与特殊类型糖尿病相关的基因突变片段及其应用制造技术

本发明专利技术公开了“与特殊类型糖尿病相关的基因突变片段及其检测试剂盒”属于分子诊断技术，所述基因突变片段是ABCC8基因发生突变所得，其与人野生型ABCC8基因同源比对，具有c.4435G>A杂合错义变异，所述突变是在人第11号染色体，物理位置为17415923的碱基由G突变为A，对应地是在SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的第20个核苷酸G突变成了A。本发明专利技术提供的基因突变片段可以将特殊类型糖尿病患者和正常人群区分开，可以作为临床辅助诊断特殊类型糖尿病的生物标志物；可以早期筛查该变异的携带者，准确诊断患者的糖尿病类型，指导患者的临床治疗和改善预后，为临床上的精准治疗提供依据；为人类攻克特殊类型糖尿病提供可能的药物治疗靶点。疗靶点。疗靶点。

【技术实现步骤摘要】
与特殊类型糖尿病相关的基因突变片段及其应用


[0001]本专利技术涉及一种人体变异基因，具体涉及一种与特殊类型糖尿病相关的基因突变片段及其应用。

技术介绍

[0002]糖尿病是一种最常见的内分泌代谢疾病，具有遗传易感性，在环境因素的触发下发病。中国糖尿病患病总人数约为1.16亿，大约每9人中有1人为糖尿病患者，超过82万人的死因与糖尿病相关。目前我国糖尿病总体防控效能较差，基层医疗机构糖尿病管理能力参差不齐，糖尿病知晓率、治疗率和血糖控制率分别为38.6％、35.6％和33.0％，“三率”现状亟待改变。值得注意的是，糖尿病不仅潜在患者人数众多，而且人均治疗费用高。根据调查，确诊患者的人均治疗费用为936美元，给家庭和社会都带来了沉重的经济负担。
[0003]糖尿病可被分为Ⅰ型糖尿病、Ⅱ型糖尿病(T2DM)、妊娠糖尿病、特殊类型糖尿病。参照WHO发布的糖尿病诊断和分类标准，特殊类型糖尿病是指除Ⅰ型糖尿病、Ⅱ型糖尿病和妊娠糖尿病以外所有的病因引起的糖尿病。特殊类型糖尿病的发病机制相对明确，按照美国糖尿病学会(ADA)2014年修订的糖尿病诊断标准，包含以下8类：胰岛β细胞功能遗传缺陷，胰岛素作用遗传缺陷，胰腺外分泌疾病、内分泌疾病，药物或化学物诱导、感染、免疫介导的罕见类型，以及其他糖尿病相关的遗传综合征。在临床诊疗工作中，由于特殊类型糖尿病的临床表现与Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病存在较大重叠，导致其实际患病率被大大低估。2017 年，Bansal等在BMC Medicine上发表一项针对T2DM的大队列高通量测序研究，该研究通过高通量测序技术在4016例T2DM患者(其中40岁前诊断的患者有1346例)和2872 名正常对照者中检测了单基因糖尿病相关的22个基因，结果发现该队列T2DM患者中有 0.6％携带已知致病变异，而在40岁以下的T2DM患者中，携带相应致病变异的比例更高达 1.8％。误诊不仅延误病情，也增加了家庭和社会的经济负担。因此，在临床诊疗过程中，早期准确识别糖尿病的类型，减少漏诊、误诊是制定合理治疗方案的前提，不仅可以减少胰岛素使用，更可以改善患者的血糖控制情况，提高患者生活质量。
[0004]随着基因测序技术的迅速发展，特殊类型糖尿病不断取得突破性进展，基因检测不再只是为了验证，而是能诊断并指导患者的临床治疗和改善预后，为临床上的精准治疗提供依据。

技术实现思路

[0005]本专利技术专利技术人在对特殊类型糖尿病的家系成员进行分析过程中发现一位特殊类型糖尿病患者(先症者)具有ABCC8基因c.4435G>A杂合错义变异，导致氨基酸改变：p.Glu1479Lys。
[0006]HGMD Professional数据库和ClinVar数据库均未收录该变异。根据ACMG指南，该变异被判定为可能致病的(PM1+PM2+PP2+PP3)，具体为：
[0007]PM1：该变异位于热点突变区域。
[0008]PM2：1000g、ESP数据库、ExAC数据库中正常对照人群中未发现的变异。
[0009]PP2：ABCC8基因的错义变异是造成疾病的原因，该基因中良性变异所占的比例很小，该变异为新的错义变异。
[0010]PP3：多种统计方法预测出该变异会对基因或基因产物造成有害的影响，包括保守性预测、进化预测、剪接位点影响等。
[0011]专利技术人通过调查和检测先证者家系成员中该变异与特殊类型糖尿病情况，验证了该变异与特殊类型糖尿病的关联。该发现对于特殊类型糖尿病诊断，以及未来作为药物设计靶点方面都具有重要意义。
[0012]基于此，本专利技术请求保护以下技术方案：
[0013]与特殊类型糖尿病相关的基因突变片段，其特征在于，是ABCC8基因发生突变所得，其与人野生型ABCC8基因同源比对，具有c.4435G>A杂合错义变异，所述突变是在人第11 号染色体，物理位置为17415923的碱基由G突变为A，对应地是在SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的第20个核苷酸G突变成了A。
[0014]优选地，所述的基因突变片段，其特征在于：具有SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。
[0015]优选地，所述的基因突变片段的用途，其特征在于：将所述基因突变片段作为靶分子片段研发特殊类型糖尿病检测试剂盒或治疗药物；或者将检测所述的突变的ABCC8基因片段的试剂用于制备检测特殊类型糖尿病的试剂盒。
[0016]一种检测特殊类型糖尿病的试剂盒，其特征在于，包含用于检测权利要求1或2所述的基因突变片段的试剂。
[0017]优选地，所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包含特异性引物；所述特异性引物如下：
[0018]正向引物ABCC8
‑
F，其核苷酸序列为：5'ATCCCATCTGCTCCACTCACA3'，和
[0019]反向引物ABCC8
‑
R，其核苷酸序列为：5'GCCTCAGGACTACTTCGTGCAA 3'。
[0020]优选地，所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂还包括阳性对照重组质粒；阴性对照无特定突变的基因组DNA。
[0021]优选地，所述的试剂盒，其特征在于：还包括DNA提取试剂、Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg
2+
、dNTPs、PCR稳定剂及增强剂。
[0022]优选地，所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含对PCR扩增产物进行测序的试剂。
[0023]优选地，所述的试剂盒，其特征在于：所述对PCR扩增产物进行测序的试剂包含Sanger 测序试剂、荧光定量PCR试剂、限制性酶切片段长度多态性(RFLP)方法用试剂、单链构象多态性(SSCP)分析用试剂和等位基因特异的寡聚核苷酸杂交(ASO)检测用试剂中的一种或多种。
[0024]本专利技术的有益效果或技术贡献：
[0025]1.本专利技术提供的基因突变片段“ABCC8基因c.4435G>A杂合错义变异”可以将特殊类型糖尿病患者和正常人群区分开，因此，该变异可以作为临床辅助诊断特殊类型糖尿病的生物标志物。
[0026]2.通过检测受试者是否携带上述变异，准确诊断患者的糖尿病类型，指导患者的临床治疗和改善预后，为临床上的精准治疗提供依据。
[0027]3.为人类攻克特殊类型糖尿病提供可能的药物治疗靶点，促进创新药物研发。
附图说明
[0028]图1是特殊类型糖尿病患者与正常对照的ABCC8基因测序结果，其中，A为家系中特殊类型糖尿病患者的Sanger测序图，B为家系中及本地数据库中正常对照的Sanger测序图。
[0029]图2是实施例1中特殊类型糖尿病患者的家系图。
具体实施方式
[0030]下面结合实施例对本专利技术作进一步说明，但并不因此而限制本专利技术。
[0031]下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.与特殊类型糖尿病相关的基因突变片段，其特征在于，是ABCC8基因发生突变所得，其与人野生型ABCC8基因同源比对，具有c.4435G>A杂合错义变异，所述突变是在人第11号染色体，物理位置为17415923的碱基由G突变为A，对应地是在SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的第20个核苷酸G突变成了A。2.如权利要求1所述的基因突变片段，其特征在于：具有SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。3.权利要求1或2所述的基因突变片段的用途，其特征在于：将所述基因突变片段作为靶分子片段研发特殊类型糖尿病检测试剂盒或治疗药物；或者将检测所述的基因突变片段的试剂用于制备检测特殊类型糖尿病的试剂盒。4.一种检测特殊类型糖尿病的试剂盒，其特征在于，包含用于检测权利要求1或2所述的基因突变片段的试剂。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包含特异性引物；所述特异性引物如下：正向引物ABCC8
‑
F，其核苷酸序列为：5...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭立新，潘琦，王晓霞，满富丽，刘砺，张丽娜，王伟好，邓明群，洛静旖，梁庆渊，赵娜娜，侯青，刘昕超，刘哲，
申请(专利权)人：百世诺北京医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：