用于获取细胞悬液中微量细胞的数量的绝对值计数方法技术

本发明专利技术提供一种用于获取细胞悬液中微量细胞的数量的绝对值计数方法，采用移液器来取待测样品并测量待测样品的体积，待测样品为细胞悬液；对细胞悬液中的微量细胞进行荧光染色并混匀；将染色后的细胞悬液加入到计数板中，并将计数板插入到全自动荧光细胞分析仪内；图像处理系统对染色后的细胞悬液进行图像拍摄；图像扫描系统对获取的所有图像进行扫描并获取细胞总数(活细胞总数与死细胞总数之和)，控制器根据体积以及细胞总数，通过绝对值计数模块可分别得到细胞悬液中的微量细胞的总数绝对值，消除细胞悬液中微量细胞因分布不均和计数体积小造成计数偏差的不足。数体积小造成计数偏差的不足。数体积小造成计数偏差的不足。

【技术实现步骤摘要】
用于获取细胞悬液中微量细胞的数量的绝对值计数方法


[0001]本专利技术涉及一种生物医学领域，尤其涉及一种用于获取细胞悬液中微量细胞的数量的绝对值计数方法。

技术介绍

[0002]生物学标本中微量或残留的细胞总数如何准确计数，一直没有很好的解决方法。
[0003]目前，已在应用的残留细胞计数方法有三类：人工显微镜细胞计数法、图像识别自动细胞计数法、流式自动细胞计数法，其中人工显微镜细胞计数法的原理如下：研究者在显微镜下使用血细胞计数板(国标JJG 552-1988血细胞计数板试行检定标准)或专用的残留白细胞计数板-参见《血站技术操作规程(2012版)》，先计数出单位体积内浓度，而后推算出残留细胞的总数，此方法在计数时已经考虑到细胞因浓度过低造成的不均匀分布问题，使用统计学方法做了一些规范，包括
①
使用4个区域加权平均；
②
对压线细胞的计数规则：数上不数下、数左不数右；
③
对聚团细胞的计数规则：大于等于2个的聚团计数为1个，聚团过的样品需要处理后重新计数；
④
计数浓度的计数公式：细胞浓度(个/ml)＝4个位置细胞总数/4
×
104×
样品稀释倍数
×
标本稀释倍数；此方法的优势是“所见即所得”，准确性高，目前是细胞计数的金标准。但此方法在标本浓度过低时，计数的偏差较大；
[0004]图像识别自动细胞计数法的原理如下：此方法来源于人工显微镜细胞计数法，将显微镜做了自动化升级，多采用一个或多个小靶面计数，而后推算出细胞浓度：细胞个/毫升，进一步推算出细胞总数(活细胞和死细胞之和)，此方法结合了人工显微镜细胞计数法的优点，同时又揉合了最新的感光芯片技术、图像识别软件技术、自动化控制技术。不但能减轻操作者的劳动强度，还能保留细胞的原始图片等原始数据，可留档回溯。但此种方法也是采用浓度计数方法，同样出现标本浓度过低时，计数的偏差较大；
[0005]流式自动细胞计数法：使用颗粒计数原理，使细胞排队经过检测窗口，得到每个细胞的电信号变化，而后还原出细胞的浓度、直径、个数。流式方法的绝对值计数是使用大体积样品进样，选取某一段体积的数据，推算出此段体积内的细胞总数；
[0006]目前上述三种方法在低浓度(微量或残留)细胞标本计数时存在较大的误差。主要原因：第一，细胞悬液不是溶液，是悬浮液，细胞在液体中不能均匀分布；第二，低浓度(微量或残留)细胞标本，即使相同采样体积、相同采样人、相同采样方法，采样标本中的细胞总数也有较大偏差，故采用浓度推算总数的方法，计数总数的偏差更大。

技术实现思路

[0007]针对现有技术中的缺陷，为了克服现有计数方法的局限，本专利技术提供了一种对微量细胞悬液中细胞数量的计数方法，采用全自动荧光细胞分析仪进行图像处理并计数出总细胞数量、活细胞数量以及死细胞数量。
[0008]本专利技术实施例提供了一种
[0009]用于获取细胞悬液中微量细胞的数量的绝对值计数方法，其特征在于，该计数方
法采用全自动荧光细胞分析仪，所述分析仪包括用于容纳所述微量细胞悬液的计数板，用于存储荧光染料的容器，图像扫描系统，图像处理系统以及用于计数所述细胞数量的控制器，其具体操作步骤如下：
[0010]步骤一：采用移液器来取所述细胞悬液并测量所述细胞悬液的体积；
[0011]步骤二：向步骤一的所述细胞悬液中加入荧光染料进行染色并混匀；
[0012]步骤三：将步骤二中染色后的所述细胞悬液加入到所述计数板中，并将所述计数板插入到所述全自动荧光细胞分析仪内；
[0013]步骤四：所述图像处理系统对步骤三中染色后的所述细胞悬液进行图像拍摄，根据图像处理系统设定的取图数量来获取位于所述计数板上的所述细胞悬液的所有图像，获取的所有图像的显示区域全面覆盖所述待测样品在所述计数板上的占有区域；
[0014]步骤五：所述图像扫描系统对步骤四中所获取的所述所有图像进行扫描，用于获取步骤四中所述所有图像内的所述细胞悬液中微量细胞的细胞总数、活细胞总数以及死细胞总数，所述细胞总数为所述活细胞总数与死细胞总数之和；
[0015]步骤六：所述控制器根据步骤五中所获取的所述细胞总数，通过控制器内的绝对值计数模块计算得到所述细胞悬液中微量细胞的细胞总数绝对值；
[0016]优选的，在步骤一之前，采用细胞稀释液对待计数的细胞混合液进行稀释并混匀得到所述细胞悬液；
[0017]优选的，取稀释后的所述细胞悬液与所述荧光染料进行混匀，再取混匀后的所述细胞悬液与所述荧光染料的混合液加入到所述计数板，稀释后的所述细胞悬液与所述荧光染料以及所述混合液的体积相同；
[0018]优选的，所述细胞混合液可选自于抗凝全血、滤白成分血或者其他含微量细胞数量的细胞培养液；
[0019]优选的，所述图像处理系统内设有全图像大图拼接功能模块，用于将所述图像处理系统采集到的所述细胞悬液的全部细胞图像拼接出所述细胞悬液的完整图像，所述完整图像的显示区域全面覆盖所述待测样品在所述计数板上的占有区域；
[0020]优选的，
[0021]所述绝对值计算模块包括绝对值浓度计算模块，所述绝对值浓度计算模块通过数学计算公式对所述细胞悬液的绝对值浓度进行计算，其中，
[0022]所述数学计算公式为Q＝n/V，其中Q代表细胞绝对值浓度，n代表所述所有图像内细胞总数，V代表所述细胞悬液的体积；
[0023]若Q为细胞总数绝对值浓度，则n为所述所有图像内细胞总数；
[0024]若Q为活细胞总数绝对值浓度，则n为所述所有图像内活细胞总数；
[0025]若Q为死细胞总数绝对值浓度，则n为所述所有图像内死细胞总数；
[0026]所述细胞总数绝对值浓度为活细胞总数绝对值浓度与死细胞总数绝对值浓度之和；
[0027]优选的，
[0028]所述细胞悬液由待计数的细胞混合液被细胞稀释液稀释后而成或者直接由待计数的细胞混合液构成，取所述细胞悬液与所述荧光染料混合稀释后加入所述计数板，静置预设时间后开始计数，其中，所述数学计算公式为Q＝n*k*f/V，其中Q代表细胞数量，n代表
所述所有图像内细胞总数，k代表待计数的细胞混合液被细胞稀释液稀释的倍数，f代表被稀释后的细胞悬液被荧光染料稀释的倍数，V代表被细胞稀释液释前的待计数的细胞混合液的体积；
[0029]若Q为细胞总数绝对值浓度，则n为所述所有图像内细胞总数；
[0030]若Q为活细胞总数绝对值浓度，则n为所述所有图像内活细胞总数；
[0031]若Q为死细胞总数绝对值浓度，则n为所述所有图像内死细胞总数；
[0032]所述细胞总数绝对值浓度为活细胞总数绝对值浓度与死细胞总数绝对值浓度之和；
[0033]优选的，所述绝对值计数公式为细胞总数绝对值等于死细胞总数与活细胞总数之和。
[0034]有益效果：
[0035]1、本专利技术采用全自动荧光细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于获取细胞悬液中微量细胞的数量的绝对值计数方法，其特征在于，该计数方法采用全自动荧光细胞分析仪，所述分析仪包括用于容纳所述微量细胞悬液的计数板，用于存储荧光染料的容器，图像扫描系统，图像处理系统以及用于计数所述细胞数量的控制器，其具体操作步骤如下：步骤一：采用移液器来取所述细胞悬液并测量所述细胞悬液的体积；步骤二：向步骤一的所述细胞悬液中加入荧光染料进行染色并混匀；步骤三：将步骤二中染色后的所述细胞悬液加入到所述计数板中，并将所述计数板插入到所述全自动荧光细胞分析仪内；步骤四：所述图像处理系统对步骤三中染色后的所述细胞悬液进行图像拍摄，根据图像处理系统设定的取图数量来获取位于所述计数板上的所述细胞悬液的所有图像，获取的所有图像的显示区域全面覆盖所述待测样品在所述计数板上的占有区域；步骤五：所述图像扫描系统对步骤四中所获取的所述所有图像进行扫描，用于获取步骤四中所述所有图像内的所述细胞悬液中微量细胞的细胞总数、活细胞总数以及死细胞总数，所述细胞总数为所述活细胞总数与死细胞总数之和；步骤六：所述控制器根据步骤五中所获取的所述细胞总数，通过控制器内的绝对值计数模块计算得到所述细胞悬液中微量细胞的细胞总数绝对值。2.根据权利要求1所述的一种用于获取细胞悬液中微量细胞的数量的绝对值计数方法，其特征在于，在步骤一之前，采用细胞稀释液对待计数的细胞混合液进行稀释并混匀得到所述细胞悬液。3.根据权利要求2所述的一种用于获取细胞悬液中微量细胞的数量的绝对值计数方法，其特征在于，取稀释后的所述细胞悬液与所述荧光染料进行混匀，再取混匀后的所述细胞悬液与所述荧光染料的混合液加入到所述计数板，稀释后的所述细胞悬液与所述荧光染料以及所述混合液的体积相同。4.根据权利要求3所述的一种用于获取细胞悬液中微量细胞的数量的绝对值计数方法，其特征在于，所述细胞混合液可选自于抗凝全血、滤白成分血或者其他含微量细胞数量的细胞培养液。5.根据权利要求1所述的一种用于获取细胞悬液中微量细胞的数量的绝对值计数方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱耀辉，陈坤，
申请(专利权)人：广州博大博聚科技有限公司，
类型：发明
国别省市：