一种快速鉴定大葱杂交种纯度的方法技术

本发明专利技术公开了大葱杂交种的鉴定方法，尤其涉及一种快速鉴定大葱杂交种纯度的方法，特别试用与已知父母本，需要鉴定F1代种子的纯度，它属于种子鉴定技术领域。一种快速鉴定大葱杂交种纯度的方法，采用KASP标记对大葱杂交种纯度进行鉴定。本发明专利技术只需提取大葱总DNA进行批量PCR扩增，然后进行批量实验，节省了大量人力，而且特别试用于大量样本的操作。本发明专利技术方法能够方便、快捷、准确的鉴定出大葱杂交种的纯度。纯度。纯度。

【技术实现步骤摘要】
一种快速鉴定大葱杂交种纯度的方法


[0001]本专利技术涉及大葱杂交种的鉴定方法，尤其涉及一种快速鉴定大葱杂交种纯度的方法，特别试用与已知父母本，需要鉴定F1代种子的纯度，它属于种子鉴定


技术介绍

[0002]大葱是百合科（Liliaceae）葱属中以叶鞘组成的肥大假茎和嫩叶为产品的二、三年生草本植物。原产于中国西部和俄罗斯的西伯利亚，是我国重要的香辛、保健蔬菜。大葱在中国已有2000多年的栽培历史，以北方栽培更为普遍。大葱的假茎和嫩叶质地细嫩，含有糖类、蛋白质、矿物质和维生素等，并具有杀菌和医疗价值。大葱种子一般为杂交品种，纯度是鉴定种子质量的重要指标之一。
[0003]作物品种鉴定的常用方法主要包括种子形态鉴定、田间种植形态鉴定和同工酶电泳技术鉴定等方法。种子形态鉴定法，易受环境条件影响，鉴定结果准确性较差；田间种植形态鉴定存在周期较长、成本较高、工作量较大的技术问题，并且表型易受栽培措施和环境条件的影响，严重影响品种鉴定的效率及准确性，越来越不能满足育种工作和生产经营的需要。利用同工酶技术鉴定方法，作物品种纯度虽然准确、可靠，但同工酶标记具有组织和器官特异性，信息量非常有限，多态性不够丰富。大葱种子纯度鉴定技术，也从传统的依赖形态学的鉴定方法逐步发展形成分子标记鉴定。分子标记技术能够从DNA水平上揭示子代与亲本间的遗传差异，不受环境条件和栽培措施的影响，无组织、器官及发育特异性，能够检测微小的变异，不受植株生长季节的限制，多态性丰富、稳定性高，可以大大缩短鉴定时间。DNA分子标记技术的迅速发展，使得从基因组水平上检测大葱杂交种真伪和纯度成为可能。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的就是为了解决上述技术问题，而提供了一种快速鉴定大葱杂交种纯度的方法，能够方便、快捷、准确的鉴定出大葱纯度。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术是通过下述技术方案实现的：一种快速鉴定大葱杂交种纯度的方法，采用KASP标记对大葱杂交种纯度进行鉴定。
[0006]优选的，上述一种快速鉴定大葱杂交种纯度的方法，步骤如下：a.提取待检测大葱DNA；b.将样本DNA浓度稀释后转移至384PCR板中；c.配制KASP PCR反应体系；d.将配制好的KASP PCR反应体系放入步骤b的384PCR板中快速离心，用硅胶盖盖严防止PCR反应时液体蒸发；e.将384PCR板放入PCR仪中进行PCR反应；f. 将反应完成后的PCR板快速离心后，用OMEGA F SNP分型检测仪进行扫描分析，
分析完成后即可分辨出待检测大葱样品。
[0007]优选的，上述步骤b所述的DNA浓度稀释是将样本DNA浓度稀释至30ng/ul，在工作站中将样本DNA从96孔板中转移至384PCR板中。
[0008]优选的，上述步骤 c中所述的配制KASP PCR反应体系具体步骤如下：反应体系总体积5ul，包括2ul DNA、2ul 2
×
PARMS PRO MIX、0.056ul KASP assay mix、ddH20补至1ul。
[0009]优选的，上述步骤e中的PCR反应具体步骤是：将384PCR板放入PCR仪中进行PCR反应，反应程序包括95℃预变性10min；95℃变性15s，61
‑
55℃退火45s，每个循环降0.6℃,10个循环；95℃变性15s，55℃退火45s，35个循环。
[0010]优选的，上述标记的KASP标记的引物核苷酸序列为：No.182(F1)。
[0011]优选的，上述引物核苷酸序列No.182(F1)为No.182(F1)、No.182(F2)和No.182(R)所示的引物。
[0012]优选的，上述步骤d中的离心速度为4500r/min、离心时间为40s。
[0013]优选的，上述的No.182(F1):下划线部分为HEX荧光标签序列GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTGCCGCCCTCTCTGTGTAA；No.182(F2): 下划线部分为FAM荧光标签序列GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTGCCGCCCTCTCTGTGTAG；No.182(R):GCATTTCGTCATGGAGCTTTG。
[0014]由于采用上述技术方案，使得本专利技术具有如下有益效果：（1）快速准确：通过本专利技术，只需提取大葱总DNA进行批量PCR扩增，然后进行扫描即可，这些检测步骤均由仪器操作完成，可以进行批量实验，节省了大量人力，而且特别试用于大量样本的操作，通过扫描即可检测纯合度。
[0015]（2）标记稳定：对318份大葱样本进行验证，其分子标记鉴定结果与遗传分析结果完全一致。且本专利技术仅需要一对引物即可完成检测，既高效又准确。
[0016]（3）本专利技术对鉴定大葱杂交种纯度操作可以批量化、自动化、标准化，特别试用与大量群体大葱的检测。
[0017]利用本专利技术可以对大量群体的大葱纯度进行快速准确的判断，提高大葱育种效率，对于建立大葱分子标记辅助育种技术体系具有重要意义。本专利技术只需提取大葱总DNA进行批量PCR扩增，然后进行批量实验，节省了大量人力。
附图说明
[0018]图1为实施例1方法对大葱杂交种纯度进行鉴定的KASP纯度检测分型图。
[0019]图中，左上方的圆点表示母本类型，右下方圆点表示父本类型，中间圆点表示杂合基因型。
具体实施方式
[0020]下面结合附图对本专利技术的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本专利技术技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的精神和范围，均应涵盖在本专利技术的保护范围中。下述实施例中所用的材料、试剂等，若无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0021]实施例1一种快速鉴定大葱杂交种纯度的方法，具体步骤如下：a.提取待检测大葱DNA；b.将样本DNA浓度稀释至30ng/ul，在工作站中将样本DNA从96孔板中转移至384PCR板中；c.配制KASP PCR反应体系，反应体系总体积5ul，包括2ul DNA、2ul 2
×
PARMS PRO MIX、0.056ul KASP assay mix、ddH20补至1ul；d. .将配制好的KASP PCR反应体系放入步骤b的384PCR板中快速离心，离心速度为4500r/min、离心时间为40s，用硅胶盖盖严防止PCR反应时液体蒸发；e.将384PCR板放入PCR仪中进行PCR反应，反应程序包括95℃预变性10min；95℃变性15s，61
‑
55℃退火45s，每个循环降0.6℃,10个循环；95℃变性15s，55℃退火45s，35个循环；f. 将反应完成后的PCR板快速离心后，用OMEGA F SNP分型检测仪进行扫描分析，分析完成后即可分辨出待检测大葱样品。
[0022]实施例中所述KASP标记的引物核苷酸序列为：No.182(F1)，引物序列No.182(F1)、 No.182(F2) 和No.182(R)如下：No.1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速鉴定大葱杂交种纯度的方法，其特征在于采用KASP标记对大葱杂交种纯度进行鉴定。2.一种快速鉴定大葱杂交种纯度的方法，其特征在于步骤如下：a.提取待检测大葱DNA；b.将样本DNA浓度稀释后转移至384PCR板中；c.配制KASP PCR反应体系；d.将配制好的KASP PCR反应体系放入步骤b的384PCR板中快速离心，用硅胶盖盖严防止PCR反应时液体蒸发； e.将384PCR板放入PCR仪中进行PCR反应； f. 将反应完成后的PCR板快速离心后，用OMEGA F SNP分型检测仪进行扫描分析，分析完成后即可分辨出待检测大葱样品。3.根据权利要求2所述的一种快速鉴定大葱杂交种纯度的方法，其特征在于步骤b所述的DNA浓度稀释是将样本DNA浓度稀释至30ng/ul，在工作站中将样本DNA从96孔板中转移至384PCR板中。4.根据权利要求2所述的一种快速鉴定大葱杂交种纯度的方法，其特征在于步骤 c中所述的配制KASP PCR反应体系具体步骤如下：反应体系总体积5ul，包括2ul DNA、2ul ...

【专利技术属性】
技术研发人员：李娜，崔连伟，贾俊香，杨国栋，蒋欣陶，田云，姜滨滨，李振，吴兴壮，李晓丽，张曼丽，
申请(专利权)人：辽宁省农业科学院，
类型：发明
国别省市：