一种同时检测添加剂、L-肉碱和D-肉碱的方法技术

本发明专利技术涉及一种同时检测添加剂、L

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测添加剂、L
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肉碱和D
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肉碱的方法


[0001]本专利技术涉及色谱检测方法，特别是一种高效液相色谱检测方法，能够实现包括L
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肉碱和D
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肉碱等多种添加剂的同时检测分析，属于光电分析


技术介绍

[0002]左旋肉碱，又称左卡尼汀，是一种促使脂肪转化的类氨基酸，在生物体的脂肪代谢过程中起着重要作用。国内为研究表明，猪饲料中添加左旋肉碱能够提高仔猪抗应激能力，提高育肥猪的胴体品质，提高母猪的繁殖性能；水产饲料中添加左旋肉碱能够提高水生动物的生长性能；肉鸡饲料中添加左旋肉碱能够降低肉鸡腹水的发生率，改善肉鸡出壳时间和受精蛋孵化率。
[0003]近年来左旋肉碱越来越多地应用于动物饲料中，对于饲料企业来说，饲料添加剂左旋肉碱含量的精准测定不仅有利于精准营养配方，还能节约生产成本，意义重大。
[0004]国内外有关食品中左旋肉碱的检测方法较多，研究样品多数为血浆、乳制品、尿液、食品、保健品、减肥产品等。采用的仪器设备主要有：离子色谱法、分光光度法、液相色谱法以及液相色谱－串联质谱法等，每种方法都有各自的优缺点。
[0005]赵淑娟，建立了乳粉中左旋肉碱含量的液相色
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谱串联质谱测定法。样品采用20％甲酸水
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乙腈提取，通过正交试验优化皂化条件：15％氢氧化钾溶液按5:1在60℃条件下皂化20min。
[0006]李秀英、黄嘉乐、邱志超等，在“微波水解/超高效液相色谱<br/>‑
串联质谱法快速测定乳粉中的胆碱和左旋肉碱”，《食品安全质量检测学报》2016，利用微波消解技术对乳粉样品进行水解，释放出结合态的胆碱和左旋肉碱。通过微波技术辅助水解，缩短了样品处理的时间，适用于乳粉中的胆碱和左旋肉碱的检测。
[0007]徐敦明,陈燕,张缙等，“Determination of L
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Carnitine in Dairy Products by High Performance Liquid Chromatography
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Electrospray Ionization Tandem Mass Spectrometry”，《分析测试学报》。在该论文公开的方法中，建立了高效液相色谱
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串联质谱内标法测定乳品中左旋肉碱含量的方法，样品经0.1mol/L HC1溶解，采用乙腈溶液沉淀蛋白，以HILIC色谱柱分离待测物，采用鞘流电喷雾离子化，正离子多反应监测模式(MRM)检测，内标法定量。
[0008]宋周虎、周璐意、胡晓敏人等在“离子对色谱法测定保健食品中左旋肉碱的含量”《今日药学》中，建立了一种离子色谱法检测减肥类保健食品中左旋肉碱含量，采用ODS柱进行分离，以40mmol/L磷酸二氢钾缓冲溶液
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乙腈(95∶5)为流动相，流速：0.8mL/min，检测波长：220nm，定量管进样20μL，该方法简便、快速，可用于含左旋肉碱保健食品的含量检测。
[0009]马瑞欣、李同庆、张志华在论文“渔用配合饲料中左旋肉碱含量的测定”，《河北渔业》中，针对饲料检测建立了高效液相色谱
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串联质谱法检测渔用饲料中左旋肉碱的含量，该方法采用超纯水对样品进行提取，经亲水作用色谱柱(HILIC)分离后采用三重四级杆进行定量分析。该方法存在基质效应，基质抑制率分别为鳖料19.7％，鲫鱼料17.9％，锦鲤料
3.37％。
[0010]关于饲料添加剂左旋肉碱的检测方法，目前采用的是农业行业标准NY/T1028
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2006《饲料添加剂左旋肉碱》。该含量测定方法以冰乙酸为溶剂，结晶紫为指示剂，高氯酸标准溶液滴定其中的碱性氮来推算。
[0011]中国专利CN104914183A公开一种左卡尼汀光学纯度分析方法，所述方法为手性高效液相色谱法测定左卡尼汀光学纯度方法，包括设置色谱分析条件和样品处理步骤：Chirobiotic T柱(150
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4.6mm，5μm)；流动相：乙腈
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水(调pH6.0)，使用前经0.45μm滤膜滤过并脱气；流速：1.0mL/min；紫外检测波长：210nm；进样量：5μL；柱温：20℃；色谱柱为Chirobiotic T柱；流动相为乙腈
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水(调pH6.0)；柱温为20℃。将左卡尼汀用甲醇溶解，供试液5ul进样，记录色谱图。该方法采用手性高效液相色谱法测定左卡尼汀光学纯度，灵敏度高、重现性较好，且操作较简单，为测定左卡尼汀光学纯度提供了一种有效可靠的分析方法。
[0012]中国专利CN104698101A公开一种应用于药物检测领域中的一种左卡尼汀及其盐类产品中右卡尼汀含量的高效液相检测方法，该方法采用手性固定相高效液相色谱法,手性固定相选用环糊精及其衍生物键合硅胶填料，使得左卡尼汀、右卡尼汀、左卡尼汀杂质A三种成分的分离效果好、方法重复性及耐用性好；流动相选用三乙胺
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醋酸水溶液与乙腈体系，该流动相对手性色谱柱基本无损伤，色谱峰保留时间重复性好，峰型对称。
[0013]现有专利检测方法利用手性色谱柱进行检测分析，公开了一些利用手性色谱柱进行左旋肉碱的分离的方法，但是这些方法容易受到影响因素的干扰，主要就在于手性色谱柱本身对于同样具有手性已经亲和性的杂质成分的影响。
[0014]同时，现有技术的检测方法通常都只能针对单一的添加剂或肉碱进行检测分析。对于饲料生产企业而言，这些单一检测方法或国标方法，众多左旋肉碱的化验分析方法需要用到衍生化处理，消耗大量的人力或检测试剂、检测仪器进行化验分析，导致企业大量生产饲料的成本居高不在，不利于这些优秀的饲料添加剂的大范围推广应用。如果能够提供一种同时检测多种不同添加剂的方法，则可以很好地降低饲料生产企业，畜禽养殖户的化验成本，进而使得这些技术可以更好地推广应用，达到降低食品生产行业的上游成本，利国利民。

技术实现思路

[0015]本专利技术的主要目的在于针对现有技术中各种检测方法难以同时兼顾多种不同检测分析对象，特别是对于左旋肉碱需要衍生化处理，消耗大量人力、物力进行化验分析的不足，提供一种能够同时检测多种成分的高效液相色谱法。
[0016]为了实现上述专利技术目的，提供以下技术方案：
[0017]一种能够同时检测多种成分的高效液相色谱法，包括以下步骤：
[0018]S1、制备标准试剂，并采用高效液相色谱仪按照以下色谱条件进行检测分析，建立回归方程。
[0019]所述标准试剂包括L
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肉碱标准溶液。
[0020]所述色谱条件如下：色谱柱为手性色谱柱；流动相为乙腈
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高氯酸钠溶液，柱温25摄氏度，流速0.5mL/min。
[0021]S2、样品前处理及检测：称取饲料添加剂样品或预混料，加入超纯水超声提取5
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30min，取出冷却至室本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能够同时检测多种成分的高效液相色谱法，其特征在于，包括以下步骤：S1、制备标准试剂，并采用高效液相色谱仪按照以下色谱条件进行检测分析，建立回归方程；所述标准试剂包括L
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肉碱标准溶液；所述色谱条件如下：色谱柱为手性色谱柱；流动相为乙腈
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高氯酸钠溶液，柱温25摄氏度，流速0.5mL/min；S2、样品前处理及检测：称取饲料添加剂样品或预混料，加入超纯水超声提取5
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30min，取出冷却至室温，用超纯水定容至刻度，经0.22
µ
m水相滤膜过滤，上机检测，色谱条件同S1；S3、将S2检测得到的结果带入S1建立的回归方程，计算得到添加剂浓度。2.根据权利要求1所述的能够同时检测多种成分的高效液相色谱法，其特征在于，所述L
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肉碱标准溶液包括：5.0、10.0、20.0、50.0、100.0
µ
g/mL的标准工作溶液。3.根据权利要求1所述的能够同时检测多种成分的高效液相色谱法，其特征在于，先配制浓度为1000
µ
g/mL的标准储备液，然后稀释得到标准工作溶液。4.根据权利要求3所述的能够同时检测多种成分的高效液相色谱法，其特征在于，所述标准储备液是L
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肉碱用甲醇溶解得到的。5.根据权利要求1所述的能够同时检测多种成分的高效液相色谱法，其特征在于，所述流动相为乙腈和高氯酸钠溶液的混合溶液，两者体积比为15

【专利技术属性】
技术研发人员：梁玉树，何开蓉，乔煦玮，李勇，熊安琪，刘尚群，王力，杜倩男，刘珊，李欣欣，
申请(专利权)人：新希望六和股份有限公司，
类型：发明
国别省市：