一组不结球白菜早抽薹的分子标记引物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一组不结球白菜早抽薹的分子标记引物及其应用，属于分子生物学技术领域。所述分子标记引物的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，以不结球白菜DNA为模板，通过聚合酶链式反应扩增该片段，根据目的条带的有无，可筛选出不结球白菜早抽薹品种或材料。本发明专利技术提供的分子标记引物，可以快速检测不结球白菜早抽薹的品种和材料，极大的节约时间和资源，大大提高选择效率，从而加快育种进程。从而加快育种进程。从而加快育种进程。

【技术实现步骤摘要】
一组不结球白菜早抽薹的分子标记引物及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一组不结球白菜早抽薹的分子标记引物及其应用。

技术介绍

[0002]不结球白菜（Brassica campestris ssp. chinensis Makino）属十字花科芸薹属芸薹种白菜亚种，又名青菜、小白菜、油菜等，是我国长江中下游及其以南地区的一种四季栽培的蔬菜。不结球白菜质地鲜嫩，营养丰富，深受人们喜爱，在我国蔬菜消费中占有重要地位。花的产生代表着植物由营养生长转变为生殖生长，不结球白菜以营养器官为产品，先期抽薹不仅降低生物产量，还影响其商品性和食用价值，给生产带来巨大的损失。
[0003]因此，设计一种专用于不结球白菜早抽薹品种和材料的筛选、鉴定方法极为重要。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一组不结球白菜早抽薹的分子标记引物，该组引物可用于不结球白菜早抽薹的筛选和鉴定，快速准确。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：一组不结球白菜早抽薹的分子标记引物，命名为pF7，其序列为：pF7F：5
’‑
CGATGGTACGGTGATGTCGT
‑3’
（SEQ ID NO.1），pF7R：5
’‑
GGTGTTCCGGACCTTAGACA
‑3’
（SEQ ID NO.2）。
[0006]上述分子标记引物在鉴定不结球白菜早抽薹品种或材料中的应用。
[0007]一种鉴定不结球白菜早抽薹品种或材料的方法，包括以下步骤：步骤1，提取待鉴定品种或材料的基因组DNA；步骤2，以步骤1提取的DNA为模板，利用上述分子标记引物pF7对其进行PCR扩增；步骤3，以步骤2的PCR扩增产物进行电泳分离，获得各样品的带型，如果得到517bp的片段，则说明待鉴定品种或材料为早抽薹。
[0008]进一步地，步骤2中，PCR扩增具体为：在20μL反应体系中，50ng/μL DNA模板1μL、10μM pF7引物各1μL、2
×ꢀ
Primer Star 10μL、去离子水7μL；PCR扩增程序为：95℃预变性2min，98℃变性30s，56.5℃退火30s，72℃延伸30s，72℃后延伸10min，35个循环，4℃保存。
[0009]有益效果：1. 本专利技术通过使用标记引物pF7，可快速、高效的鉴定不结球白菜早抽薹品种和材料。
[0010]2. 本专利技术辅助选择方便，节约成本。不结球白菜抽薹开花时间品种的常规选育方法周期长，成本高，消耗大量的人力物力，通过本专利技术，可以实现苗期选择，减少工作量，提高了选择效率。
附图说明
[0011]图1为标记引物pF7在不同品种的不结球白菜PCR扩增后的琼脂糖凝胶电泳结果图，其中：M为DL2000 Marker，泳道1
‑
6、8
‑
23\24
‑
29、31
‑
33、39为早抽薹品种或材料，泳道7\30、34
‑
38为晚抽薹品种或材料。
具体实施方式
[0012]下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到，未详细描述的技术均按照本领域人员熟知的标准方法进行。本申请中提及的试剂等均有商品供应或以别的途径能为公众所得，它们仅作为举例，对本专利技术不是唯一的。可分别用其它适合的工具或生物材料来替代。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。
[0013]本专利技术提供了一组不结球白菜早抽薹分子标记引物，即pF7，以早、晚抽薹等多品种和材料不结球白菜DNA为模板，通过聚合酶链式反应（PCR）扩增该片段。根据目的条带的有无，可筛选出不结球白菜早抽薹品种和材料。该方法提供了早期检测不结球白菜早抽薹的一对分子标记，可以快速检测不结球白菜早抽薹的品种和材料，极大的节约时间和资源，提高选择效率，从而加快育种进程，助力我国蔬菜产业的发展。
[0014]实施例1本实施提供的一种鉴定不结球白菜早抽薹的方法，包括以下步骤：步骤1，不结球白菜基因组DNA的提取根据植物基因组DNA快速提取试剂盒（购自于北京天根生化科技有限公司）说明书提取DNA，简要如下：1）取植物新鲜组织约100mg，加入液氮充分碾磨；2）将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700
µ
L已在65℃预热缓冲液GP1的离心管中（实验前在预热的GP1中加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），迅速颠倒混匀后，将离心管放在 65℃水浴20min；3）加入700
µ
L氯仿，充分混匀，12,000rpm离心5min；4）小心地将上一步所得上层水相转入一个新的离心管中，加入700
µ
L缓冲液GP2，充分混匀；5）将混匀的液体转入吸附柱CB3中，12,000rpm离心30 s，弃掉废液；6）向吸附柱CB3中加入500
µ
L缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中；7)向吸附柱CB3中 加入600
µ
L 漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中；8)重复操作步骤7；9)将吸附柱CB3放回收集管中，12,000rpm离心2min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液；10)将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100μL洗脱缓冲液TE，室温放置5min，12,000rpm离心2min，将溶液收集到离心管中；
11)DNA经纯度及浓度检测，稀释到50ng/μL，存放于
‑
20℃冰箱中备用。
[0015]步骤2，标记引物pF7在不结球白菜基因组中扩增在20μL反应体系中，50ng/μL DNA模板1μL、10μM标记引物pF7各1μL、2
×
Primer Star 10μL、去离子水7μL。
[0016]pF7标记引物：pF7F：5
’‑
CGATGGTACGGTGATGTCGT
‑3’
pF7R：5
’‑
GGTGTTCCGGACCTTAGACA
‑3’
。
[0017]PCR扩增程序为：95℃预变性2min，98℃变性30s，56.5℃退火30s，72℃延伸30s，72℃后延伸10min，35个循环，4℃保存。
[0018]步骤3，琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增结束后，采用1.2%琼脂糖凝胶电泳，电泳缓冲液为1
×
TAE Buffer，10μL上样，150V电泳20min后，于凝胶成像仪观察并拍照。
[0019]电泳结果如图1可知，在泳道1...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一组不结球白菜早抽薹的分子标记引物pF7，其特征在于：其序列为：pF7F：5
’‑
CGATGGTACGGTGATGTCGT
‑3’
，pF7R：5
’‑
GGTGTTCCGGACCTTAGACA
‑3’
。2.权利要求1所述分子标记引物在鉴定不结球白菜早抽薹品种或材料中的应用。3.一种鉴定不结球白菜早抽薹品种或材料的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1，提取待鉴定品种或材料的基因组DNA；步骤2，以步骤1提取的DNA为模板，利用权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘同坤，徐新凤，李竹帛，张昌伟，李英，侯喜林，王建军，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：