一种试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种试剂盒在髓过氧化物酶(MPO)检测中的应用，该试剂盒包括：试剂一、试剂二、BSA溶液和EDTA抗凝剂；在应用过程中，该试剂盒中试剂与检测样品中MPO形成夹心结构，在拉曼激光下产生强烈的光信号，实现对髓过氧化物酶(MPO)的检测，使用本发明专利技术中试剂盒检测人体中髓过氧化物酶(MPO)简单易操作，弥补了现有技术中试剂盒操作步骤繁琐的缺陷，同时该试剂盒的检测灵敏度大大提高，检测限度可达到fg级别，大幅度的提高了人体中髓过氧化物酶(MPO)含量的检测范围，对预防急慢性肾病、糖尿病肾病起到了关键性的作用。病肾病起到了关键性的作用。病肾病起到了关键性的作用。

【技术实现步骤摘要】
一种试剂盒


[0001]本专利技术涉及生化检测领域，具体涉及一种试剂盒。

技术介绍

[0002]血清淀粉样蛋白A(serumamyloidAprotein，SAA)，是一种急性相蛋白并与血浆高密度脂蛋白(HDL)结合，与心脑血管疾病、肿瘤、肾脏疾病、淀粉样变性病、呼吸系统疾病的相关性以及它在相关疾病的应用介绍：1、在肿瘤方面的应用：SAA在肿瘤的发生发展、侵袭转移过程发挥重要的作用，SAA在肿瘤的转移病人体内有高浓度表达，因此SAA在肿瘤患者的疗效观察和预后评估方面具有重要的应用价值；2、心血管疾病方面：可以作为发生心血管疾病的风险评估指标3、肾脏疾病方面的应用：尤其在肾移植患者的检测方面，发生肾移植排斥患者SAA会异常升高，且该指标比如尿酸、肌酐、CRP等指标更灵敏；4、其他的一些疾病，例如淀粉样变性病、呼吸系统疾病、类风湿关节炎也有一定的应用价值。
[0003]血清淀粉样蛋白A是急性期蛋白，在炎症、感染性和非感染性疾病期间，它在血液中的浓度能在数小时内急剧升高，可升高到最初浓度的1000倍；SAA与HDL有关，它能在炎症期间调节HDL的代谢，SAA一个特别重要的特性是其降解产物能以淀粉样蛋白A原纤维的方式沉积在不同的器官中，在慢性炎症疾病中这是一种严重的并发症；血清淀粉样蛋白A升高还见于动脉粥样硬化、糖尿病肾病、急性心肌梗死、冠心病、慢性肾脏疾病。在评价炎症、监控其活动及治疗中，SAA与CRP有相似的作用。SAA检测在诊断发生病毒感染、肾移植排斥反应的患者(特别是进行免疫抑制治疗的患者)以及肾上腺皮质激素治疗的囊性纤维化患者方面，比C反应蛋白检测更确凿。研究发现，在患关节炎的案例中，血清淀粉样蛋白A与疾病活动性的关系最密切。同时检测C反应蛋白和血清淀粉样蛋白A能提高对感染的诊断灵敏度。
[0004]铁蛋白为机体内一种贮存铁的可溶组织蛋白，主要存在于肝脏、脾脏和大脑的锥体外侧束的细胞核中，构成铁蛋白的两个亚型：一个是L亚型，相对分子质量19000，另一个是H亚型，相对分子质量21000，具有调节铁代谢平衡、抗氧化胁迫、消除部分重金属和有毒分子的毒害等功能。慢性肾病长期依赖透析维持治疗者中，有一半人血清铁蛋白水平可高达500ng/mb血清铁蛋白大于800ng/ml的透析患者，有更高的CRP水平及更糟糕的营养状态及感染可能。
[0005]在临床上，冠状动脉疾病是导致发达国家心血管疾病患者死亡的主要原因之一，而铁过量增加了心血管疾病发生的危险性。血清铁蛋白是急性心肌梗死的一种新的危险因素。另外原发性高血压和脑梗死患者与血清铁蛋白水平有着密切的关系。铁蛋白作为组织铁的可靠指标，参与了急性脑梗死的发生、发展过程；缺铁性贫血，在发达国家与发展中国家都很常见。尽管骨髓穿刺是诊断缺铁性贫血的金标准，但因是损伤性操作，多数患者难以接受，而且受到取材好坏的限制，所以仍需积极寻找简便可行、灵敏度高的缺铁性贫血指标。而血清铁蛋白能够反映身体贮铁状况，是贫血的常规检查项目。血清铁蛋白降低对于缺铁性贫血具有高度特异性，其检测较金标准骨髓穿刺铁染色损伤性小，参考范围为男性：
30-300ng/ml女性：10-200ng/ml；目前大量临床和流行病学研究发现，体内铁蛋白储存量增高可能与罹患肝癌、肺癌、结肠癌、食管癌、胃肠道肿瘤和胰腺癌、乳腺癌有关，特别是当肝癌AFP测定值较低时，可用测定铁蛋白值作为补充，以提高诊断率。
[0006]髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO),是一种血红素蛋白，富含于中性粒细胞中，由粒细胞进入循环之前在骨髓内合成并存储于噬天青颗粒内。外界刺激可导致中性粒细胞聚集，从而释放髓过氧化物酶。MPO的相对分子量为150kDa，是由两个亚单位通过共价结合形成的四聚体，每个亚单位又有一条重链α(相对分子量60kDa)和一条轻链β链(相对分子量为15kDa)构成。MPO可以通过催化氧化氯离子产生次氯酸在吞噬细胞内杀灭微生物，破坏多种靶物质，对机体产生和调节炎症反应等多方面发挥作用。更重要的是，其氧化修饰低密度脂蛋白(LDL)可引起动脉粥样硬化，因此MPO被认为与心血管疾病的发生有关。目前，MPO被认为是最有前景的心血管标志物，体内MPO含量升高预示着有动脉硬化以及冠心病的风险，是心肌梗死的早期预警，比其他指标如肌钙蛋白T、CK-MB以及CRP更灵敏，更早地诊断和危险评估。在胸痛发生2h内MPO水平即可明显升高，所以，对于胸痛患者而言，MPO对于诊断急性冠脉综合征(ACS)将有更重要的临床意义。
[0007]脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprorein-assoeiated phosPhohPaseA2，Lp-PLA2)又称血小板活化因子乙酞水解酶(PAF-AH)，是一种炎性细胞分泌的能促使氧化磷脂水解的磷脂酶，是磷脂酶A2(PLA2)超家族中的一员，相对分子质量为45.4kD(441个氨基酸)。Lp-PLA2是磷脂酶超家族中的亚型之一，也被称为是血小板活化因子乙酰水解酶，由血管内膜中的巨噬细胞、T细胞和肥大细胞分泌。动脉粥样硬化斑块中Lp-PLA2表达上调，并且在易损斑块纤维帽的巨噬细胞中强表达。Lp-PLA2可水解氧化低密度脂蛋白ox-LDL中的氧化磷脂，生成脂类促炎物质，如溶血卵磷脂和氧化游离脂肪酸，进而产生多种致动脉粥样硬化作用，包括内皮细胞死亡和内皮功能异常，刺激粘附因子和细胞因子的产生。这些物质可通过趋化炎症细胞进一步产生自我强化的循环，生成更多促炎物质。释放到血液循环中的Lp-PLA2主要与富含载脂蛋白(Apo)B的脂蛋白结合，低密度脂蛋白(LDL)占80％，其余与高密度脂蛋白(HDL)、脂蛋白和极低密度脂蛋白(VLDL)结合。在动脉粥样硬化性疾病患者中，Lp-PLA2水平与LDL亚组分水平呈正相关。
[0008]脂蛋白相关磷脂酶A2(LP-PLA2)是具有血管特异性的炎症标志物，LP-PLA2为动脉粥样硬化性心血管疾病，冠心病和缺血性卒中的独立危险因素标志物。LP-PLA2的检测能直接准确的反映血管内炎症的程度，并且它反映的是动态的变化，作为一个动态指标。Lp-PLA2是心脑血管恶性事件高特异性预测指标；反映粥样斑块的炎症程度，有效鉴别良性与恶性斑块；独立预测动脉粥样硬化引起的心脑血管栓塞性疾病；动态变化反应治疗效果，对心脑血管栓塞性疾病患者的临床疗法与疗效起辅助性指导。
[0009]半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cysteine proteinase inhibitor，CPI)后被命名为胱抑素C。被称为γ-微量蛋白及γ-后球蛋白，广泛存在于各种组织的有核细胞和体液中,是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，分子量为13.3KD，由122个氨基酸残基组成,可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。循环中的胱抑素c仅经肾小球滤过而被清除，是一种反映肾小球滤过率变化的内源性标志物，并在近曲小管重吸收，但重吸收后被完全代谢分解，不返回血液，因此，其血中浓度由肾小球滤过率决定，而不依赖任何外来因素，如性别、年龄、饮食的影响，是一种反映肾小球滤过率变化的理想内源性标志物。胱抑素C用于肾脏疾病的早期本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：10ml顶层试剂、10ml底层试剂、10mlBSA溶液和10mLEDTA抗凝剂；所述顶层试剂包括：金核银壳纳米棒底物、半胱胺修饰分子、戊二醛修饰分子和1
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PBS缓冲液；所述底层试剂包括：金核银壳纳米棒底物、4-氨基-3-巯基-5-吡嗪-4(H)-1,2,4-三唑拉曼检测分子、戊二醛功能修饰分子；所述BSA溶液的浓度为1％。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的制备方法包括：(1)制备试剂一(1.1)将2μL浓度为5mmol/L的4-氨基-3-巯基-5-吡嗪-4(H)-1,2,4-三唑乙醇溶液加入到金核银壳纳米棒溶液中，温和摇动2h，在7000rpm条件下离心10min，去上清液，得到混合物一；(1.2)将混合物一分散到去离子水中，加入2μL浓度为25％wt的戊二醛溶液，温和摇动1.5h，在6000rpm条件下离心10min，得到混合物二；(1.3)将混合物二分散到1.0mL浓度为9.0μg/mL in 1
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PBS buffer的髓过氧化物酶(MPO)多克隆抗体溶液中得到混合溶液，将混合溶液在4℃条件下保存12h，然后在6000rpm条件下离心10min，去上清液，将沉淀分散到1mL1
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PBS缓冲液中...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊良钟，熊清爵，李庆海，张茂峰，熊孟智，王梓光，张超卫，颜亚伟，曹珍利，
申请(专利权)人：亳州市新健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：