青蒿中介体AaMED25基因及其应用制造技术

本发明专利技术公开了青蒿中介体AaMED25基因及其应用，AaMED25基因的核苷酸序列如SEQID NO.3所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，在青蒿中过表AaMED25基因能够提高青蒿素的含量，表明AaMED25基因在调控过程中起了关键作用，因此能够用于提高青蒿素的含量。因此能够用于提高青蒿素的含量。因此能够用于提高青蒿素的含量。

【技术实现步骤摘要】
青蒿中介体AaMED25基因及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及青蒿中介体AaMED25基因，还涉及青蒿中介体AaMED25基因的应用。

技术介绍

[0002]青蒿素(artemisinin)是我国具有完全自主知识产权并得到国际认可的药物之一，对于抗氯喹型疟疾和脑型疟疾具有非常显著的疗效，世界卫生组织推荐青蒿素联合疗法作为治疗疟疾的首选方法。目前限制青蒿素供给的一个关键因素是青蒿植株中青蒿素含量太低，并不能满足患者特别是发展中国家患者治疗需求。因此如何提高青蒿素产量成为青蒿素生产中的重大问题及国内外研究热点。其中ABA和JA是研究较多的能调控植物次生代谢生物合成的激素。研究人员发现青蒿素生物合成受到脱落酸(ABA)和茉莉酸甲酯(MeJA)的诱导(Jing et al.2009；Maes et al.2011)，相关转录因子也已经克隆和功能鉴定，但是关于ABA和JA信号在调控青蒿素生物合成中的相互作用还研究甚少。在真菌、动物、人和植物中的相关研究发现中介体基因在信号转导过程中具有关键核心作用，是转录因子传导到转录起始复合物的“桥梁”。但是中介体基因在青蒿中能否影响青蒿素产量未见报道。

技术实现思路

[0003]有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种青蒿中介体AaMED25基因；本专利技术的目的之二在于提供含有所述青蒿中介体AaMED25基因的重组表达载体；本专利技术的目的之三在于提供青蒿中介体AaMED25基因在青蒿中过表达提高青蒿素含量中的应用。本专利技术的目的之四在于提供所述重组表达载体转化青蒿在提高青蒿素含量中的应用。
[0004]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0005]1、青蒿中介体AaMED25基因，其特征在于：其特征在于：所述MED25基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0006]2、含有所述青蒿中介体AaMED25基因的重组表达载体。
[0007]优选的，所述重组表达载体由SEQ ID NO.3所示序列连入pHB载体的BamHI和XhoI酶切位点处。
[0008]3、所述青蒿中介体AaMED25基因在青蒿中过表达提高青蒿素含量中的应用。
[0009]4、所述重组表达载体转化青蒿在提高青蒿素含量中的应用。
[0010]5、提高青蒿中青蒿素含量的方法，在青蒿中过表达青蒿素中介体AaMED25基因，筛选转基因阳性植株，得到青蒿素含量提高的青蒿。
[0011]优选的，青蒿中过表达青蒿素中介体AaMED25基因的方法是将含有青蒿素中介体AaMED25基因的重组表达载体通过农杆菌介导转化，再生后筛选转基因植株。
[0012]优选的，所述重组表达载体由SEQ ID NO.3所示序列连入pHB载体的BamHI和XhoI酶切位点处而得。
[0013]本专利技术的有益效果在于：本专利技术公开了青蒿中介体AaMED25基因，该基因在青蒿中过表达后能够显著提高青蒿素的含量，因此能够用于提高青蒿素含量。
附图说明
[0014]为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：
[0015]图1为转基因植株的基因表达量检测图(A：AaMED25基因在干扰AaMED25转基因青蒿和野生型青蒿中的相对表达量；B：AaMED25基因在过表达AaMED25转基因青蒿和野生型青蒿中的相对表达量)。
[0016]图2为AaMED25转基因中青蒿素含量图(A：AaMED25基因在干扰AaMED25转基因青蒿和野生型青蒿中的青蒿素含量；B:AaMED25基因在过表达AaMED25转基因青蒿和野生型青蒿中的青蒿素含量)。
具体实施方式
[0017]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。
[0018]实施例1、青蒿中介体AaMED25基因的克隆
[0019]提取青蒿RNA，反转为cDNA，然后根据青蒿基因组序列，设计扩增AaMED25上游和下游的引物：
[0020]上游引物:5
’‑
atggcggcggataagaaa
‑3’
(SEQ ID NO.1)；下游引物：5
’‑
tcagtttatgaagcttccacctgacat
‑3’
(SEQ ID NO.2)；
[0021]然后以反转的cDNA为模板，以AaMED25上、下游引物进行PCR扩增，扩增条件为94℃预变性5分钟；94℃变性30秒，52℃退火30秒，72℃延伸150秒，共32个循环；72℃延伸2分钟，4℃保存，进行PCR扩增，扩增产物经回收后经测序获得AaMED25基因序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，其编码的氨基酸如SEQ ID NO.4所示。
[0022]实施例2、构建青蒿中介体MED25基因(AaMED25)的植物表达载体
[0023]A、AaMED25
‑
pHB的构建
[0024]根据克隆到的AaMED25基因序列，分析其编码区的酶切位点和pHB载体上的多克隆位点，选择BamHI和XhoI作为载体构建的限制性酶切位点，在AaMED25全长的上游引入BamHI酶切位点，在AaMED25下游引入XhoI酶切位点，所用引物为：
[0025]AaMED25
‑
F
‑
BamH1：5
’‑
atggcggcggataagaaacag
‑3’
(SEQ ID NO.5)；
[0026]AaMED25
‑
R
‑
XhoI：5
’‑
aggtggaagcttcataaacct
‑3’
(SEQ ID NO.6)；
[0027]用该对引物扩增AaMED25，然后将扩增的AaMED25序列和pHB同时用内切酶BamHI和XhoI酶切后进行T4连接。
[0028]B、AaMED25
‑
pBin19的构建
[0029]选取AaMED25基因组上200bp的特异片段作为干扰片段，设计一对引物，具体引物如下：AaMED25
‑
RI
‑
F：5
’‑
gcttgtgtgttgaaggta
‑3’
(SEQ ID NO.7)；AaMED25
‑
RI
‑
R：5
’‑
cactgtcagttatatgcc
‑3’
(SEQ ID NO.8)。
[0030]并在上下游引物5
’
端分别引入HindIII和XbaI酶切位点，将该片段正向克隆到干
扰载体pHANNIBAL上；继续在上下游引物5
’
端再分别引入KpnI和XhoI酶切位点，将该片段反向本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.青蒿中介体AaMED25基因，其特征在于：其特征在于：所述AaMED25基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。2.含有权利要求1所述青蒿中介体AaMED25基因的重组表达载体。3.根据权利要求2所述的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体由SEQ ID NO.3所示序列连入pHB载体的BamHI和XhoI酶切位点处。4.权利要求3所述青蒿中介体AaMED25基因在青蒿中过表达提高青蒿素含量中的应用。5.权利要求2或3所述重组表达载体转化青蒿在提高青蒿素含量中的应用。6.提高青蒿中...

【专利技术属性】
技术研发人员：张芳源，苟玉琴，苏菲，王诗艺，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：