一种亮菌菌丝体多糖及其制备方法和抑菌用途技术

本发明专利技术公开了一种亮菌菌丝体多糖及其制备方法和抑菌用途，亮菌菌丝体多糖PAT总糖含量为93.41％，糖醛酸含量为12.24％；单糖组成及摩尔比为甘露糖:鼠李糖:半乳糖醛酸:葡萄糖:阿拉伯糖＝2.87:6.41:9.56:2.53:0.81。本发明专利技术制备的亮菌菌丝体多糖PAT对大肠杆菌、变形杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌生长过程均具有显著的抑制作用。亮菌菌丝体多糖PAT可作为新型天然抑菌剂，在日化和医药领域有着广泛应用前景。景。景。

【技术实现步骤摘要】
一种亮菌菌丝体多糖及其制备方法和抑菌用途


[0001]本专利技术属于功能产品领域，具体涉及一种亮菌菌丝体多糖及其制备方法和抑菌用途。

技术介绍

[0002]亮菌Armillariella tabescens(Scop.EX.Fr)Sing，又称假蜜环菌，是我国特有的一种珍贵药食两用菌，因其菌丝体在暗处发出浅蓝色荧光而得名。植物学分类归属于伞菌目、白蘑科、杯伞属，其含有亮菌甲素、亮菌乙素等活性成分，已被广泛用于治疗急慢性肝炎、阑尾炎、中耳炎和胆囊炎。多糖作为亮菌生长过程中产生的重要次级代谢产物，研究发现其具有抗肿瘤、降血糖、降血脂和改善胰岛素抵抗等多种药理作用。目前关于亮菌多糖的抗菌作用，鲜有文献报道。

技术实现思路

[0003]本专利技术旨在提供一种亮菌菌丝体多糖及其制备方法和抑菌用途。本专利技术设计并优化了发酵技术，聚酰胺法制备具有特定化学组成的亮菌多糖，发现其对大肠杆菌、变形杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的生长具有显著的抑制作用。本专利技术制备的亮菌多糖，可广泛应用在日化和医药领域，例如抗菌牙膏、沐浴露和抑菌喷雾剂等天然抑菌产品的开发，具有重要的市场应用价值和开发前景。
[0004]本专利技术亮菌菌丝体多糖，简记为PAT，其总糖含量为93.41％，糖醛酸含量为12.24％；单糖组成及摩尔比为甘露糖:鼠李糖:半乳糖醛酸:葡萄糖:阿拉伯糖＝2.87:6.41:9.56:2.53:0.81；其分子量分布范围为2.95
×
104‑
1.07
×
106Da。
[0005]本专利技术亮菌菌丝体多糖的制备方法，包括如下步骤：
[0006]步骤1：150g土豆去皮切碎，煮沸30min，6层纱布过滤，加入25g葡萄糖和5gMgSO4，加水至1000mL，121℃灭菌20min制得葡萄糖
‑
土豆
‑
MgSO4培养基；将4
‑
6g亮菌Armillariella tabescens(Scop.EX.Fr)Sing菌种(该菌种由合肥诚志生物制药有限公司提供)接种于1000mL葡萄糖
‑
土豆
‑
MgSO4培养基中，28℃静置培养15天，制得人工液体静置发酵亮菌菌丝体；
[0007]步骤2：将步骤1获得的亮菌菌丝体(2000g)粉碎，按照液料比1:10(g/mL)加入蒸馏水，然后90℃浸提3h，重复浸提3次，过80目筛，合并提取液；
[0008]步骤3：将步骤2所得提取液浓缩至原体积的1/250，加入4倍体积的95％乙醇，4℃静置12h，4500rpm离心10
‑
15min，收集沉淀物；
[0009]步骤4：将步骤3得到的沉淀物加蒸馏水溶解，采用聚酰胺法除蛋白脱色制备亮菌菌丝体多糖。条件为：80g的100
‑
120目聚酰胺和300mL的沉淀物溶液在500mL摇瓶中混匀，室温条件下，摇床200rpm振摇30min，使其充分吸附蛋白质和色素，然后过滤液体，收集滤液、浓缩，冻干为PAT。
[0010]本专利技术亮菌菌丝体多糖的用途，是用于制备抑菌制剂，所述抑菌制剂对大肠杆菌、
变形杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的生长具有显著的抑制效果。
[0011]本专利技术通过亮菌菌丝体多糖PAT分别干预大肠杆菌，变形杆菌，枯草芽孢杆菌，金黄色葡萄球菌的生长，测定干预后的抑菌圈直径、最小抑制浓度和生长曲线来评价其抗菌功效。
[0012]本专利技术1mg/mL亮菌菌丝体多糖PAT对大肠杆菌，变形杆菌，枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌圈直径分别为25.4mm
±
0.5，18.2mm
±
0.9，15.23mm
±
0.4，13.71mm
±
0.4，同浓度氯霉素的抑菌直径为29.5mm
±
0.5。
[0013]本专利技术亮菌菌丝体多糖PAT对大肠杆菌、变形杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌最小抑制浓度(Minimum inhibition concentration)分别为：0.5mg/mL，
‑
1.0mg/mL，4.0mg/mL，4.0mg/mL。
[0014]本专利技术的有益效果体现在：1、采用控制变量法优化液态静置发酵技术，通过筛选特定培养基，28℃静置15天培养，获得生物产量高的菌丝体；2、聚酰胺法取代传统Sevag试剂快速有效除去蛋白和色素纯化活性多糖，得到富含半乳糖醛酸、鼠李糖等特定单糖组成亮菌菌丝体多糖PAT，其操作简便、绿色高效，适用于规模化制备。
附图说明
[0015]图1是标准单糖组成高效液相色谱图(*
‑
溶剂峰，1
‑
甘露糖，2
‑
鼠李糖，3
‑
葡萄糖醛酸，4
‑
半乳糖醛酸，5
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葡萄糖，6
‑
半乳糖，7
‑
阿拉伯糖，8
‑
岩藻糖)。
[0016]图2是亮菌菌丝体多糖PAT单糖组成高效液相色谱图(*
‑
溶剂峰，1
‑
甘露糖，2
‑
鼠李糖，4
‑
半乳糖醛酸，5
‑
葡萄糖，7
‑
阿拉伯糖)。
[0017]图3是亮菌菌丝体多糖PAT相对分子质量检测色谱图，色谱条件为安捷伦1260HPLC
‑
ELSD，TSKgel
‑
G6000
‑
PWxL(7.8mm
×
30cm，13μm)。
[0018]图4亮菌菌丝体多糖对大肠杆菌，变形杆菌，枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌图。
[0019]图5是亮菌菌丝体多糖对大肠杆菌，变形杆菌，枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的生长抑制曲线图。
具体实施方式
[0020]以下通过具体的实施例描述本专利技术的制备和抑制细菌生长，所举实施例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的保护范围。
[0021]实施例1：亮菌菌丝体的发酵技术
[0022]步骤1：150g土豆去皮切碎，煮沸30min，6层纱布过滤，加入25g葡萄糖和5gMgSO4，加水至1000mL，121℃灭菌20min制得葡萄糖
‑
土豆
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MgSO4培养基，将4
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6g亮菌Armillariella tabescens(Scop.EX.Fr)Sing菌种接种于1000mL培养基上，28℃静置培养15天，制到人工液体静置发酵亮菌菌丝体，其生物量为19.3g/L。
[0023]步骤2：步骤1得到的葡萄糖
‑
土豆
‑
MgSO4培养基加入15g琼脂，得到固态培养基，将4
‑
6g亮菌Armillariella tabescens(Scop.EX.Fr本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种亮菌菌丝体多糖，其特征在于：所述亮菌菌丝体多糖的总糖含量为93.41％，糖醛酸含量为12.24％，分子量分布范围为2.95
×
104‑
1.07
×
106Da。2.根据权利要求1所述的亮菌菌丝体多糖，其特征在于：所述亮菌菌丝体多糖的单糖组成及摩尔比为甘露糖:鼠李糖::半乳糖醛酸::葡萄糖:阿拉伯糖＝2.87:6.41:9.56:2.53:0.81。3.一种权利要求1或2所述的亮菌菌丝体多糖的制备方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1：将4
‑
6g亮菌Armillariella tabescens(Scop.EX.Fr)Sing菌种接种于1000mL培养基中，28℃静置培养15天，制得人工液体静置发酵亮菌菌丝体；步骤2：将步骤1获得的亮菌菌丝体粉碎，按照液料比1g:10mL加入蒸馏水，然后90℃浸提3h，重复浸提3次，过80目筛，合并提取液；步骤3：将步骤2所得提取液浓缩至原体积的1/250，加入4倍体积的95％乙醇，4℃静置12h，4500rpm离心10
‑
15min，收集沉淀物；步骤4：将步骤3得到的沉淀物加蒸馏水溶解，采用聚酰...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈彦，张坤峰，杨宏伟，张文娜，赵弟海，赵彩莲，陈伟，李勇，黄宇哲，陈浩，
申请(专利权)人：安徽慧之诺医学生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：