神经调节素1促进皮肤创面修复的方法及其应用技术

本发明专利技术公开了NRG1和其受体在制备皮肤创面修复药物或试剂中的应用。所述的NRG1通过促进ErbB4的磷酸化，从而促进皮肤创面修复。本发明专利技术同时公开了一种促进皮肤创面修复的的药物组合物，所述药物组合物为含有NRG1基因的载体。另外，本发明专利技术还提供了一种用于筛选促进皮肤创面修复的潜在物质的方法。本发明专利技术的NRG1及其药物组合物对皮肤创面修复有较好的促进作用，在皮肤创面修复中具有重要的参考和现实意义。另外，本发明专利技术提供的用于筛选促进皮肤创面修复的潜在物质的方法筛选皮肤创面修复的药物和物质有良好的作用，对筛选合适的用于皮肤创面修复的物质时具有较好的衡量和指导作用。创面修复的物质时具有较好的衡量和指导作用。创面修复的物质时具有较好的衡量和指导作用。

【技术实现步骤摘要】
神经调节素1促进皮肤创面修复的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及与皮肤创面修复相关的蛋白及其在促进皮肤创面修复中的应用，具体所述蛋白为NRG1及其受体。属于生物医药领域，具体属于分子生物学


技术介绍

[0002]皮肤是人体最大的感觉器官，具有屏障、感觉、免疫体温调节、内分泌排泄等功能，各种急性损伤如烧伤、皮肤撕脱伤、外科手术等所导致的皮肤大面积缺损十分常见。另外，慢性致伤因素导致的皮肤难愈性创面如压力性溃疡、静脉性溃疡、糖尿病性溃疡等的发病率也在逐年上升，严重影响着患者的经济与生活质量，给创面修复外科医师带来巨大的挑战。皮肤创面修复的过程是一个由各种不同类型的细胞、细胞外基质、细胞因子及生长因子等共同参与的精密协调的复杂而有序的过程。近年来人们对皮肤创面修复的研究取得许多重要的进展，但是目前对于创面愈合过程中不同修复因子在创面愈合过程中的作用及机制仍不明晰，这亟需人们从新的角度深入探讨皮肤创伤修复的调控机制。
[0003]当前研究证明，周围神经系统可通过分泌神经肽、神经递质、神经激素等多种物质调控皮肤的生理及修复再生的过程。目前研究较多的是神经肽，包括：P物质(substance P，SP)、降钙素基因相关肤(Calcitonin gene related peptide，CGRP)血管活性肠肽(vasoactive intestinal polymetric，VIP)等。研究表明神经肽在皮肤创伤修复过程中不仅起到信号传导和协调的作用，而且还可能是启动创伤修复的原始信号。最近的研究还发现皮肤神经可通过分泌血小板源性生长因子(platelet
‑
derived growth factor，PDGF)在小鼠皮肤创伤修复中发挥重要的作用。以上证据表明，周围神经可通过分泌神经递质和细胞因子等方式介导神经与皮肤创伤修复之间信号转导作用，但是基于这些研究的相关治疗未见有效应用于临床。因此研究神经分泌的关键分子在皮肤创伤修复过程中的调控作用，对创伤或慢性致伤因素导致的周围神经病变的皮肤修复再生至关重要。

技术实现思路

[0004]为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的之一在于提供一种蛋白标志物在促进皮肤创面修复的产品中的用途；本专利技术的目的之二在于提供一种评价该蛋白表达水平的试剂盒。
[0005]为了研究与皮肤创面修复相关的蛋白在皮肤创面修复中的作用，从而筛选合适的蛋白。我们通过生物信息学技术及现代分子生物学技术从皮肤创面组织中找到了可以作为皮肤创面修复标志物的NRG1。
[0006]因此，本专利技术一方面提供了一种蛋白，所述蛋白为NRG1，所述的NRG1的靶基因为ErbB酪氨激酶受体家族，所述的NRG1在制备皮肤创面修复药物或试剂中的应用。
[0007]优选地，本专利技术所述的药物或试剂为提高NRG1表达量的药物或试剂。
[0008]优选地，本专利技术所述的提高NRG1表达量的药物或试剂包含：(1)NRG1及其编码基因；(2)含有NRG1编码基因的重组载体。
[0009]优选地，本专利技术所述的提高NRG1表达量的药物或试剂包含重组载体rAAV
‑
CMV
‑
3*flag
‑
NRG1
‑
3*HA
‑
IRES
‑
mcherry。
[0010]优选地，本专利技术所述的rAAV
‑
CMV
‑
3*flag
‑
NRG1
‑
3*HA
‑
IRES
‑
mcherry是通过皮肤电转导入皮肤。
[0011]再一方面，本专利技术还提供了一种ErbB4磷酸化促进剂，所述的ErbB4磷酸化促进剂在制备皮肤创面修复药物和试剂中的应用。
[0012]优选地，本专利技术所述的ErbB4磷酸化促进剂为ErbB4的特异性配体和/或ErbB4磷酸化激酶区域激活剂。
[0013]优选地，本专利技术所述的ErbB4磷酸化促进剂为NRG1。
[0014]再一方面，本专利技术还提供了一种促进皮肤创面修复的药物组合物，所述药物组合物包括NRG1基因或其上调剂。
[0015]优选地，本专利技术所述的药物组合物为含有NRG1编码基因的重组载体。
[0016]优选地，本专利技术所述的含有NRG1编码基因的重组载体为rAAV
‑
CMV
‑
3*flag
‑
NRG1
‑
3*HA
‑
IRES
‑
mcherry。
[0017]再一方面，本专利技术还提供了一种NRG1和/或ErbB4的用途，所述的NRG1和/或ErbB4用于筛选促进皮肤创面修复的潜在物质。
[0018]再一方面，本专利技术还提供了一种使用NRG1和/或ErbB4筛选促进皮肤创面修复的潜在物质的方法，所述方法包括以下步骤：(a)将候选物质与表达NRG1和/或ErbB4的体系接触；(b)检测NRG1的表达或活性，若所述候选物质在统计学上提高NRG1的表达或活性，则表明该候选物质是促进皮肤创面修复的潜在物质；和/或检测ErbB4的磷酸化水平，若所述候选物质在统计学上提高ErbB4的磷酸化水平，则表明该候选物质是促进皮肤创面修复的潜在物质。
[0019]优选地，本专利技术所述方法步骤(a)中，所述的体系表达NRG1和ErbB4，两者发生相互作用；步骤(b)中，检测NRG1和ErbB4相互作用情况，若所述候选物质在统计学上NRG1和ErbB4的相互作用，则表明该候选物质是促进皮肤创面修复的潜在物质。
[0020]NRG1及其相关用途：
[0021]神经调节蛋白1(Neuregulin 1，NRG1)是广泛存在于中枢和外周神经系统的细胞外生长因子，通过作用于ErbB酪氨酸激酶受体家族成员(包括ErbB2、ErbB3和ErbB4)，可产生广泛的生物学功能，在细胞的增殖、分化及迁移中发挥重要的调控作用。专利技术人在研究中发现，NRG1及其ErbB4信号通路活性可响应皮肤创伤刺激而上调升高，这种效应在皮肤损伤修复的过程发挥着重要的调控作用。
[0022](1)ErbB4受体蛋白在正常皮肤及损伤后表达及变化情况：
[0023]动物模型中观察发现，皮肤损伤引起创缘皮肤中的NRG1表达急剧升高并激活创缘组织中ErbB4信号通路。Western Blot检测结果显示，皮肤中NRG1蛋白表达和ErbB4磷酸化活性在皮肤损伤后第1天开始即升高，随着皮肤创面的的逐渐愈合表达水平也逐渐降低。
[0024](2)NRG1/ErbB4信号通路在皮肤损伤修复中的重要作用：
[0025]首先利用皮肤电转基因过表达的技术，成功将小鼠NRG1全长基因过表达质粒转入皮肤细胞内，在皮肤及创缘中成功表达NRG1蛋白，发现皮肤局部过表达NRG1蛋白可促进小鼠皮肤创面愈合。
[0026]创面分别局部应用ErbB4抑制剂AG1478(5本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蛋白，所述蛋白为NRG1，所述的NRG1的靶基因为ErbB酪氨激酶受体家族，其特征在于，NRG1在制备皮肤创面修复药物或试剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物或试剂为提高NRG1表达量的药物或试剂；所述的提高NRG1表达量的药物或试剂包含：(1)NRG1及其编码基因；(2)含有NRG1编码基因的重组载体。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的提高NRG1表达量的药物或试剂包含重组载体rAAV
‑
CMV
‑
3*flag
‑
NRG1
‑
3*HA
‑
IRES
‑
mcherry；所述的rAAV
‑
CMV
‑
3*flag
‑
NRG1
‑
3*HA
‑
IRES
‑
mcherry是通过皮肤电转导入皮肤。4.一种ErbB4磷酸化促进剂，其特征在于，所述的ErbB4磷酸化促进剂在制备皮肤创面修复药物和试剂中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的ErbB4磷酸化促进剂为ErbB4的特异性配体和/或ErbB4磷酸化激酶区域激活剂；所述的ErbB4磷酸化促进剂为NRG1。6.一种促进皮肤创面修复的药物组合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭国鹤，刘媛媛，李顺堂，赵劲民，伍伟锋，陈相任，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：