三样品提取液中加入(甲醇:水，体积比3:...

【专利技术属性】
技术研发人员：李琰，彭兴，
申请(专利权)人：深圳脉图精准技术有限公司，
类型：发明
国别省市：