一株蓝莓灰霉病害的生防菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株解淀粉芽孢杆菌，该菌株为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）CNBG

【技术实现步骤摘要】
一株蓝莓灰霉病害的生防菌及其应用


[0001]本专利技术属于植物病害的生物防治领域，具体涉及一株蓝莓灰霉病害的生防菌及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，蓝莓凭借独特的口感和极高的营养、保健价值风靡全球水果市场，成为仅次于草莓的全球第二大浆果。我国蓝莓产业起步晚，但发展迅速，2020年我国蓝莓种植面积为6.64万公顷，产量达34.72万吨。
[0003]随着蓝莓种植面积的急剧增加和种植年限的增长，病害不断加重，逐渐成为制约蓝莓产业发展的因素。其中，蓝莓灰霉病在全国蓝莓产区相继发生，呈逐年加重态势，严重影响蓝莓果实的品质和产量，造成重大经济损失。
[0004]蓝莓灰霉病作为我国蓝莓生产上最重要的病害之一，其致病菌主要是灰葡萄孢菌 (Botrytis cinerea)。该病原菌能够侵染蓝莓叶片、果柄和果实等部位，初期多从叶尖形成“V”形病斑，逐渐向叶内扩展，形成灰褐色病斑，后期病斑上着生灰色霉层，被感染的果实软化腐烂，风干后，果实干瘪、僵硬。
[0005]目前对蓝莓灰霉病的的主要防治手段还是以杀菌剂为主的化学农药，如腐霉利、甲基硫菌灵和啶酰菌胺等，但容易造成环境污染和病原菌抗药性水平上升。对于生产高品质高附加值的绿色乃至有机蓝莓产品来说，生物防治尤其是利用生防菌及其代谢产物防治病害，受到越来越多的关注和使用。但是目前尚无针对蓝莓灰霉病的生防菌的研究报道，市场上更没有相应的生防菌剂等产品。
[0006]解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)属于芽孢杆菌属的一种革兰氏阳性好氧菌，其是一种广泛存在于环境中的非致病性细菌，对人畜无毒害，其在代谢过程可产生多种丰富的抑菌活性物质，具有广泛的抑菌活性。
[0007]但是目前尚没有人研究和报道解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)对于蓝莓灰霉病是否具备防治作用。

技术实现思路

[0008]专利技术目的：为解决现有技术的不足，本专利技术所要解决的技术问题是提供了一株蓝莓灰霉病生防菌菌株及其应用。本专利技术涉及的具有特异性抑制蓝莓灰霉病菌的解淀粉芽孢杆菌，该菌株生长速度快、营养简单、抗逆性强，其发酵液或发酵液滤液容易获得，具有应用潜力。
[0009]技术方案：为解决上述技术问题，本专利技术提供了一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)，该菌株为解淀粉芽孢杆菌CNBG
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5，其于2020年06月02 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 20008，分类命名为淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，保藏地址为中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0010]本
技术实现思路
还包括一种生防菌剂，所述生防菌剂含有所述的解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens)。
[0011]其中，所述生防菌剂为解淀粉芽孢杆菌的发酵培养液或发酵液滤液。
[0012]本
技术实现思路
还包括所述的解淀粉芽孢杆菌或所述的生防菌在防治蓝莓灰霉病害中的应用。
[0013]其中，所述应用为将所述解淀粉芽孢杆菌进行发酵培养得到发酵液或其发酵液滤液，然后将发酵液或其发酵液滤液处理蓝莓果实表面，然后将蓝莓灰霉病菌孢子悬浮液喷雾接种蓝莓果实表面。
[0014]其中，所述解淀粉芽孢杆菌的发酵条件为：将菌株接种于NB液体培养基中，28～30℃、 160～220rpm振荡培养过夜，而后吸取菌液接种于NB液体培养基中，28～30℃、 160～220rpm振荡培养3～5d，获得发酵液。
[0015]其中，所述发酵液滤液是将发酵液进一步离心，得上清液，然后将上清液微孔滤膜过滤除杂得到发酵液滤液。
[0016]其中，所述蓝莓灰霉病菌孢子悬浮液中的蓝莓灰霉病菌孢子为0.5～1
×
106个/mL。
[0017]有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：本专利技术菌株分离于蓝莓果实表面，能够附着蓝莓生长存活，有利于充分发挥菌株的优势。本专利技术属于生物防治，可避免环境污染和病原菌抗药性水平上升等问题。本专利技术解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)菌株生长速度快，培养条件简单，易于工业化生产，具有良好的开发应用前景。本专利技术的生防菌对蓝莓灰霉病菌的抑制率为60.9％；其发酵液对蓝莓灰霉病害的防治效果为56.4％，发酵液滤液对蓝莓灰霉病害的防治效果为45.0％。
附图说明
[0018]图1为菌株CNBG
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5在NB培养基中的细菌形态图；
[0019]图2为菌株CNBG
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5在NA培养基上的菌落形态图。
[0020]图3为菌株CNBG
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5的系统进化树。
[0021]图4为菌株CNBG
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5的生长曲线。
[0022]图5为菌株CNBG
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5对蓝莓灰霉病菌的生长抑制结果。
具体实施方式
[0023]下面将结合以大肠杆菌为宿主菌的实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限定本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0024]实施例1 CNBG
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5的分离、纯化及鉴定
[0025]取不同感病程度的蓝莓果实10～15个，分别用100mL无菌水在无菌条件清洗果实表面，清洗液混合后依次进行梯度稀释，吸取不同倍数的混合液100μL涂布于NA培养基平板上，于30℃培养箱中培养，待长出菌落后，挑取单菌落在新的NA平板上进行分区纯化，重复纯化直至单菌落出现。根据《伯杰氏细菌鉴定手册》对菌株进行形态学测定。
[0026]用灭菌的牙签挑取单菌落于NB培养基中，30℃、200rpm振荡培养过夜，然后用细菌基因组DNA提取试剂盒(北京百泰克生物技术有限公司)提取细菌基因组DNA，以 DNA为模板，用引物27F和1492R分别进行16s rRNA序列扩增。PCR扩增反应体系为50μL：25μL EasyTaq Mix、2μL正向引物27F(5
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AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
‑3’
)、 2μL反向引物1492R(5
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GGTTACCTTGTTACGACTT
‑3’
)、1μL DNA模板、1μL BSA、 19μL无菌水。扩增条件：94℃预变性5min，94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸45s， 30个循环；7本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，该菌株为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）CNBG
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5，其于2020年06月02日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 20008。2.一种生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂含有权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）CNBG
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5。3.根据权利要求2所述的生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂为解淀粉芽孢杆菌的发酵培养液或发酵液滤液。4.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌或权利要求2所述的生防菌在防治蓝莓灰霉病害中的应用。5.根据权利要求4...

【专利技术属性】
技术研发人员：于金平，李琦，吕世鹏，贾明云，周冬琴，侯炤琪，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：