一种抗PD-L1/TGF-β融合蛋白制造技术

本发明专利技术涉及融合蛋白技术领域，具体而言，涉及抗PD-L1/TGF-β融合蛋白。所述融合蛋白包含抗PD-L1抗体、肽接头和TGFβR

【技术实现步骤摘要】
一种抗PD-L1/TGF-β
融合蛋白


[0001]本专利技术涉及融合蛋白
，更具体地，涉及一种抗PD-L1/TGF-β融合蛋白。

技术介绍

[0002]人程序性细胞死亡受体-1(PD-1)是一种有288个氨基酸的I型膜蛋白，是已知的主要免疫检查点(Immune Checkpoint)之一(Blank et al,2005,Cancer Immunotherapy,54:307-314)。PD-1表达在已经激活的T淋巴细胞，它与配体PD-L1(程序性细胞死亡受体-配体1，programmed cell death-Ligand 1)和PD-L2(程序性细胞死亡受体-配体2，programmed cell death-Ligand 2)结合可以抑制T淋巴细胞的活性及相关的体内细胞免疫反应。PD-L2主要表达在巨噬细胞和树突状细胞，而PD-L1则广泛表达于B、T淋巴细胞及外周细胞如微血管上皮细胞，肺、肝、心等组织细胞中。大量研究表明，PD-1和PD-L1的相互作用不但是维持体内免疫系统平衡所必须，也是导致PD-L1表达阳性肿瘤细胞规避免疫监视的主要机制和原因。通过阻断癌细胞对PD-1/PD-L1信号通路的负调控，激活免疫系统，能够促进T细胞相关的肿瘤特异性细胞免疫反应，从而打开了一扇新的肿瘤治疗方法的大门-肿瘤免疫疗法。
[0003]PD-1(由基因Pdcd1编码)为与CD28和CTLA-4有关的免疫球蛋白超家族成员。研究成果显示，当PD-1与其配体(PD-L1和/或PD-L2)结合时会负调节抗原受体信号转导。目前已弄清鼠PD-1结构以及小鼠PD-1与人PD-L1的共结晶结构(Zhang，X.等，Immunity 20：337-347(2004)；Lin等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA105：3011-6(2008))。PD-1及类似的家族成员为I型跨膜糖蛋白，其含有负责配体结合的Ig可变型(V-型)结构域和负责结合信号转导分子的胞质尾区。PD-1胞质尾区含有两个基于酪氨酸的信号转导模体ITIM(免疫受体酪氨酸抑制作用模体)和ITSM(免疫受体酪氨酸转换作用模体)。
[0004]PD-1在肿瘤的免疫逃避机制中起到了重要的作用。肿瘤免疫疗法，即利用人体自身的免疫系统抵御癌症，是一种突破性的肿瘤治疗方法，但是肿瘤微环境可保护肿瘤细胞免受有效的免疫破坏，因此如何打破肿瘤微环境成为抗肿瘤研究的重点。现有研究成果已确定了PD-1在肿瘤微环境中的作用：PD-L1在许多小鼠和人肿瘤中表达(并在大多数PD-L1阴性肿瘤细胞系中可由IFN-γ诱导)，并被推定为介导肿瘤免疫逃避的重要靶点(Iwai Y.等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99：12293-12297(2002)；Strome S.E.等，Cancer Res.，63：6501-6505(2003))。通过免疫组织化学评估活组织检查，已经在人的很多原发性肿瘤中发现PD-1(在肿瘤浸润淋巴细胞上)和/或PD-L1在肿瘤细胞上的表达。这样的组织包括肺癌、肝癌、卵巢癌、宫颈癌、皮肤癌、结肠癌、神经胶质瘤、膀胱癌、乳腺癌、肾癌、食道癌、胃癌、口腔鳞状细胞癌、尿道上皮细胞癌和胰腺癌以及头颈肿瘤等。由此可见，阻断PD-1/PD-L1的相互作用可以提高肿瘤特异性T细胞的免疫活性，有助于免疫系统清除肿瘤细胞，因此PD-L1成为开发肿瘤免疫治疗药物的热门靶点。
[0005]转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)属于调节细胞生长和分化的TGF-β超家族。TGF-β通过异源四聚体受体复合物传递信号，这个受体复合物是由两个I型和两个II型的跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶受体组成。TGF-β是一种多功能的细胞因子，以
细胞或背景依赖的方式发挥肿瘤抑制或肿瘤促进的作用。TGF-β信号的肿瘤抑制作用源于其诱导多个基因表达的能力，当肿瘤发展过程中引入突变或表观遗传修饰时，癌细胞逐渐耐受TGF-β信号的抑制作用，最终导致肿瘤的发展。研究发现阻断TGF-β信号传导通路能够减少肿瘤的转移。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种新的抗PD-L1/TGF-β融合蛋白，能同时阻断PD-L1和TGF-β信号通路。本专利技术的目的还在于提供编码所述融合蛋白的多核苷酸分子；提供包含所述多核苷酸分子的表达载体；提供包含所述表达载体的宿主细胞；提供所述融合蛋白的制备方法；提供包含所述融合蛋白的药物组合物；提供所述融合蛋白或所述药物组合物在制备治疗癌症药物中的应用；提供所述融合蛋白或所述药物组合物用于治疗癌症的方法。
[0007]为了达到上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0008]本专利技术的第一个方面提供了一种抗PD-L1/TGF-β融合蛋白，具有如下通式：
[0009]Ab-L-TGFβRII ECD
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(I)
[0010]其中Ab为抗PD-L1抗体，L为肽接头，TGFβRII ECD为TGFβRⅡ胞外结构域；所述TGFβRⅡ胞外结构域的N末端通过肽接头连接至抗PD-L1抗体重链的C末端；所述抗PD-L1抗体的重链包含互补决定区HCDR1-3，其中HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示，HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示，HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示；所述抗PD-L1抗体的轻链包含互补决定区LCDR1-3，其中LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示，LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示，LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示。
[0011]在一个优选的实施方案中，所述抗PD-L1抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示，所述抗PD-L1抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：17所示。
[0012]在一个优选的实施方案中，所述抗PD-L1抗体的重链氨基酸序列选自SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：3，所述抗PD-L1抗体的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。
[0013]在一个优选的实施方案中，所述抗PD-L1抗体为单克隆抗体。
[0014]在一个优选的实施方案中，所述抗PD-L1抗体为人源化抗体。
[0015]在一个优选的实施方案中，所述抗PD-L1抗体为IgG类抗体。
[0016]在一个优选的实施方案中，所述TGFβRⅡ胞外结构域选自以下组中的一种或其组合：
[0017]1)全长TGFβRⅡ胞外结构域；
[0018]2)C端截短6-10个氨基酸的TGFβRⅡ胞外结构域，更优选的，C端截短8个氨基酸的TGFβRⅡ胞外结构域；
[0019]3)N端截短18-22个氨基酸的TGFβRⅡ胞外结构域，更优选的，N端截短20个氨基酸的TGFβRⅡ胞外结构域；
[0020]4)包括至少1个糖基化位点突变的全长或截短的TGFβRⅡ胞外结构域，所述突变选自S本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗PD-L1/TGF-β融合蛋白，其特征在于，具有如下通式：Ab-L-TGFβRII ECD(I)其中Ab为抗PD-L1抗体，L为肽接头，TGFβRII ECD为TGFβRⅡ胞外结构域；所述TGFβRⅡ胞外结构域的N末端通过肽接头连接至抗PD-L1抗体重链的C末端；所述抗PD-L1抗体的重链包含互补决定区HCDR1-3，其中HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示，HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示，HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示；所述抗PD-L1抗体的轻链包含互补决定区LCDR1-3，其中LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示，LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示，LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述抗PD-L1抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示，所述抗PD-L1抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：17所示。3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述抗PD-L1抗体的重链氨基酸序列选自SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：3，所述抗PD-L1抗体的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。4.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述TGFβRⅡ胞外结构域选自以下组中的一种或其组合：1)全长TGFβRⅡ胞外结构域；2)C端截短6-10个氨基酸的TGFβRⅡ胞外结构域；3)N端截短18-22个氨基酸的TGFβRⅡ胞外结构域；4)包括至少1个糖基化位点突变的全长或截短的TGFβRⅡ胞外结构域，所述突变选自S8P、T16P、T16V、N71Q。5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于，所述TGFβRⅡ胞外结构域的氨基酸序列选自SEQ ID NO：5-SEQ ID NO：9。6.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述肽接头选自(G4S)3T或(G4S)3XDYTHTP，其中X为G或S，Y为K或A。7.根据权利要求1-6任一项所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白选自以下组...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄浩旻，邓岚，李理，朱祯平，
申请(专利权)人：三生国健药业上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：