用于消泡的改进的脂肪酶制造技术

公开了涉及用于例如在碳水化合物发酵工艺中减少发泡的改进的杂交脂肪酶的组合物和方法。方法。方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于消泡的改进的脂肪酶


[0001]本申请要求2019年3月15日提交的美国临时专利申请号62/819029的优先权，所述申请的公开内容通过引用以其全文并入。
[0002]公开了涉及用于例如在碳水化合物发酵工艺中减少发泡的改进的杂交脂肪酶的组合物和方法。

技术介绍

[0003]许多商业产品是在利用“细胞工厂”(通常是微生物)的发酵工艺中生产的。在此类工艺中可能产生大量泡沫，这会降低每单位发酵罐体积的有效容量，并可能导致发酵液通过通风口从发酵罐溢出。
[0004]发泡可能是在使用碳水化合物底物和酵母作为发酵生物的燃料乙醇生产中的特殊问题。当在发酵期间或发酵上游添加蛋白酶时，发泡似乎加剧。
[0005]之前已在例如WO 2004029193、WO 2008135547和WO 201875430中描述了脂肪酶用于在燃料乙醇生产中减少发泡的用途。尽管如此，仍需要成本更低的优异抑泡酶。

技术实现思路

[0006]本专利技术的组合物和方法涉及改进的变体脂肪酶多肽及其使用方法。本专利技术的组合物和方法的方面和实施例总结在以下分别编号的段落中：
[0007]1.在第一方面，提供了一种变体疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶，所述脂肪酶与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少95％、任选地至少98％和任选地至少99％的氨基酸序列同一性，并且在发酵工艺中与具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的参照脂肪酶相比具有改进的消泡活性，其中所述变体脂肪酶包含：疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的基本上整个连续氨基酸序列，所述氨基酸序列参考SEQ ID NO:4包含N
‑
末端、具有选自由以下组成的组的一个或多个取代：G91A、D96W和E99K；作为融合蛋白存在的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的基本上整个连续氨基酸序列，所述融合蛋白具有连续氨基酸序列，所述连续氨基酸序列来自具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)脂肪酶，其中所述变体脂肪酶的C
‑
末端具有衍生自尖孢镰孢菌脂肪酶的C
‑
末端的至少12个但少于55个氨基酸残基，并且其中所述变体脂肪酶不具有SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
[0008]2.在一些实施例中，如段落1所述的变体脂肪酶的C
‑
末端具有衍生自尖孢镰孢菌的C
‑
末端的至少12个但少于15个氨基酸残基。
[0009]3.在一些实施例中，如段落1或2所述的变体脂肪酶的C
‑
末端具有衍生自尖孢镰孢菌的C
‑
末端的12个氨基酸残基。
[0010]4.在一些实施例中，如段落1
‑
3中任一项所述的变体脂肪酶具有取代G91A、D96W和E99K。
[0011]5.在一些实施例中，如段落1
‑
4中任一项所述的变体脂肪酶在疏棉状嗜热丝孢菌
脂肪酶的连续氨基酸序列的C
‑
末端具有少量较少的或额外的残基。
[0012]6.在一些实施例中，如段落1
‑
4中任一项所述的变体脂肪酶在疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的连续氨基酸序列的C
‑
末端具有残基的截短。
[0013]7.在一些实施例中，如段落1
‑
6中任一项所述的变体脂肪酶具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列。
[0014]8.在如段落1
‑
7中任一项所述的变体脂肪酶的一些实施例中，在所述发酵工艺中，所述变体脂肪酶在同时糖化和发酵中具有改进的消泡活性。
[0015]9.在另一方面，提供了一种使用碳水化合物底物作为原料在乙醇生产工艺中减少发泡的改进的方法，所述方法包括在发酵步骤前或在发酵步骤期间添加如段落1
‑
7中任一项所述的变体脂肪酶，所述变体脂肪酶在发酵工艺中与具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的参照脂肪酶相比具有改进的消泡活性。
[0016]10.在如段落9所述的改进的方法的一些实施例中，所述发酵工艺是糖化和/或发酵。
[0017]11.在如段落9或10所述的改进的方法的一些实施例中，所述发酵工艺是同时糖化和发酵。
[0018]12.在另一方面，提供了一种变体疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶，所述脂肪酶与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少95％、任选地至少98％和任选地至少99％的氨基酸序列同一性，并且在木霉属(Trichoderma)宿主中与具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的参照脂肪酶相比具有改进的表达，其中所述变体脂肪酶包含：疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的基本上整个连续氨基酸序列，所述氨基酸序列参考SEQ ID NO:4包含N
‑
末端、具有选自由以下组成的组的一个或多个取代：G91A、D96W和E99K；作为融合蛋白存在的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的基本上整个连续氨基酸序列，所述融合蛋白具有连续氨基酸序列，所述连续氨基酸序列来自具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的尖孢镰孢菌脂肪酶，其中所述变体脂肪酶的C
‑
末端具有衍生自尖孢镰孢菌脂肪酶的C
‑
末端的至少12个但少于55个氨基酸残基，并且其中所述变体脂肪酶不具有SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
[0019]13.在一些实施例中，如段落12所述的变体脂肪酶的C
‑
末端具有衍生自尖孢镰孢菌的C
‑
末端的至少12个但少于15个氨基酸残基。
[0020]14.在一些实施例中，如段落12或13所述的变体脂肪酶的C
‑
末端具有衍生自尖孢镰孢菌的C
‑
末端的12个氨基酸残基。
[0021]15.在一些实施例中，如段落12
‑
14中任一项所述的变体脂肪酶具有取代G91A、D96W和E99K。
[0022]16.在一些实施例中，如段落12
‑
15中任一项所述的变体脂肪酶在疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的连续氨基酸序列的C
‑
末端具有少量较少的或额外的残基。
[0023]17.在一些实施例中，如段落12
‑
16中任一项所述的变体脂肪酶在疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的连续氨基酸序列的C
‑
末端具有残基的截短。
[0024]18.在一些实施例中，如段落12
‑
17中任一项所述的变体脂肪酶具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列。
[0025]19.在如段落11
‑
18中任一项所述的变体脂肪酶的一些实施例中，在所述发酵工艺中，所述变体脂肪酶在同时糖化和发酵中具有改进的消泡活性。
[0026]从说明书和附图中，所述组合物和方法的这些及其他方面和实施例将是清楚的。
附图说明
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】NO:3或SEQ ID NO:5的氨基酸序列。13.如权利要求12所述的变体脂肪酶，所述变体脂肪酶的C
‑
末端具有衍生自尖孢镰孢菌的C
‑
末端的至少12个但少于15个氨基酸残基。14.如权利要求12或13所述的变体脂肪酶，所述变体脂肪酶的C
‑
末端具有衍生自尖孢镰孢菌的C
‑
末端的12个氨基酸残基。15.如权利要求12
‑
14中任一项所述的变体脂肪酶，所述变体脂肪酶具有取代G91A、D96W和E99K。16.如权利要求12
‑
15中任一项所述的变体脂肪...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：发明
国别省市：