雷公藤甲素在制备预防和/或治疗大田软海绵酸引起的肠道损伤药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及肠道损伤保护领域，具体是雷公藤甲素在制备预防和/或治疗大田软海绵酸引起的肠道损伤药物中的新用途。本发明专利技术通过体外试验发现雷公藤甲素能够抑制大田软海绵酸作用造成的血管内皮细胞凋亡，体内实验进一步验证，发现雷公藤甲素具有保护大田软海绵酸作用的小鼠肠道屏障功能的作用，是大田软海绵酸中毒后的理想解毒药物。毒后的理想解毒药物。

【技术实现步骤摘要】
雷公藤甲素在制备预防和/或治疗大田软海绵酸引起的肠道损伤药物中的应用


[0001]本专利技术涉及肠道损伤保护领域，具体地说，是雷公藤甲素在制备预防和/或治疗大田软海绵酸引起的肠道损伤药物中的新用途。

技术介绍

[0002]大田软海绵酸(Okadaic acid，以下简称OA，式I)是一种广泛分布于甲壳类动物体内的海洋毒素，属于腹泻型贝类中毒毒素，摄入后会引起胃肠道症状，在沿海地区及长远航期间高发，危害人体健康，造成了严重的经济损失，目前尚缺乏针对该毒素的有效治疗药物。
[0003][0004]大田软海绵酸(OA)作为蛋白磷酸酶PP1和PP2A的抑制剂，能抑制蛋白磷酸酶活性进而导致蛋白质过磷酸化，诱导细胞凋亡。食用后大田软海绵酸进入消化系统会导致肠道细胞凋亡进而破坏肠道屏障功能而引起腹泻。此外，大田软海绵酸在随血液的循环转运和代谢过程中，还会对体内多种脏器造成损伤，但尚未发现可用于救治的特效药，因此成本低廉，作用效果明显的解毒特效药成为目前研究的焦点。
[0005][0006]雷公藤甲素是从传统中药雷公藤中提取出来的环氧二萜内酯类化合物(式II)，是雷公藤活性最强的有效成分，具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤等多种活性，目前尚未发现雷公
藤甲素对大田软海绵酸引起的肠道损伤有保护作用。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种价格合理，毒副作用小的活性单体——雷公藤甲素在制备预防和/或治疗大田软海绵酸(OA)引起的肠道损伤药物的新用途。
[0008]本专利技术的第一方面，提供雷公藤甲素在制备预防和/或治疗大田软海绵酸引起的肠道损伤药物中的应用。
[0009]进一步的，所述的大田软海绵酸引起的肠道损伤包括肠道细胞凋亡和肠道屏障破坏。
[0010]进一步的，所述的雷公藤甲素在制备抑制大田软海绵酸作用造成的血管内皮细胞凋亡的药物中的应用。
[0011]进一步的，所述的雷公藤甲素在制备抑制大田软海绵酸作用造成的肠道屏障破坏的药物中的应用。
[0012]本专利技术的第二方面，提供雷公藤甲素在制备大田软海绵酸中毒后的解毒药物中的应用。
[0013]进一步的，所述的解毒药物为抑制大田软海绵酸作用下的肠道细胞凋亡的药物。
[0014]进一步的，所述的解毒药物为抑制大田软海绵酸作用造成的肠道屏障破坏，保护肠道屏障功能的药物。
[0015]本专利技术的第三方面，提供一种预防和/或治疗大田软海绵酸引起的肠道损伤的药物，其包含：
[0016](A)有效量的雷公藤甲素；以及
[0017](B)药学上或免疫学上可接受的载体或赋形剂。
[0018]本专利技术的第四方面，提供一种大田软海绵酸中毒后的解毒药物，其包含：
[0019](A)有效量的雷公藤甲素；以及
[0020](B)药学上或免疫学上可接受的载体或赋形剂。
[0021]进一步的，所述的大田软海绵酸中毒后的解毒药物中，雷公藤甲素在小鼠动物实验水平上的起效剂量为0.2mg/kg，对应的人用给药剂量为0.02mg/kg。
[0022]本专利技术的有益效果在于：
[0023]本专利技术通过体外试验发现雷公藤甲素能够抑制大田软海绵酸作用造成的血管内皮细胞凋亡，体内实验进一步验证，发现雷公藤甲素具有保护大田软海绵酸作用的小鼠肠道屏障功能的作用，是大田软海绵酸中毒后的理想解毒药物。
附图说明
[0024]图1：OA对HUVEC细胞的杀伤作用。
[0025]图2：雷公藤甲素在OA杀伤HUVEC细胞中的保护作用。
[0026]图3：雷公藤甲素对OA处理后HUVEC细胞凋亡比例的影响。
[0027]图4：OA处理对小鼠FITC肠道通透性的影响。
[0028]图5：雷公藤甲素对OA处理后小鼠FITC肠道通透性的影响。
[0029]图6：雷公藤甲素对OA处理后小鼠肠道病理变化的影响；
[0030]其中，(A)FITC对照组，(B)OA给药组，(C)雷公藤甲素给药组，(D)OA和雷公藤甲素共同给药组。
[0031]图7：雷公藤甲素对OA处理后小鼠肠道细胞显微结构变化的影响；
[0032]其中，(A)FITC对照组，(B)OA给药组，(C)雷公藤甲素给药组，(D)OA和雷公藤甲素共同给药组。
具体实施方式
[0033]下面结合实施例对本专利技术提供的具体实施方式作详细说明。
[0034]实施例1：
[0035]1、血管内皮细胞(HUVEC)体外培养
[0036]本实验所用细胞为人血管内皮细胞(HUVEC)，使用添加10％胎牛血清的DMEM培养基，在37℃，5％CO2培养箱中进行培养，待细胞生长至占培养皿底部80％～90％时，使用胰酶进行消化并传代。
[0037]2、细胞活性的检测
[0038]本实验使用CCK8法和pSIVA技术对雷公藤甲素抑制OA作用下血管内皮细胞(HUVEC)的凋亡进行检测。
[0039](1)将OA(式I)溶解于DMSO中配成10uM浓缩液，
‑
20℃保存，使用时分别稀释为0.1nM，0.3nM，1nM，3nM，10nM，30nM，100nM。细胞铺96孔板(10000个细胞/孔)，加入不同浓度的OA后，作用24h后，用CCK8法检测细胞活性，确定OA作用的合适的浓度。
[0040]实验结果：结果显示OA对HUVEC的IC50为6.029*10
‑7M。(图1)
[0041](2)将雷公藤甲素(式II)溶解于DMSO中配成10mM浓缩液，
‑
20℃保存，使用时分别稀释为0.01uM，0.03uM，0.1uM，0.3uM，1uM，3uM，10uM。细胞铺96孔板(10000个细胞/孔)，加入OA(5*10
‑7mol/L)后立刻加入不同浓度的雷公藤甲素，作用24h后，，用CCK8法检测细胞活性。
[0042]实验结果：结果显示雷公藤甲素可有效缓解OA对HUVEC细胞损伤作用(图2)。
[0043]3、雷公藤甲素可以抑制OA作用下细胞凋亡的发生
[0044]细胞铺96孔板(10000个细胞/孔)，在5*10
‑7mol/L的OA和浓度梯度为0，0.1uM，0.3uM，1uM，3uM，10uM的雷公藤甲素的共同作用24h后，用Annexin V试剂盒对细胞进行处理，通过pSIVA技术，记录细胞发生凋亡的个数。
[0045]实验结果：结果显示随着雷公藤甲素浓度的增高，HUVEC细胞凋亡发生减少(图3)。
[0046]4、构造OA诱发肠道功能损伤的动物模型
[0047]六周龄健康ICR小鼠(36只)，饲养条件：温度为22
±
2℃，湿度为50
±
5％，照明时间为12小时/天。饲养期间小鼠自由摄取高压蒸汽灭菌后的繁殖鼠料及高压蒸汽灭菌后的过滤水。各组小鼠适应环境3天后进行FITC肠道通透性实验。随机分成6组，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.雷公藤甲素在制备预防和/或治疗大田软海绵酸引起的肠道损伤药物中的应用。2.根据权利要求1所述的雷公藤甲素在制备预防和/或治疗大田软海绵酸引起的肠道损伤药物中的应用，其特征在于，所述的大田软海绵酸引起的肠道损伤包括肠道细胞凋亡和肠道屏障破坏。3.根据权利要求1所述的雷公藤甲素在制备预防和/或治疗大田软海绵酸引起的肠道损伤药物中的应用，其特征在于，所述的雷公藤甲素在制备抑制大田软海绵酸作用造成的血管内皮细胞凋亡的药物中的应用。4.根据权利要求1所述的雷公藤甲素在制备预防和/或治疗大田软海绵酸引起的肠道损伤药物中的应用，其特征在于，所述的雷公藤甲素在制备抑制大田软海绵酸作用造成的肠道屏障破坏的药物中的应用。5.雷公藤甲素在制备大田软海...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈基快，张吉芊竹，朱江波，朱玉平，张晓芳，严朗，刘韵资，李劲锋，李磊，任丽君，侍雯婧，
申请(专利权)人：中国人民解放军海军军医大学，
类型：发明
国别省市：