一种产生活性肽的枯草芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，特别是一种产生活性肽的枯草芽孢杆菌及其应用，枯草芽孢杆菌保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏日期是2021年9月9日，保藏号为GDMCC No.61925，该枯草芽孢杆菌经过发酵生产的活性肽作为饲料添加剂时能够大幅提高动物对饲料的转化利用率，提高生产效益。提高生产效益。提高生产效益。

【技术实现步骤摘要】
一种产生活性肽的枯草芽孢杆菌及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，特别是一种产生活性肽的枯草芽孢杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]许多年来在动物饲料和饲养中广泛使用抗生素、化学合成药物、激素等促生长保健剂，导致了畜禽和水产产品中药物残留严重、畜禽产品品质下降、细菌耐药性增强、耐药菌株增多，给人类安全和生态环境带来很大威胁。由于抗生素的诸多副作用，特别是近年来消费者对食品安全问题的关注，世界各国都在纷纷禁用或限制抗生素的使用，并加速开发、推广新型安全高效的绿色饲料添加剂，以减少或替代抗生素等药物添加剂。
[0003]微生态制剂因其独特的理化特性和生物学功能而成为新型绿色饲料添加剂领域的研究热点。目前国内市场上可见到大豆肽，多为进口产品，价格昂贵，主要是通过酶法来生产的。酶法是应用蛋白酶如木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶等植物蛋白酶或用胰蛋白酶、胃蛋白酶等动物蛋白酶，将大豆蛋白降解为小肽，但这种方法生产的大豆肽容易产生令人难以接受的腥味或苦味，且生产成本高，不适于在畜牧业中应用；微生物发酵法与酶法相比可将微生物产酶和酶解合二为一，缩短工序，降低成本，且大豆肽产品有天然的芳香味，口感好。
[0004]枯草芽孢杆菌在代谢过程种可产生大量的蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶及其他有益因子，进入生物体内后能快速定殖，在肠道内形成良好的微生态环境，具有加强动物消化能力，降解抗营养因子，增加饲料利用率，增强动物免疫力等功效。我国农业部公布的可以直接饲喂动物的饲料级微生物添加剂菌种中就包括了枯草芽孢杆菌，其作为安全益生菌，现已在饲料领域得到广泛的应用。

技术实现思路

[0005]为此，需要提供一种产生活性肽的枯草芽孢杆菌及其应用，枯草芽孢杆菌发酵生产的活性肽能够提高动物对饲料中营养元素的吸收利用率，提高奶、肉、蛋产量和生产能力。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了一种产生活性肽的枯草芽孢杆菌，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏日期是2021年9月9日，保藏号为GDMCC No.61925。
[0007]上述的产生活性肽的枯草芽孢杆菌的应用，应用于发酵制备活性肽枯草芽孢杆菌饲料添加剂。
[0008]进一步，制备活性肽枯草芽孢杆菌饲料添加剂包括如下步骤：
[0009](1)从营养琼脂斜面培养基上挑取一种环已活化的上述的枯草芽孢杆菌接种到种子培养基中，培养条件为25
‑
35℃，100
‑
300r/min
‑1，12
‑
36h，得到种子液；
[0010](2)以植物蛋白为发酵原料，加水配制成重量百分比浓度为5
‑
20％，调整PH值为6.0
‑
7.0，然后在121℃高温下进行灭菌处理，冷却至30
‑
35℃，得到液体发酵培养基；
[0011](3)将种子液按照接种量2
‑
4％接种于液体发酵培养基，进行发酵罐发酵，发酵时保持温度在35℃
±
2℃，发酵周期为24
‑
48小时；
[0012](4)将步骤(3)的发酵液与载体进行混匀，经过喷雾干燥后，得到活性肽枯草芽孢杆菌饲料添加剂。发酵液中菌丝和活性肽一起进行喷雾干燥，使得制备的饲料添加剂包含有活性肽和枯草芽孢杆菌。
[0013]进一步，种子培养基的配方为：酵母提取物4
‑
10g/L、氯化钠3
‑
10g/L、蛋白胨5
‑
10g/L、余量为蒸馏水，pH为7.0。
[0014]进一步，所述植物蛋白为大豆蛋白和/或谷蛋白。
[0015]进一步，所述大豆蛋白包括大豆分离蛋白、豆粕、豆饼、大豆，所述谷蛋白包括玉米蛋白、玉米蛋白粉和小麦蛋白。
[0016]进一步，所述载体为糊精和/或淀粉。
[0017]进一步，所述糊精为麦芽糊精、环糊精中的至少一种，所述淀粉为玉米淀粉、小麦粉、变性淀粉中的至少一种。
[0018]进一步，活性肽饲料添加剂在饲料中的添加量为100
‑
500g/t。
[0019]上述技术方案具有以下有益效果：
[0020]本专利技术中，筛选的枯草芽孢杆菌菌株具有可通过发酵，高产活性肽，并且发酵液和菌丝一起进行喷雾干燥作为饲料添加剂进行应用，活性肽饲料添加剂能够有效的提高动物对营养素(如蛋白质、矿物质、维生素等)吸收利用率、提高奶、肉、蛋产量和生产能力，且改善奶、肉、蛋的品质和风味，刺激动物免疫器官发育，提高免疫力和减少发病率，能广泛用于禽、牛、羊、猪、水产等经济动物，可作为抗生素的替代品等优质的活性肽枯草芽孢杆菌饲料添加剂。
附图说明
[0021]图1为副溶血弧菌拮抗菌株筛选的菌株的生长曲线。
[0022]图2为筛选的菌株活性肽进行拮抗副溶血弧菌的抑菌圈图。
具体实施方式
[0023]为详细说明技术方案的
技术实现思路
、构造特征、所实现目的及效果，以下结合具体实施例并配合附图详予说明。
[0024]实施例1，
[0025]产生活性肽的枯草芽孢杆菌的诱变和筛选方法包括如下步骤：
[0026]1.菌株筛选用采集到的土壤制备菌悬液，于无菌环境中，将200ul菌悬液均匀涂布于LB固体培养基平板上，于37℃恒温培养箱中培育24h。
[0027]LB固体培养基：5g酵母提取物，10g胰蛋白胨，10g氯化钠，15g琼脂粉，1L蒸馏水，调节pH为7.3
±
0.2，121℃高压灭菌20min。
[0028]2.菌株纯化鉴定培养基表面长满单菌落后，根据菌株外观性状，挑取疑似枯草芽孢杆菌单菌落，分别接种于LB液体培养基中，摇床37℃，200r/min培养18h。
[0029]取培育后的菌液稀释成10
‑2，10
‑3浓度梯度，分别吸取100ul菌悬液涂布于LB固体培养基平板中，于37℃恒温培养箱中培育24h。得纯化后的单菌落，对单菌落进行PCR扩增后送测序鉴定，选取确定为枯草芽孢杆菌的菌落菌液于
‑
20℃冰箱中保藏备用。
[0030]LB液体培养基：5g酵母提取物，10g胰蛋白胨，10g氯化钠，1L蒸馏水，调节pH为7.3
±
0.2，121℃高压灭菌20min。
[0031]3.副溶血弧菌拮抗菌株筛选挑取枯草芽孢杆菌单菌落，分别接种于LB液体培养基中，摇床37℃，200r/min培养18h。取枯草芽孢杆菌菌体和发酵上清液接种于涂有副溶血弧菌的LB固体培养基上，于37℃恒温培养箱中培育24h。根据菌株生长状况及抑菌圈的形成情况，选取与副溶血弧菌有拮抗作用的菌株。
[0032]4.菌株生长曲线测定分别取与副溶血弧菌有拮抗作用的菌株，接种于100ml LB液体培养基中，37℃、230r/min摇床培养。采用吸光光度法绘制各个枯草芽孢杆菌菌株的生长曲线，每隔2h用移液器取样，测定波长600nm的OD值，并作记本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种产生活性肽的枯草芽孢杆菌，其特征在于，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏日期是2021年9月9日，保藏号为GDMCC No.61925。2.一种如权利要求1所述的产生活性肽的枯草芽孢杆菌的应用，其特征在于，应用于发酵制备活性肽枯草芽孢杆菌饲料添加剂。3.如权利要求2所述的产生活性肽的枯草芽孢杆菌的应用，其特征在于，制备活性肽枯草芽孢杆菌饲料添加剂,包括如下步骤：(1)挑取一种环已活化的权利要求1所述的枯草芽孢杆菌，接种到种子培养基中，培养条件为25
‑
35℃，100
‑
300r/min
‑1，12
‑
36h，得到种子液；(2)以植物蛋白为发酵原料，加水配制成重量百分比浓度为5
‑
20％，调整PH值为6.0
‑
7.0，然后在121℃高温下进行灭菌处理，冷却至30
‑
35℃，得到液体发酵培养基；(3)将种子液按照接种量2
‑
4％接种于液体发酵培养基，进行发酵，发酵时保持温度在35℃
±
2℃，发酵周期为24
‑
48...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄贞胜，庄淑芳，谢晓露，林斌，
申请(专利权)人：厦门海嘉成生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：