人工信号传导分子制造技术

本发明专利技术提供了信号传导分子和表达该信号传导分子的免疫细胞，用于治疗非期望免疫活性，该信号传导分子是包含配体域、间隔物、跨膜域和至少一个胞内信号传导域的融合蛋白，其中配体域包含关联抗原的至少一个表位或所有表位，或者关联抗原，该关联抗原是非期望免疫活性的靶标。性的靶标。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人工信号传导分子
[0001]本专利技术涉及人工信号传导分子，其是融合蛋白，用于在免疫细胞中进行表达，具体地用于医学治疗。人工信号传导分子和表达该人工信号传导分子的免疫细胞适用于治疗非期望免疫应答，如用于抑制非期望免疫活性，具体地用于治疗针对移植物的免疫排斥，如治疗HvG疾病，用于治疗自身免疫性疾病，或用于治疗变态反应。
[0002]设计人工信号传导分子以引导表达它的免疫细胞针对引起非期望免疫应答的免疫细胞，如T细胞、B细胞或NK细胞。
[0003]技术水平
[0004]对于抑制非期望免疫活性，通常已知抑制免疫系统的一般活性。
[0005]WO 2018/001874描述了在Treg细胞中表达的CAR分子，其用于治疗移植物接受者的HvG疾病，其中CAR分子在移植物附近产生抑制活性。
[0006]专利技术目的
[0007]本专利技术的目的是提供用于治疗非期望免疫活性的替代方案，特别是用于治疗针对特定关联抗原的非期望免疫应答，如用于治疗HvG疾病、治疗自身免疫性疾病或治疗变态反应。
[0008]专利技术描述
[0009]本专利技术通过权利要求书的特征实现了该目的，特别是通过提供信号传导分子和表达该信号传导分子的免疫细胞，用于治疗非期望免疫活性，该信号传导分子是融合蛋白，其包含配体域、间隔物、跨膜域和至少一个胞内信号传导域，或由配体域、间隔物、跨膜域和至少一个胞内信号传导域组成，其中配体域包含关联抗原的至少一个表位或所有表位或关联抗原，该关联抗原是非期望免疫活性的靶标。优选地，特别是在具有例如大小相似的两个配体域的异二聚体配体域中，信号传导分子包含在其胞外部分中排列的二聚化域，如排列于配体域和跨膜域之间。优选地，信号传导分子的域从N端到C端彼此连接，更优选从N端到C端彼此直接连接，该域包含或由以下组成：配体域、间隔物、跨膜域和至少一个胞内信号传导域，任选地在配体域和跨膜域之间的二聚化域，优选位于配体域C端的HLA跨膜域的胞外部分，优选在HLA跨膜域的胞外部分和二聚化域或间隔物之间的例如8到12个氨基酸的接头。表达信号传导分子的免疫细胞包含编码信号传导分子的核酸序列，该核酸序列优选整合到细胞基因组中，例如通过使用病毒载体转导，或通过编码核酸序列的转染。
[0010]因此，配体域包含关联抗原的至少一个表位，优选所有表位，或由关联抗原的至少一个表位，优选所有表位组成，例如配体域可以包含T细胞受体(TCR)和/或B细胞受体(BCR)的关联抗原，或由T细胞受体(TCR)和/或B细胞受体(BCR)的关联抗原组成。待治疗的非期望免疫活性针对该关联抗原。由于本专利技术的信号传导分子对于其特异性包含非期望免疫应答针对的关联抗原的至少一个表位，因此T细胞或B细胞或NK细胞与CD4+T细胞或CD8+T细胞表达的信号传导分子的配体域的结合导致活化T细胞效应器功能，其特异性地针对结合至信号传导分子配体域的T细胞或B细胞或NK细胞。作为CD4+T细胞或CD8+T细胞经由其TCR或B细胞经由其BCR或NK细胞经由其受体与CD4+T细胞或CD8+T细胞中表达时的信号传导分子结合的结果，将结合的T细胞或B细胞或NK细胞失活或杀死，这取决于信号传导T细胞的功能特
征。由于T细胞的TCR或B细胞的BCR或NK细胞的KIR的结合是由信号传导分子的配体域介导的，因此结合的T细胞或结合的B细胞或结合的NK细胞的失活或消除对于T细胞或B细胞或NK细胞的特异性受体靶向的关联抗原是特异的。因此，本文中，信号传导分子也称为嵌合配体受体(CLR)。
[0011]由于配体域为TCR或BCR提供关联抗原，因此配体域没有抗体，例如没有scFv和其他抗体形式。
[0012]因此，用于治疗HvG疾病，配体域，也称为关联抗原，可以是针对移植物的免疫应答所针对的抗原，例如配体域(即关联抗原)是异源的，如不匹配的移植物的HLA I类或II类分子。
[0013]任选地，用于治疗HvG疾病，表达信号传导分子的免疫细胞可用于在移植之前或之后治疗患者，尤其是当移植物是HLA错配时。此外，表达信号传导分子的免疫细胞可用于治疗接受移植物后已经产生或尚未产生针对移植物错配HLA分子的记忆B细胞的患者。
[0014]用于治疗针对自身抗原的非期望免疫应答，即用于治疗自身免疫性疾病，配体域(即关联抗原)可以是自身免疫应答所针对的自身抗原。
[0015]用于治疗变态反应，配体域(即关联抗原)可以是变态反应的关联抗原，例如，花生抗原诸如Ara h 1(UniProtKB/Swiss
‑
Prot:P43237.1)。
[0016]例如，可以将关联抗原确定为抗体、B细胞受体(BCR)、T细胞受体(TCR)或NK细胞受体(如KIR)的靶标，所述靶标发生在非期望免疫应答期间或者是非期望免疫应答特征性的。优选地，直接或间接地从得自患者的活组织检查，例如血液样品中预确定关联抗原。为了间接预先确定关联抗原，可以分析活组织检查的抗体或T细胞的结合。用于治疗HvG疾病，可以将关联抗原确定为不匹配的HLA分子。T细胞的TCR和B细胞的BCR通常分别是具有非期望免疫应答的患者的天然组分。
[0017]至少一个胞内信号传导域是在T细胞中抗原域的反应后活化T细胞效应器功能的域。胞内信号传导域可以例如是hCD3ζ域，优选h4
‑
1BB域和hCD3ζ(zeta)域的组合，或胞内hCD28信号转导域和hCD3ζ域的组合。
[0018]跨膜域可以例如是人CD28(hCD28)的跨膜域或CD4(hCD4)的跨膜域。
[0019]表达信号传导分子的免疫细胞是T细胞，其优选与接受者免疫相容，例如对于接受者而言是自体的。或者，表达信号传导分子的免疫细胞不与接受者免疫相容，例如与接受者不是HLA匹配的，因此在施用表达信号传导分子的不相容免疫细胞后，当它尚未以通过例如HLA敲低或敲除来阻止该免疫细胞的同种识别(allorecognition)的方式进行遗传修饰时，这最终可能被宿主的免疫系统消除。因此，对于与接受者非免疫相容，例如与接受者非HLA匹配的T细胞，可以对T细胞进行遗传修饰以不表达HLA分子，例如为了敲低或敲除HLA分子表达而遗传修饰。
[0020]表达信号传导分子的免疫细胞是例如原代CD4+T细胞或原代CD8+T细胞、NK细胞和/或这些之一的祖细胞或者细胞毒性细胞系，例如NK
‑
92。在本文中，表达信号传导分子的免疫细胞也称为T细胞，其代表原代CD4+T细胞或原代CD8+T细胞、NK细胞和这些之一的祖细胞，或细胞毒性细胞系。
[0021]信号传导分子和表达信号传导分子的T细胞在治疗中的用途是，在不影响接受者的其他内源性免疫细胞的情况下，消除与信号传导分子的抗原域特异性结合的接受者的B
细胞和T细胞和NK细胞。因此，信号传导分子和表达信号传导分子的T细胞在医学治疗中的用途导致调节T细胞情况下的选择性失活或者细胞毒性T细胞情况下的免疫细胞消除，这取决于与信号传导分子的配体域匹配的它们的关联受体，对免疫系统没有一般本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.作为信号传导分子使用的融合蛋白，其包含配体域、间隔物、跨膜域和胞内信号传导域，其中所述配体域包含非期望免疫应答针对的关联抗原的至少一个表位。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其包含排列于所述配体域和所述跨膜域之间的二聚化域。3.根据前述权利要求之一所述的融合蛋白，其中所述配体域包含两条链，所述配体域的每条链与二聚化域共价连接，并且所述二聚化域是二聚化的。4.根据前述权利要求之一所述的融合蛋白，其中所述配体域包含两条链，所述链的每条与二聚化域连接，所述二聚化域的仅一个与间隔物、跨膜域和胞内信号传导域共价连接。5.根据权利要求1至2之一所述的融合蛋白，其中所述配体域包含两条链并且这些链的每条与二聚化域、间隔物、跨膜域和胞内信号传导域共价连接，其中所述与每条链共价连接的间隔物、跨膜域和胞内信号传导域可以各自具有相同的氨基酸序列或不同的氨基酸序列。6.根据前述权利要求之一所述的融合蛋白，其中所述间隔物具有10到250个氨基酸的长度。7.根据前述权利要求之一所述的融合蛋白，其中所述二聚化域仅二聚化为异二聚体。8.根据前述权利要求之一所述的融合蛋白，其中所述胞内信号传导域是h4
‑
1BB域和hCD3ζ域的组合，或胞内hCD28信号转导域和hCD3ζ域的组合。9.根据前述权利要求之一所述的融合蛋白，其中所述配体域包含HLA I类的至少部分或HLA II类分子的至少部分。10.根据权利要求5所述的融合蛋白，其中所述HLA I类的部分在第74、223、224、225、226、227、229和245号氨基酸位置中包含至少一个突变，其中编号参照不含信号肽的HLA I类。11.根据权利要求5或6所述的融合蛋白，其中所述HLA II类的部分在α链的第88、90和176号氨基酸位置中包含至少一个突变，和/或在β链的第46、54、55、56、104、114、116、134、135、136、137、138、139、141、142、143、144、145、148、158、160和162号的至少一个氨基酸位置中包含突变，其中编号参照不含信号肽的HLA II类。12.根据前述权利要求之一所述的融合蛋白，其包含第一信号传导分子，所述第一信号传导分子包含配体域、任选地HLA跨膜域的胞外部分、接头、二聚化域、间隔物、跨膜域和至少一个胞内信号传导域，其中所述二聚化域与第二信号传导分子的二聚化域二聚化，所述第二信号传导分子包含配体域、HLA跨膜域的胞外部分、接头、二聚化域、间隔物、跨膜域和至少一个胞内信号传导域，或者所述第二信号传导分子由配体域、接头和二聚化域组成。13.根据前述权利要求之一所述的融合蛋白，其包含第一信号传导分子，所述第一信号传导分子包含配体域、任选地HLA跨膜域的胞外部分、间隔物、跨膜域和至少一个胞内信号传导域，或由配体域、任选地HL...

【专利技术属性】
技术研发人员：R布拉斯丘克，B埃兹韦斯珀，C费雷拉德菲格雷多，A德拉贡，
申请(专利权)人：汉诺威医学院，
类型：发明
国别省市：