与ONFH风险性有关CEBPA、PPARγ、CREBBP基因SNP检测物质及应用制造技术

本发明专利技术公开了与ONFH风险性有关CEBPA、PPARγ、CREBBP基因SNP检测物质及应用，具体为与非创伤性股骨头坏死风险性有关CEBPA、PPARγ、CREBBP基因的单核苷酸多态性的检测物质及其应用，具体涉及的单核苷酸多态性位点为rs17694108、rs3745971、rs10500264，rs2920502、rs2028759、rs3856806，rs2072381、rs9392、rs2283487、rs3751845、rs129974。本发明专利技术首次阐述了上述11SNPs与非创伤性股骨头坏死发病风险的关联，对非创伤性股骨头坏死分子预警及分子水平防治具有重大价值。预警及分子水平防治具有重大价值。预警及分子水平防治具有重大价值。

【技术实现步骤摘要】
与ONFH风险性有关CEBPA、PPAR
γ
、CREBBP基因SNP检测物质及应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及检测与非创伤性股骨头坏死风险性有关基因的单核苷酸多态性的物质，进一步将其用于非创伤性股骨头坏死的分子预警、药物治疗靶标和临床分子诊断与分型。

技术介绍

[0002]股骨头坏死(osteonecrosisofthefemoralhead，ONFH)是由遗传因素与环境因素共同作用引起的复杂性疾病。在近10多年来，ONFH的发病率呈现逐年增加的趋势。据估计在美国年均20000～30000位患者被新诊断为ONFH，在中国每年新增ONFH病例为150000～200000，而且目前中国成年人ONFH患者812万人，主要发病群体为40岁至50岁之间的青壮年，致残率高，导致严重社会与家庭经济负担，是目前人类健康面临主要挑战之一。及早发现ONFH遗传学分子诊断标志物进而实施早期分子预警，使其防治时段前移，是降低ONFH发病率的关键。
[0003]近年来ONFH分子发病机理研究进展的重要标志之一，是陆续提出了纤溶酶原激活/抑制系列、血管生成系列、脂代谢系列、Ⅱ型胶原系列、细胞因子系列、生长因子系列基因多态性与ONFH的发病风险相关，它们或者与另外一些基因形成连锁不平衡共同影响ONFH的发病，或者影响其它易感基因的表达功能，在ONFH的发生发展中起协同作用。这些遗传分子病因学研究结果清晰地提示，ONFH属于多个微效基因联合参与并由环境因素诱导的复杂病。
[0004]CEBPA基因染色体位置19q13.11，含有1个外显子。该基因编码一个转录因子，它包含一个碱性亮氨酸拉链(bZIP)结构域，并识别靶基因启动子中的CCAAT基序。编码的蛋白质在同型二聚体和含CCAAT/增强子结合蛋白β和γ的异二聚体中起作用。CEBPA基因编码蛋白可以调节参与细胞周期调节和体重动态平衡的基因表达。该基因参与多种不同转录因子的转录协同激活。
[0005]CREBBP基因染色体位置16p13.3，含有33个外显子。该基因最初作为一种结合cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的核蛋白被分离出来，其通过将染色质重构与转录因子识别偶联，在胚胎发育、生长控制和体内平衡中发挥关键作用。由该基因编码的蛋白质具有固有的组蛋白乙酰转移酶活性，并作为支架稳定其它蛋白质与转录复合物之间的相互作用。涉及该基因的染色体易位与急性髓系白血病有关。
[0006]PPARγ基因色体位置3p25.2，含有14个外显子。该基因编码核受体过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)亚家族成员。PPARs与维甲酸X受体(RXRs)形成异二聚体，这些异二聚体调节各种基因的转录。已知有三种PPAR亚型，PPARα、PPARδ和PPARγ。PPARγ是脂肪细胞分化的主控制器。此外，PPARγ与许多疾病的病理学有关，包括ONFH、肥胖、糖尿病、动脉粥样硬化和肿瘤。
[0007]ONFH病变骨髓腔往往充填了大量脂肪组织，因而脂代谢紊乱早已被公认为股骨头
坏死核心发病环节之一。鉴于动物实验及临床研究已充分证实，高脂环境可以抑制成骨细胞的分化，高脂血症后骨髓内脂肪细胞增多增大压迫股骨头微血管引起骨细胞缺血性坏死，较早就推测成脂与成骨分化的调控异常可能在ONFH发生发展起关键作用，但一直不清楚其脂肪蓄积的分子机理。
[0008]近年对骨髓间充质干细胞(bonemesenchymalstemcells，BMSCs)分化微环境的研究，发现了成脂关键转录因子PPARγ在调节成骨、成脂分化中的关键作用。PPARγ是一个II类核受体，一直被定义为脂肪细胞分化的主调控器。在脂肪细胞分化序贯的分子级联事件中，PPARγ基因在脂肪细胞分化的早期表达上调被广泛用作脂肪细胞分化的标志。在PPARγ删除事件中，没有其他因素可以恢复脂肪形成，而且几乎前成脂细胞的所有信号通路均会集于PPARγ，这些关键作用充分展示了PPARγ在脂肪代谢的主调控器地位。PPARγ被充分证明具有拮抗骨形成作用，两者很大程度上介导不同细胞因子决定BMSCs成骨或成脂分化方向，一种转录因子的表达增加往往相关于另一种转录因子的表达下调。
[0009]ONFH被认为是一种干细胞病，由于BMSCs成骨成脂分化转分化障碍，导致大量脂肪蓄积在病变骨髓腔，引发股骨头坏死。成骨转录因子与包括CEBPA、CREBBP及PPARγ在内的成脂转录因子在BMSCs成脂和成骨分化程序中发挥关键调节作用。BMSCs的成骨与成脂分化具有共同的调节途径，Wnt信号通路是控制成脂与成骨分化转换的关键信号通路，成脂主要转录因子PPARγ调控Wnt信号通路朝向成脂分化的方向，成骨主要转录因子Runx2调控Wnt信号通路朝向成骨分化的方向。Wnt信号通路通过细胞增殖和分化调节等系列关键事件控制骨形成和脂肪生成的方向。在成骨倾向的骨髓间充质干细胞，Wnt信号通路被激活，在控制成骨分化和成脂分化的平衡中起关键作用。
[0010]近年来ONFH分子发病机理的重要研究进展是陆续提出了多系列基因多态性与ONFH的发病风险相关，它们或者与另外一些基因形成连锁不平衡共同影响ONFH的发病，或者影响其它易感基因的表达功能，在ONFH的发生发展中起协同作用。这些遗传分子病因学研究结果清晰地提示，ONFH属于多个微效基因联合参与并由环境因素诱导的复杂病。然而，目前国内外关于ONFH的基因多态性研究领域存在的主要瓶颈问题，零散研究基因位点的资料多，系统研究多基因位点的资料少，不利于多种微效基因联合致病的分子病因学与分子发病机理的阐述。这些瓶颈问题是阐述ONFH分子发病机理的严重束缚，也是ONFH分子病因学的最新成果与临床防治实施对接的关键障碍。

技术实现思路

[0011]为解决上述技术问题，本专利技术联合应用分子技术的创新集成在国内外率先阐述成脂分化转录因子PPARγ及其转录共因子CEBPA、CREBBP基因分型、等位基因频率、基因之间的组合与ONFH发病风险的关联，为建立ONFH的分子水平防治对策提出关键分子靶点，用于ONFH的易感人群筛查及早期干预，促进分子病因学的研究成果与ONFH的临床防治及早对接，并在非创伤性股骨头坏死分子预警、分子诊断及治疗药物靶标的具有重要应用价值。
[0012]本专利技术的一个目的是提供了检测与非创伤性股骨头坏死风险性有关CEBPA、PPARγ和CREBBP基因的单核苷酸多态性的物质，所述物质在诊断或辅助诊断非创伤性股骨头坏死中的应用，或在制备诊断或辅助诊断非创伤性股骨头坏死风险性的产品中的应用；或所述物质在评价或辅助评价非创伤性股骨头坏死中的应用，或在制备评价或辅助评价非创伤
性股骨头坏死风险性的产品中的应用；所述与非创伤性股骨头坏死有关的位点或具有交互作用的位点组合为以下(1)至(9)中的任意一个或多个：
[0013](1)CEBPA基因rs17694108位点；(2)CEBPA基因rs3745971位点；(3)PPARγ基因rs2920502位点与CREBBP基因rs2072381本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测与非创伤性股骨头坏死风险性有关CEBPA、PPARγ和CREBBP基因的单核苷酸多态性的物质，其特征在于：所述物质在诊断或辅助诊断非创伤性股骨头坏死中的应用，或在制备诊断或辅助诊断非创伤性股骨头坏死风险性的产品中的应用；或所述物质在评价或辅助评价非创伤性股骨头坏死中的应用，或在制备评价或辅助评价非创伤性股骨头坏死风险性的产品中的应用；所述与非创伤性股骨头坏死有关的位点或位点组合为以下(1)至(9)中的任意一个或多个：(1)CEBPA基因rs17694108位点；(2)CEBPA基因rs3745971位点；(3)PPARγ基因rs2920502位点与CREBBP基因rs2072381位点的组合；(4)PPARγ基因rs2028759位点与CEBPA基因rs10500264位点的组合；(5)PPARγ基因rs3856806位点与CEBPA基因rs17694108位点的组合；(6)CREBBP基因rs9392位点与CREBBP基因rs2283487位点的组合；(7)CREBBP基因rs3751845位点与CREBBP基因rs2283487位点的组合；(8)CREBBP基因rs2072381位点与CREBBP基因rs10500264位点的组合；(9)CREBBP基因rs129974位点与CREBBP基因rs2283487位点的组合。2.如权利要求1所述应用，其特征在于：所述物质为制备诊断或辅助诊断非创伤性股骨头坏死风险性的产品，或所述物质为制备评价或辅助评价非创伤性股骨头坏死风险性的产品，所述产品中包括记载有如下A至M中至少一种条件的可读性载体：A.携带所述rs17694108位点为最小纯合基因型GG型待测人患非创伤性股骨头坏死风险性降低；B.携带所述rs17694108位点的最小等位基因G频率低于对照组的待测人患非创伤性股骨头坏死风险性降低；C.所述rs17694108位点遗传学显性模型(GG+AGvsAA)相关于降低创伤性股骨头坏死风险性；D.所述rs17694108位点遗传学隐性模型(GGvsAG+AA)相关于降低创伤性股骨头坏死风险性；E.携带所述rs3745971位点为最小纯合基因型TT型的待测人患非创伤性股骨头坏死风险性增加；F.携带所述rs3745971位点的最小等位基因T频率高的待测人患非创伤性股骨头坏死风险性增加；G.所述rs3745971位点遗传学显性模型(TT+TCvsCC)相关于增加创伤性股骨头坏死风险性；H.同时携带rs2920502位点最小纯合基因型GG型与rs2072381位点最小纯合基因型AA型的待测人患非创伤性股骨头坏死风险性增加；I.同时携带所述rs2028759位点最小纯合基因型CC型与rs10500264位点最小纯合基因型AA型的待测人患非创伤性股骨头坏死风险性增加；J.同时携带所述rs9392位点最小纯合基因型AA型与rs2283487位点最小纯合基因型GG型的待测人患非创伤性股骨头坏死风险性增加；K.同时携带所述rs3751845位点最小纯合基因型AA型与rs2283487位点最小纯合基因型GG型的待测人患非创伤性股骨头坏死风险性增加；L.同时携带所述rs129974位点最小纯合基因型TT型与rs2283487位点最小纯合基因型GG型的待测人患非创伤性股骨头坏死风险性增加；
M.同时携带所述rs3856806位点最小纯合基因型TT型与rs17694108位点最小纯合基因型GG型的待测人患非创伤性股骨头坏死风险性降低。N.同时携带所述rs2072381最小纯合基因型AA型与rs10500264最小纯合基因型AA型的待测人患非创伤性股骨头坏死风险性降低。3.如权利要求1所述应用，其特征在于：用于检测rs17694108位点的单核苷酸基因多态性的物质为引物对甲或成套单链DNA分子甲；所述引物对甲由如SEQIDNO.1所示的单链DNA分子组成和如SEQIDNO.2所示的单链DNA分子组成：所述成套单链DNA分子甲由如SEQIDNO.1所示的单链DNA、如SEQIDNO.2所示的单链DNA和如SEQIDNO.3所示的单链DNA组成；用于检测rs3745971位点的单核苷酸基因多态性的物质为引物对乙或成套单链DNA分子乙；所述引物对乙由如SEQIDNO.4所示的单链DNA分子组成和如SEQIDNO.5所示的单链...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋旸，董晓明，杜珍武，王晓楠，张桂珍，秦彦国，王金成，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：