用于白血病/淋巴瘤免疫分型初筛的抗体组合物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种用于白血病/淋巴瘤分型的试剂组合物，所述试剂组合物包括19种抗体。本发明专利技术优化抗体组合和对应抗体的荧光标记组合以及结果判读方法，只需要使用19种抗体一管细胞一次上样，既可以全面、高效的对AML、ALL

【技术实现步骤摘要】
用于白血病/淋巴瘤免疫分型初筛的抗体组合物及其应用


[0001]本专利技术涉及抗体医药领域，尤其是涉及一种用于白血病/淋巴瘤免疫分型初筛的抗体 组合物及其应用。

技术介绍

[0002]白血病和淋巴瘤是造血系统的恶性肿瘤，分化受阻于不同阶段而形成相应亚型。白血 病和淋巴瘤的临床分类非常多，2017版WHO对血液及淋巴系统肿瘤的分类主要包括， 急性髓细胞白血病(AML)和相关的髓系前体细胞肿瘤(表1)，前体淋巴肿瘤：包括B 淋母细胞白血病/淋巴瘤(B
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ALL/LBL)、T淋母细胞白血病/淋巴瘤(T
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ALL/LBL)，急 性系列不明型白血病(MPAL)：包括T/髓，B/髓混合等，慢性髓系肿瘤(表2)，成熟 B细胞肿瘤，成熟T和NK细胞肿瘤，霍杰金淋巴瘤(HL)，免疫缺陷相关的淋巴细胞 增殖性疾病及组织细胞和树突细胞肿瘤共等9大类。成熟B和T/NK淋巴瘤又称为非霍杰 金淋巴瘤(NHL)。浆细胞来源克隆性肿瘤(PCN)列于成熟B细胞肿瘤大类内。T、B
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NHL 又根据病理特征再分为20
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30种亚型。由此可见，血液淋巴系统肿瘤包括近百种不同的疾 病，分类非常复杂。
[0003]表1. 2017版WHO关于急性髓细胞白血病(AML)和相关的髓系前体细胞肿瘤分类
[0004][0005][0006]表2. 2017版WHO关于慢性髓系肿瘤的分类
[0007][0008]目前对血液淋巴系统肿瘤的诊断主要依据形态/病理(M)、免疫分型(I)、遗传学 (C)及基因(M)进行MICM综合诊断。
[0009]流式细胞术(Flow Cytometry，FCM)是一种能够对单个细胞实现定量分析的检测手 段，具有快速、高精度、多参数等优点，是目前最先进的细胞定量分析方法之一。通过 FCM对白血病淋巴瘤等血液肿瘤进行免疫分型，是血液肿瘤诊断的重要手段之一。利用 FCM对9大类白血病/淋巴瘤进行全面而精准的诊断，共需要近90种抗体(髓系相关标志 约23种，B系和浆细胞相关标志约30种，T系相关标志约22种，NK相关标志约14种)， 如果一次使用全部抗体，针对9大类疾病均进行全面的检测则总体费用很高，患者的经济 负担太重。因此，在现阶段的临床检验中，多采用两步法，即第一步采用相对少的抗体对 待测样本进行AML、ALL
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T、ALL
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B、MPAL、NHL
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B、NHL
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T、NHL
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NK、浆细胞疾病 及慢性髓系疾病共9大类肿瘤的初步筛查。根据第一步分类的结果选取相应的抗体进行第 二步检测，第二步主要针对疾病亚型分型、微量残留病监测及预后相关及治疗靶点及基因 异常相关标志的筛查。通过两步检测以达到应用相对少的抗体即可以对每一种类型白血 病、淋巴瘤进行准确及全面的诊断。但如何较好的应用两步法的原理，每步选择哪些抗体 进行组合，选取哪种荧光素搭配的抗体均是复杂的过程，这些组合方案的设计需要有高度 经验的人员才能完成。
[0010]2012年欧洲联盟推出一套8色EuroFlow抗体组合，采用二步法对急性、慢性白血病 和淋巴瘤进行免疫分型(Van Dongen J.et al.EuroFlow antibody panels for standardizedn
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dimensional flow cytometric immunophenotyping of normal,reactive and malignantleukocytes.Leukemia 2012.vol 26.1899
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1907)，其方案包括三种筛查管:ALOT(急性白血病 起始管)，共8个抗体；LST(淋巴瘤筛查管)共12个抗体；PCD(浆细胞克隆性疾病) 检测管，共16个抗体。通过三种筛查管，可以对AML、MDS、ALL
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T、ALL
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B、NHL
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B、 NHL
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T、NHL
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NK、PCN、MPAL 9大类进行初筛查。2015年在中华血液学杂志 (vol36:265
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271)发表了“四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识”，采 用2管4色组合用于AML、ALL
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B、ALL
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T及MAPL的初步筛查，不包括对NHL
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B、T、 NK及浆细胞肿瘤的筛
查。无法做到通过一管筛查适于所有血液肿瘤患者。目前，临床上 常规方法为一管10色筛查组合CD7/CD33/CD117/CD19/CD10/CD34/CD38/CD56/ CD5/CD45用于急性和慢性白血病及淋巴瘤初筛。缺点是缺少确定系列特异性最强的抗 体，如胞内cCD3、cCD79、cCD22、cMPO，及判断B细胞和T细胞克隆性标志： kappa/lambda、TRBC1，不可避免的出现判断错误，还需要进行第三步检测，即浪费了抗 体又浪费了时间。
[0011]因此，现有技术的抗体组合达不到单管即可全面、准确地诊断急性和慢性白血病及淋 巴瘤的目的，目前需要设计一种全面、精确、经济且高效的进行血液肿瘤免疫分型(特别 是初筛)的抗体组合，解决临床的实际困难，为患者造福。

技术实现思路

[0012]本专利技术的目的在于提供一种用于AML、ALL
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T、ALL
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B、MPAL、NHL
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B、NHL
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T、 NHL
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NK、PCN及慢性髓系疾病共9大类血液肿瘤免疫分型第一步检测的抗体组合物及其 制备的试剂、试剂盒，以达到对血液肿瘤进行全面免疫分析检测的目的。
[0013]为实现上述目的，本专利技术具体技术方案如下：
[0014]本专利技术第一方面提供了一种用于白血病/淋巴瘤分型的试剂组合物，所述试剂组合物 包括抗细胞膜抗原抗体和抗细胞胞内抗原抗体，其中：
[0015]所述抗细胞膜(m)抗原抗体包括抗CD38、抗CD3、抗CD10、抗CD33、抗CD5、 抗CD19、抗CD45、抗CD7、抗CD117、抗CD34、抗CD10、抗CD56、抗TRBC1抗 体；
[0016]所述抗细胞胞内(c)抗原抗体包括抗cCD79a、抗cLambda、抗cKappa、抗cCD22、 抗cCD3、抗cMPO抗体及抗nTdT抗体。
[0017]所述抗nTdT抗体为抗细胞核内(n)抗原抗体。
[0018]优选地，所述抗体均为单克隆抗体。
[0019]优先地，所述抗体均为荧光素染料标记的抗体；
[0020]在一些具体实施方式中，所述荧光素染料包括BV785、BV750、BV711、BV650、 BV605、BV421、BV510、APC
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Fire 750、PE
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Cy5、PE
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于白血病/淋巴瘤分型的试剂组合物，其特征在于，所述试剂组合物包括抗细胞膜抗原抗体和抗细胞胞内抗原抗体，其中：所述抗细胞膜抗原抗体包括抗CD38、抗CD3、抗CD10、抗CD33、抗CD5、抗CD19、抗CD45、抗CD7、抗CD117、抗CD34、抗CD56、抗TRBC1抗体；所述抗细胞胞内抗原抗体包括抗cCD79a、抗cLambda、抗cKappa、抗cCD22、抗cCD3、抗cMPO抗体、抗nTdT抗体。2.根据权利要求1所述的试剂组合物，其特征在于，所述抗体均为单克隆抗体。3.根据权利要求2所述的试剂组合物，其特征在于，所述抗细胞膜抗原抗体中，抗CD38、抗CD3、抗CD10、抗CD33、抗CD5、抗CD19、抗CD45、抗CD7、抗CD117、抗CD34、抗CD56、抗TRBC1抗体的荧光素标记按顺序分别为：BV785、BV750、BV711、BV650、BV605、BV421、BV510、APC
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Fire 750、PE
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Cy5、PE
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Cy7、PE
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Fire 700、PE；所述抗细胞胞内抗原抗体中，抗cCD79a、抗cLambda、抗cKappa、抗cCD22、抗cCD3、抗cMPO抗体、抗nTdT抗体的荧光素标记按顺序分别为PE、PE
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Dazzle 594、Alexa Fluor 700、APC、Alexa Fluor 647、eFluor 450、FITC。4.一种用于急性和慢性白血病及淋巴瘤免疫分型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括第一容器和第二容器，所述第一容器装有权利要求1
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3任一项所述的试剂组合物中抗细胞膜抗原抗体，所述第二容器装有权利要求1
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3任一项所述的试剂组合物中抗细胞胞内抗原抗体。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘艳荣，王亚哲，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：