一种解决新冠总抗及中和抗体协同检测试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种新冠总抗及中和抗体协同检测试纸条，所述试纸条包括：样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫以及底衬，所述样品垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫依次搭接粘贴在所述底衬上，所述硝酸纤维素膜上从样本垫端至吸水垫端依次设置有释放线、T2检测线、T1竞争线以及C质控线，所述释放线上包被示踪粒子

【技术实现步骤摘要】
一种解决新冠总抗及中和抗体协同检测试纸条及其制备方法


[0001]本专利技术涉及医学检验领域，具体涉及一种解决新冠总抗及中和抗体协同检测的方法。

技术介绍

[0002]2019新型冠状病毒(SARS
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CoV
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2)是2019年在人体中发现的冠状病毒新毒株。该病毒症状一般为发热、乏力、干咳、逐渐出现呼吸困难，严重者表现为急性呼吸窘迫综合征，脓毒症休克，难以纠正的代谢性酸中毒和凝血功能障碍。由于新型冠状病毒已确认存在人传人现象，且潜伏期也具有传染性，再加之目前新型冠状病毒所致疾病没有特异治疗方法，因此，识别病毒感染患者，并及时进行隔离和治疗显得尤为迫切和重要。
[0003]目前，市面上的新型冠状病毒检测试剂主要包括两类：一类是核酸检测试剂，其中包括了基因测序法(DNA sequencing)、逆转录聚合链式反应(reversetranscription
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PCR，RT
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PCR)等检测手段；另一类是抗体检测试剂，主要包括了化学发光以及免疫层析等方法。核酸检测类试剂具有特异性强以及检测敏感度高等特点，但由于其包括样本处理、核酸提取以及PCR反应等步骤，平均检测时间需要2
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3h，耗时较长，并且需要专业技术人员配套仪器设备以及试剂耗材使用，对使用环境要求较高。磁微粒化学发光检测时间一般需要30
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60min，且同样对于使用环境要求较高，配套的检测仪器及试剂耗材成本高，难以在基层医院上大规模使用。免疫层析平均检测时间15min左右，并且检测试剂盒尺寸很小，便于携带，几乎可在任何医疗环境中使用可以作为快速筛查的手段，在大面积人员流动和聚集的时期可以发挥极大的筛查优势。
[0004]免疫层析法相关的产品主要有：新型冠状病毒总抗检测试纸条以及中和抗体检测试纸条，其中总抗免疫层析试纸条普遍应用双抗原夹心法，检测结果主要用作对新型冠状病毒核酸检测阴性疑似病例的补充检测指标或疑似病例诊断中与核酸检测协同使用；中和抗体检测试纸条主要采用竞争抑制法，随着新型冠状病毒的持续性流行以及疫苗研究的广泛开展，新冠中和抗体对于确定感染率、群体免疫以及预测具有重要意义。新冠总抗的检测对象包括了能够与新冠S蛋白或位于S1的受体结合域(RBD)集合的所有抗体，即包括了中和抗体以及其余的非中和抗体的抗体总和，具有很高的灵敏度，但针对性和特异性较低，因此无法对检测结果进行溯源，难以保障结果的准确度。同时，由于人体中新冠总抗的含量往往偏高，而为了确保样本在总抗含量较低时依然具有可靠检测灵敏度的情况下，就容易导致样本总抗含量高时出现HOOK问题，进而出现假阴性报值结果。

技术实现思路

[0005]本专利技术通过在总抗检测基础上协同中和抗体检测原理，在不降低总抗检测原有的灵敏度情况下，显著提升了检测的针对性及特异性，且避免了在样本待测物浓度过高时的HOOK效应，保证了检测准确性；同时，本专利技术通过示踪标记物结合的SARS
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CoV
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2抗原和/或RBD抗原以浓缩方式包被于NC膜释放线的方式，避免了标记复合物包被于玻璃纤维干燥和
溶解释放的噪声因子波动，配合特殊的固定液组分，可以确保样本加入后标记物均匀的释放，且能够有效减少标记复合物在NC膜上的残留，显著提升了试剂的检测精密度。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术手段：一种新冠总抗及中和抗体协同检测试纸条，其特征在于，所述试纸条包括：样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫以及底衬，所述样品垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫依次搭接粘贴在所述底衬上，所述硝酸纤维素膜上从样本垫端至吸水垫端依次设置有释放线、T2检测线、T1 竞争线以及C质控线，所述释放线上包被示踪粒子
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标记物偶联物，所述T2检测线包被SARS
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CoV
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2抗原或RBD抗原中的至少一种、所述T1竞争线包被ACE2 蛋白。
[0007]优选地，所述示踪粒子
‑
标记物偶联物中，示踪粒子选自荧光微球、胶体金、胶乳微球、磁微粒或纳米碳中的至少一种，优选为荧光微球，标记物为SARS
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CoV
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2抗原或RBD抗原中的至少一种与IgY抗体的组合物。
[0008]优选地，所述释放线上示踪粒子
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标记物偶联物的包被量为0.5
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1.0ul/cm，优选为0.7
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1.0ul/cm。
[0009]优选地，所述T1竞争线上ACE2蛋白的包被量为0.5
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1.0ul/cm，优选为0.7
‑ꢀ
1.0ul/cm；所述T2检测线上SARS
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CoV
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2抗原的包被量为0.5
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1.0ul/cm，优选为 0.7
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1.0ul/cm。
[0010]一种新冠总抗及中和抗体协同检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
[0011](1)硝酸纤维素膜的处理：
[0012]在硝酸纤维素膜上包被释放线、T2检测线、T1竞争线及C质控线后进行干燥处理：
[0013]a.释放线的包被：
[0014]将示踪粒子
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标记物偶联物包被于硝酸纤维素膜上靠近样本垫端1
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2mm处；
[0015]b.T2检测线的制备：
[0016]将RBD抗原溶液或SARS
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CoV
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2抗原溶液中的至少一种包被于距离释放线 4
‑
6mm处，且远离样品垫端；
[0017]c.T1竞争线的制备：
[0018]将ACE2蛋白溶液包被于距离T2检测线1
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3mm处，且远离样品垫端；
[0019]d.C质控线的位置：
[0020]将IgY抗体溶液包被于距离T1竞争线1
‑
3mm处，且远离样品垫端；
[0021](2)组装：
[0022]在底衬上依次粘贴样品垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫，切成3
‑
5mm宽的试纸条。
[0023]优选地，在步骤(1)释放线的制备中，所述标记物为RBD抗原或SARS
‑ꢀ
CoV
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2抗原中的至少一种与IgY抗体的组合物，所述示踪粒子选自荧光微球、胶体金、胶乳微球、磁微粒或纳米碳中的至少一种，优选为荧光微球；
[0024]所述示踪粒子
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标记物偶联物的制备方法为：
[0025]a.300
‑
500ug示踪粒子与60
‑
100ug RBD抗原或SARS
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CoV
‑
2抗原中的至少一种搅拌混匀30
‑
40min后，加入5％
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10％BSA，搅拌10本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新冠总抗及中和抗体协同检测试纸条，其特征在于，所述试纸条包括：样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫以及底衬，所述样品垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫依次搭接粘贴在所述底衬上，所述硝酸纤维素膜上从样本垫端至吸水垫端依次设置有释放线、T2检测线、T1竞争线以及C质控线，所述释放线上包被示踪粒子
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标记物偶联物，所述T2检测线包被SARS
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CoV
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2抗原或RBD抗原中的至少一种、所述T1竞争线包被ACE2蛋白。2.根据权利要求1所述的一种新冠总抗及中和抗体协同检测试纸条，其特征在于，所述示踪粒子
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标记物偶联物中，示踪粒子选自荧光微球、胶体金、胶乳微球、磁微粒或纳米碳中的至少一种，优选为荧光微球，标记物为SARS
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CoV
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2抗原或RBD抗原中的至少一种与IgY抗体的组合物。3.根据权利要求2所述的一种新冠总抗及中和抗体协同检测试纸条，其特征在于，所述释放线上示踪粒子
‑
标记物偶联物的包被量为0.5
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1.0ul/cm，优选为0.7
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1.0ul/cm。4.根据权利要求3所述的一种新冠总抗及中和抗体协同检测试纸条，其特征在于，所述T1竞争线上ACE2蛋白的包被量为0.5
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1.0ul/cm，优选为0.7
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1.0ul/cm；所述T2检测线上SARS
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CoV
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2抗原的包被量为0.5
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1.0ul/cm，优选为0.7
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1.0ul/cm。5.根据权利要求1
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4任一项所述的一种新冠总抗及中和抗体协同检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)硝酸纤维素膜的处理：在硝酸纤维素膜上包被释放线、T2检测线、T1竞争线及C质控线后进行干燥处理：a.释放线的包被：将示踪粒子
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标记物偶联物包被于硝酸纤维素膜上靠近样本垫端1
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2mm处；b.T2检测线的制备：将RBD抗原溶液或SARS
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CoV
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2抗原溶液中的至少一种包被于距离释放线4
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6mm处，且远离样品垫端；c.T1竞争线的制备：将ACE2蛋白溶液包被于距离T2检测线1
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3mm处，且远离样品垫端；d.C质控线的位置：将IgY抗体溶液包被于距离T1竞争线1
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3mm处，且远离样品垫端；(2)组装：在底衬上依次粘贴样品垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫，切成3
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5mm宽的试纸条。6.根据权利要求5所述的一种新冠总抗及中和抗体协同检测试纸条的制备方法，其特征在于：在步骤(1)释放线的制备中，所述标记物为RBD抗原或SARS
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CoV
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2抗原中的至少一种与IgY抗体的组合物，所述示踪粒子选自荧光微球、胶体金、胶乳微球、磁微粒或纳米碳中的至少一种，优选为荧光微球；所述示踪粒子
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标记物偶联物的制备方法为：a.300
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500ug示踪粒子与60
‑
100ug RBD抗原或SARS
‑
CoV
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2抗原中的至少一种搅拌混匀30
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40min后，加入5％
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10％BSA，搅拌10
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30min后12000
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【专利技术属性】
技术研发人员：吴瑜佳，郑勇，
申请(专利权)人：中元汇吉生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：