一种用于抗炎和促组织再生的巨噬细胞来源外泌体制剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种用于抗炎和促组织再生的巨噬细胞来源外泌体制剂及其制备方法和应用。所述制剂包括M2型巨噬细胞来源外泌体。本发明专利技术的巨噬细胞来源外泌体制剂可用于制备治疗炎性疾病、组织修复、退行性病变的药物、保健品或营养补充剂。本发明专利技术M2巨噬细胞外泌体制剂制备简单、材料来源广泛、储存方便，相对于细胞疗法，外泌体副作用小且不易引起免疫反应，应用后能调节炎症平衡、促进伤口愈合、减缓退变性疾病进展，可以多种形式应用，具有很好的临床应用价值。床应用价值。床应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种用于抗炎和促组织再生的巨噬细胞来源外泌体制剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别涉及一种用于抗炎和促组织再生的巨噬细胞来源外泌体制剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]维持皮肤完整性对于机体至关重要，而组织损伤和修复是人体中极其复杂的过程，涉及各种分子机制及遗传表观学机制。到目前为止，已有研究证实了伤口愈合是通过四个精确且高度程序化的阶段实现的：止血、炎症、增殖和重塑。若这些阶段受到干扰，未能及时、适当地发生则会导致伤口延迟愈合或病理性伤口愈合。其中，炎症在生物学上被定义为"身体的免疫系统对某种刺激的反应"，主要是由各种病原体感染、或组织损伤引起的，被认为是机体的保护性反应，在组织修复中起着重要作用。因此，针对炎症的研究在改善和治疗慢性病领域具有良好的前景。
[0003]止血在组织损伤后会立即开始，伴随着血管收缩和纤维蛋白凝块的形成。一旦出血得以控制，即进入炎症阶段。该阶段在急性伤口中一般持续2
‑
5天，而受种种因素影响，炎症期亦可持续数周或甚至数月，此时伤口转变为慢性伤口。早期伤口处的炎症可以起到保护伤口的作用，是对伤口愈合有利的，但一旦炎症迁延成慢性炎症，会使伤口转为慢性伤口，不利于伤口愈合，因此，调节控制促炎
‑
抗炎平衡对伤口愈合很重要。
[0004]巨噬细胞是先天免疫细胞，在生理和病理过程中都扮演着极其重要的角色。在伤口修复的早期，巨噬细胞导致炎性细胞因子的产生以及病原体和碎片的清除。在伤口愈合炎症阶段的后期，巨噬细胞有助于炎症的消退并促进组织修复。巨噬细胞主要分为经典激活的促炎M1型巨噬细胞和交替激活的抗炎M2型巨噬细胞。M1巨噬细胞可分泌促炎因子如IL
‑
1β、IL
‑
6等促进炎症发展，而M2巨噬细胞则主要分泌IL
‑
10、Arg
‑
1等抑制炎症发展。因此，巨噬细胞表型的可塑性是皮肤伤口修复过程中重要的调控靶点，进而专利技术人认为，提供一种通过调节促炎
‑
抗炎平衡从而治疗多种炎症相关疾病的制剂是非常有必要的。

技术实现思路

[0005]本专利技术为了解决上述技术问题，提供了一种用于抗炎和促组织再生的巨噬细胞来源外泌体制剂及其制备方法和应用。
[0006]第一方面，本申请提供了一种巨噬细胞来源外泌体制剂，是通过以下技术方案得以实现的。
[0007]一种巨噬细胞来源外泌体制剂，包括M2型巨噬细胞来源外泌体。
[0008]进一步的，制剂中M2型巨噬细胞来源外泌体的有效浓度大于等于50μg/mL。
[0009]进一步的，制剂总体积为200μL，外泌体含量大于等于10μg。
[0010]进一步的，M2型巨噬细胞来源外泌体的直径为30
‑
150nm。优选的，M2型巨噬细胞来源外泌体的直径为50
‑
90nm。
[0011]进一步的，所述M2型巨噬细胞来源于人或动物，所述动物选自鼠、兔、猪、羊或猴。
[0012]进一步的，所述制剂还包括药学上可接受的载体。
[0013]进一步的，所述药学上可接受的载体选自磷酸盐缓冲液和/或生理盐水，或具备缓释功能的水凝胶。所述具备缓释功能的水凝胶选自海藻酸盐水凝胶、壳聚糖、透明质酸、PEG中的一种或多种。
[0014]进一步的，所述制剂为注射剂、胶囊剂、片剂、粉末剂、软膏剂或喷雾剂。
[0015]进一步的，所述M2型巨噬细胞来源外泌体应用基因工程方法进行改造，优选为，负载具有特殊功能的mRNA、LcRNA的M2型巨噬细胞来源外泌体，得到具有特定功能的外泌体制剂。
[0016]第二方面，本申请提供了一种巨噬细胞来源外泌体制剂的制备方法，是通过以下技术方案得以实现的。
[0017]一种上述巨噬细胞来源外泌体制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0018]S1.将M0巨噬细胞以1
×
105‑5×
105个的密度接进行接种，细胞贴壁后，用20
‑
25ng/mL IL
‑
4处理M0巨噬细胞48
‑
60h，得到M2巨噬细胞；
[0019]S2.将M2巨噬细胞在无血清条件下孵育2
‑
3d，收集上清，通过差速离心方法收集外泌体：4℃300
‑
400g离心8
‑
10min以移除细胞；2000
‑
2500g离心8
‑
10min以移除死细胞；130000
‑
150000g离心90
‑
100min以获取外泌体球；130000
‑
150000g离心90
‑
100min得到外泌体沉淀；用PBS溶液重悬外泌体沉淀，滤膜过滤后得到M2型巨噬细胞来源外泌体。
[0020]第三方面，本申请提供了巨噬细胞来源外泌体制剂的临床应用，是通过以下技术方案得以实现的。
[0021]一种上述巨噬细胞来源外泌体制剂在制备治疗炎症性疾病药物、保健品或营养补充剂中的应用。所述炎症性疾病包括类风湿性关节炎、肾炎、SLE或硬皮病。
[0022]一种上述巨噬细胞来源外泌体制剂在制备修复组织损伤药物、保健品或营养补充剂中的应用。所述组织损伤包括心梗后损伤，皮肤缺损、骨缺损、软骨损伤、肌肉损伤、肌腱损伤或神经缺损。
[0023]一种上述巨噬细胞来源外泌体制剂在制备治疗退变性疾病药物、保健品或营养补充剂中的应用。所述退变性疾病包括骨关节炎、脊柱退行性疾病。
[0024]本申请具有以下有益效果。
[0025]本专利技术采用M2型巨噬细胞外泌体引导的细胞重编程技术可实现从M1型巨噬细胞到M2型巨噬细胞的转变，从而使伤口部位通过促进血管生成、再上皮化和胶原沉积加速愈合。本专利技术M2巨噬细胞外泌体制剂制备简单、材料来源广泛、储存方便，相对于细胞疗法，外泌体副作用小且不易引起免疫反应，应用后能调节炎症平衡、促进伤口愈合、减缓退变性疾病进展，可以多种形式应用，具有很好的临床应用价值。
附图说明
[0026]图1是本专利技术RAW264.7细胞STR位点的基因分型结果图；
[0027]图2是本专利技术M2巨噬细胞的表型验证结果图(其中，A.Western Blot检测结果图；B.qRT
‑
PCR检测结果图，**p<0.01)；
[0028]图3是本专利技术M2
‑
Exo的表征结果图(其中，A.M2
‑
Exo的TEM图；B.M2
‑
Exo粒径的检测
结果图；C.流式细胞分析术检测结果图；D.Western blot检测结果图)；
[0029]图4是本专利技术M1巨噬细胞的表型验证结果图(其中，A.Western Blot检测结果图；B.qRT
‑
PCR检测结果本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种巨噬细胞来源外泌体制剂，其特征在于：包括M2型巨噬细胞来源外泌体。2.根据权利要求1所述的一种巨噬细胞来源外泌体制剂，其特征在于：制剂中M2型巨噬细胞来源外泌体的有效浓度大于等于50μg/mL。3.根据权利要求1所述的一种巨噬细胞来源外泌体制剂，其特征在于：所述M2型巨噬细胞来源于人或动物，所述动物选自鼠、兔、猪、羊或猴。4.根据权利要求1所述的一种巨噬细胞来源外泌体制剂，其特征在于：所述制剂还包括药学上可接受的载体。5.根据权利要求4所述的一种巨噬细胞来源外泌体制剂，其特征在于：所述药学上可接受的载体选自磷酸盐缓冲液和/或生理盐水，或具备缓释功能的水凝胶。6.根据权利要求1所述的一种巨噬细胞来源外泌体制剂，其特征在于：所述制剂为注射剂、胶囊剂、片剂、粉末剂、软膏剂或喷雾剂。7.一种权利要求1
‑
6任一所述巨噬细胞来源外泌体制剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：S1.将M0巨噬细胞以1
×
105‑5×
105个的密度接进行接种，细胞贴壁后，用20
‑
25ng/mL IL
‑
4处理M0巨噬细胞48
‑
60h，...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨强，赵艳红，邢逸，马信龙，窦一鸣，杨磊，孙逊，王敏，赵昕，
申请(专利权)人：天津市天津医院，
类型：发明
国别省市：