用于靶向免疫治疗的具有可裂解细胞因子的双特异性T细胞接合物制造技术

公开了具有细胞因子帽的长效修饰的T细胞接合物双特异性抗体，其提供降低的毒性和增强的抗肿瘤活性。还公开了制备所述修饰的和细胞因子加帽的双特异性T细胞接合物抗体的方法。因子加帽的双特异性T细胞接合物抗体的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于靶向免疫治疗的具有可裂解细胞因子的双特异性T细胞接合物
专利

[0001]本专利技术涉及具有可裂解免疫细胞因子帽的双特异性抗体，其旨在降低毒性并提高功效。特别地，本专利技术涉及与可释放的细胞因子缀合的长效修饰的双特异性T细胞接合物(BiTE)抗体。
[0002]专利技术背景
[0003]过去二十年癌症生物学和肿瘤发生学的进展见证了许多新的和更有效的疗法，其彻底改革了恶性癌症的治疗。来自癌症免疫疗法的数据已经证实，补充和增强现有的抗肿瘤免疫应答为增强癌症的持久缓解提供了很好的机会。在FDA最近批准的各种药物中，双特异性T细胞接合物(BiTE)博纳吐单抗(Blinatumomab)由于其工程化结构和对复发或难治性B系白血病或淋巴瘤的临床疗效，代表了一种新的治疗前景。博纳吐单抗是由五个氨基酸组成的链所连接的两个单链抗体的融合蛋白，对CD19和CD3具有双重亲和力。同时结合表达CD3的T细胞和表达CD19的恶性B细胞激活细胞毒性T细胞并使细胞毒性T细胞与博纳吐单抗结合的恶性B细胞结合，导致靶CD19+B癌细胞裂解。
[0004]最近开发的另一类是靶向PD
‑
1、PD
‑
L1、CTLA
‑
4等的免疫检查点药物，这些药物已被证明有助于治疗多种类型的癌症，包括皮肤黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌和霍奇金淋巴瘤。其也正被研究用于对抗许多其它类型的癌症。然而，尽管这些药物取得了巨大的成功，但许多癌症患者仍然对这些治疗没有反应，因此由于实体瘤中存在许多免疫抑制机制，例如T细胞耗竭、有限的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)(特别是CD8+T细胞)、以及由于肿瘤微环境的性质导致肿瘤渗透障碍等，因此无法从这些技术中受益。实体肿瘤中存在足够的活性CD8+T细胞对于患者获得期望的治疗结果非常关键。
[0005]为了进一步推进该技术，BiTE技术与检查点药物的融合有望改善当前的检查点单一试剂疗法，因为其具有阻断免疫检查点信号传导和将细胞毒性T细胞重定向到肿瘤细胞以增强抗肿瘤免疫性的双重机制优势。事实上，与抗PDL1单一药剂相比，使用抗CD3/抗PDL1 BiTE的临床前研究已经显示出出众的抗肿瘤活性。不幸的是，由于人健康组织和活化的T细胞也可能表达PDL1，因此抗CD3/抗PDL1 BiTE可能会杀死其中一些细胞，导致严重的副作用和T细胞储库的耗尽。因此，迫切需要如本专利技术公开的新颖且更好的技术。
[0006]专利技术概述
[0007]本专利技术通过提供与可条件释放的细胞因子分子缀合的长效修饰的BiTE抗体和相关方法解决了上述未满足的需求。
[0008]一方面，本专利技术提供了式Ia所示的多特异性分子、缀合物或化合物。P可以是非免疫原性聚合物。T可以是三官能小分子衍生的接头部分并且可以具有两个或更多个能够与两种不同蛋白质位点特异性缀合的官能团。A1和A2可以是任意两个不同或相同的蛋白质。
[0009]特别地，本专利技术一方面提供了式Ib所示的缀合物：
[0010][0011]在所述缀合物中，
[0012]P可以是非免疫原性聚合物；
[0013]B可以是H、末端加帽基团或空白(void)，所述加帽基团选自C1‑
50
烷基和芳基，其中所述烷基的一个或多个碳原子可以被杂原子取代；
[0014]T可以是具有两个或更多个官能团的多官能接头，其中T和(L1)
a
之间的连接以及T和(L2)
b
之间的连接可以相同或不同；
[0015]L1和L2可以各自独立地是双官能接头或肽接头；
[0016]L3和L4可以独立地是可酶裂解的底物，L3和L4可以相同或不同；L3或L4也可以是空白(null)；
[0017]a和b可以各自是选自0
‑
10的整数，包括端值；
[0018]A1和A2可以是任意两种不同或相同的蛋白质。例如，A1和A2可以彼此不同并且A1和A2可以各自独立地包含抗体片段、单链抗体或任何其它抗原结合部分或其组合；或者A1和A2可以相同并且二者均可以是多特异性抗原结合蛋白；以及
[0019]C1和C2可以是任意两种不同或相同的细胞因子蛋白。例如，C1和C2可以彼此不同并且C1和C2可以各自独立地包含细胞因子或空白，及
[0020]y可以是选自1至10的整数。
[0021]所述蛋白质中的至少一个可包含识别结合部分。例如，A1可包含第一识别结合部分，A2可包含第二识别结合部分。两种不同的蛋白质可以是两种不同的抗体或其抗原结合部分。在一个实例中，这两种抗体分别是与细胞毒性T细胞上的蛋白质结合的抗CD3抗体和与癌细胞上的抗原结合的抗PD
‑
L1抗体。这两种抗体可以是单链抗体(SCA或scFv)。
[0022]非免疫原性聚合物可选自聚乙二醇(PEG)、葡聚糖、基于碳水化合物的聚合物、聚氧化烯、聚乙烯醇、羟丙基
‑
甲基丙烯酰胺(HPMA)及其共聚物。优选地，所述非免疫原性聚合物是PEG，例如支链的PEG或线性PEG或多臂PEG。在那种情况下，线性PEG或支链PEG的至少一个末端可以用H、甲基或低分子量烷基加帽。PEG的总分子量可以是3,000至100,000道尔顿(Daltons)，例如5,000至80,000、10,000至60,000和20,000至40,000道尔顿。PEG可以通过永久键或可裂解键连接于多官能部分。
[0023]在(L1)
a
或(L2)
b
内或(L1)
a
与蛋白质A1之间或(L2)
b
与蛋白质A2之间形成连接的官能团(例如两个位点特异性缀合官能团)可以选自由硫醇、马来酰亚胺、2
‑
吡啶基二硫代变体、芳族砜或乙烯基砜、丙烯酸酯、溴或碘乙酰胺、叠氮化物、炔烃、二苯并环辛基(DBCO)、羰基、2
‑
氨基
‑
苯甲醛或2
‑
氨基
‑
苯乙酮基团、酰肼、肟、酰基三氟硼酸钾、O
‑
氨基甲酰羟胺、反式环辛烯、四嗪、三芳基膦等。
[0024]在一些实施方案中，(L1)
a
和(L2)
b
之一可包含由叠氮化物和炔烃形成的连接；(L1)
a
和(L2)
b
中的另一个可以包含由马来酰亚胺和硫醇形成的连接。在一些实例中，炔烃可以是二苯并环辛基(DBCO)。在其它情况下，T可以是赖氨酸，P可以是PEG，y可以是1，而炔烃可以是二苯并环辛基(DBCO)。在一些实施方案中，A1和A2之一可以衍生自叠氮化物标记的抗体、
抗体片段或单链抗体，其中叠氮化物可以与相应的(L1)
a
或(L2)
b
中的炔烃缀合；A1和A2中的另一个可以衍生自硫醇标记的抗体、抗体片段或单链抗体，其中硫醇可以与相应的(L1)
a
或(L2)
b<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.如下式(Ib)所示的化合物：其中P是非免疫原性聚合物；B是H，选自C1‑
10
烷基和芳基的加帽基团，其中所述烷基的一个或多个碳任选地被杂原子取代；A1和A2是两种不同的抗体、抗体片段或单链抗体或其它形式的抗体或其任意组合，C1和C2各自是可裂解的帽；L3和L4各自是酶可裂解底物或空白；L1和L2各自独立地是双官能接头；a和b独立地是选自0
‑
10的整数；y是选自1至10的整数；并且T是三官能接头部分，其包含分别针对(L1)
a
‑
A1和(L2)
b
‑
A2的两个连接和针对P的一个连接。2.权利要求1的化合物，其中针对(L1)
a
‑
A1和(L2)
b
‑
A2的T连接衍生自独立选自以下的官能团：胺、羧酸、醇、硫醇、马来酰亚胺、叠氮化物、炔烃、二苯并环辛基(DBCO)、反式环辛烯、四嗪、羰基、酰肼、肟、三芳基膦、酰基三氟硼酸钾和O
‑
氨基甲酰基羟胺。3.权利要求1或权利要求2的化合物，其中L1和L2各自包含独立地选自以下的间隔基：
‑
(CH2)
m
XY(CH2)
n
‑
、
‑
X(CH2)mO(CH2CH2O)
p
(CH2)
n
Y
‑
、
‑
(CH2)
m
X
‑
Y(CH2)
n
‑
、
‑
(CH2)
m
杂环基
‑
、
‑
(CH2)
m
X
‑
和
‑
X(CH2)
m
Y
‑
或任何肽，其中m、n和p在每种情况下独立地是从0至25的整数；X和Y在每种情况下独立地选自C(＝O)、CR1R2、NR3、S、O或空白；其中R1和R2独立地代表氢、C1‑
10
烷基或(CH2)1‑
10
C(＝O)，R3是H或C1‑
10
烷基，且其中所述杂环基衍生自马来酰亚胺基或卤代乙酰基或三唑基或四唑基部分。4.权利要求1
‑
3的化合物，其中A1是与细胞毒性细胞的受体结合的抗体。5.权利要求1
‑
4任一项的化合物，其中A2是与癌细胞上的抗原结合的抗体。6.权利要求1
‑
5任一项的化合物，其中所述抗体是单链抗体。7.权利要求1
‑
6任一项的化合物，其中A1是抗CD3抗体。8.权利要求1
‑
7任一项的化合物，其中A2是抗PDL1抗体。9.权利要求1
‑
8任一项的化合物，其中A1选自如下抗体的单链抗体(SCA)片段：SCACD3(抗
‑
CD3)，SCACTLA4(抗
‑
CTLA4)，SCAPD1(抗
‑
PD1)，LAG3(抗
‑
LAG3)，SCACD40L(抗
‑
CD40L)，SCAOX40(抗
‑
OX40)，SCAGITR(抗
‑
GITR)，SCAICOS(抗
‑
ICOS)，SCACD16(抗
‑
CD16)，和SCANKG2D(抗
‑
NKG2D)；A2选自由以下scFvs：抗
‑
HER2，抗
‑
HER3，抗
‑
粘连蛋白
‑
4，抗
‑
CEA，抗
‑
5T4，抗
‑
畸胎瘤衍生生长因子
‑
1，抗
‑
EGFR，抗
‑
GRM1，抗
‑
CD47，抗
‑
Siglec
‑
15，抗
‑
半乳凝素
‑
9，抗
‑
AXL，抗
‑
TRK，抗
‑
FLT3，抗
‑
ALK，抗
‑
ERBB2，抗
‑
CLDN18.2，抗
‑
KIF5B
‑
RET，抗
‑
OX40，抗
‑
Siglec 9，抗
‑
PIM1，抗
‑
Syk，抗
‑
FGFR，抗
‑
KRAS，抗
‑
FGL1，抗
‑
LAG3，抗
‑
Foxp3，抗
‑
CSF
‑
1R，抗
‑
BCMA，抗
‑
SLAMF7，抗
‑
AMHR2，抗
‑
LAIR
‑
1，抗
‑
IL
‑
4R，抗
‑
CD24，抗
‑
SIGLEC10，抗
‑
CD80，抗
‑
VEGF
‑
A，抗
‑
TNFRSF17，抗
‑
TfR1，抗
‑
TNF，抗
‑
STn，抗
‑
SSTR2，抗
‑
RANKL，抗
‑
PSMA，抗
‑
P
‑
钙粘蛋白，抗
‑
PcrV，抗
‑
psl，抗
‑
NGF，抗
‑
MSLN，抗
‑
MAPG，抗
‑
Klotho，抗
‑
白介素，抗
‑
IGF
‑
1，抗
‑
GPA33，抗
‑
GD2，抗
‑
gp100，抗
‑
磷脂酰肌醇聚糖，抗
‑
FAP，抗
‑
EpCAM，抗
‑
EphR，抗
‑
DLL3和4，抗
‑
TRAILR2，抗
‑
CD123，抗
‑
CD79B和抗
‑
CD32B，抗
‑
CD64，抗
‑
CD38，抗
‑
Siglec
‑
3，抗
‑
FcγRIIB，抗
‑
TNFRSF8，抗
‑
CD22、20、16和19，抗
‑
CLEC12A，抗
‑
钙粘蛋白，抗
‑
c
‑
MET，抗
‑
B7
‑
H3，抗
‑4‑
1BB，抗
‑
PSMA，抗
‑
B7H3，抗
‑
MUC16，抗
‑
FLT3，抗
‑
半乳凝素
‑
9，抗
‑
Siglec
‑
15和抗
‑
GRM1等。10.权利要求1
‑
9任一项的化合物，其中每个可裂解的帽C1和C2独立地是与T细胞的受体结合以促进T细胞增殖的免疫刺激性细胞因子。11.权利要求1
‑
10任一项的化合物，其中C1和C2选自IL
‑
2、IL
‑
4、IL
‑
10、IL
‑
12、IL
‑
15和干扰素
‑
γ。12.权利要求1
‑
11任一项的化合物，其中所述非免疫原性聚合物包括选自以下的成员：聚乙二醇(PEG)、葡聚糖、基于碳水化合物的聚合物、聚氧化烯(polyalkylene oxide)、聚乙烯醇、羟丙基
‑
甲基丙烯酰胺(HPMA)，及其共聚物。13.权利要求1
‑
12任一项的化合物，其中所述非免疫原性聚合物包含用甲基或C1‑
10
烷基加帽的PEG。14.权利要求1
‑
13任一项的化合物，其中所述非免疫原性聚合物包含分子量范围为3000至80000的PEG。15.权利要求1
‑
14任一项的化合物，其中所述非免疫原性聚合物包含支链聚乙二醇。16.权利要求1
‑
15任一项的化合物，其中所述非免疫原性聚合物是聚乙二醇，并且T与P的连接是可裂解的。17.权利要求1
‑
16任一项的化合物，其中L3或L4是蛋白酶的底物。18.权利要求17的化合物，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘树民，乌德春，文瑜，雷杨，吕卫东，
申请(专利权)人：深圳康源久远生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：