本发明专利技术涉及分子生物学诊断领域，具体涉及一种快速检测染色体数目异常的试剂盒及其应用。在一管PCR反应液中利用31对引物同时扩增13号、18号、21号、X和Y染色体上的31个DNA位点，达到检测临床样品中13号、18号、21号、X和Y染色体数目异常的目的。所述试剂盒包含ANEU反应液、ANEU引物混合液、热启动核酸聚合酶、ANEU正常男性对照、ANEU正常女性对照、ANEU空白对照。本发明专利技术检测周期短，获得样本后可于一天内得到结果，且一个样本仅需进行单管扩增，检测技术流程简单，可实现高通量、快速、标准化的检测。标准化的检测。
【技术实现步骤摘要】
一种快速检测染色体数目异常的试剂盒及其应用
[0001]本专利技术涉及分子生物学诊断领域，具体涉及一种快速检测染色体数目异常的试剂盒及其应用。
技术介绍
[0002]染色体是遗传物质的载体。正常状况下，人类体细胞中有23对染色体，每对染色体都是一条来自父方，另一条来自母方，其中，有22对染色体男女都一样，为常染色体，有1对染色体决定人类性别，为性染色体。染色体数目与结构异常是导致新生儿出生缺陷的重要原因之一，在新生儿中染色体异常率约为2.4％(染色体数目异常率约为1.4％，染色体结构异常率约为1.0％)。由于染色体上存在上千甚至上万个基因，染色体发生异常将会导致许多基因的增加或缺失，就可能造成个体的异常现象，例如唐氏综合征(多了一条21号染色体)、特纳氏综合征(少一条X性染色体完全或部分缺失或结构异常)等，都属于染色体数目异常之疾病。
[0003]临床上常见的唐氏综合征(T21)、爱德华氏综合征(T18)、帕陶氏综合征(T13)及X/Y染色体异常占新生儿染色体病的85％～95％，其异常占比约为：T2141％、T1818％、T133.2％、X单体6％、XXY6.5％、XXX3.2％、XYY2.1％、三倍体综合征0.7％。
[0004]唐氏综合征(T21)患儿有明显的智能落后、特殊面容、生长发育障碍和多发畸形。临床患者面容特殊，两外眼角上翘，鼻梁扁平，舌头常往外伸出，肌无力及通贯手。患者绝大多数为严重智能障碍并伴有多种脏器的异常，如先天性心脏病、白血病、消化道畸形等。该病发生几乎波及世界各地，很少有人种差异。
[0005]爱德华氏(T18)患儿表现为生长迟缓、上睑下垂眼睑畸形耳位低小嘴小下颏皮肤斑点示指超过中指并握紧拳头、并指(趾)畸形、摇篮底足(rocker
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bottomfeet)足趾大而短、室间隔缺损脐疝或腹股沟疝、胸骨短、小骨盆和肌张力增高，偶有癫痫发作、严重精神发育迟滞等，预后极差，95％在胎儿期流产，出生患儿1/3生后一个月内死亡，50％在生后两个月死亡。
[0006]帕陶氏综合征(T13)患儿表现为小头前额凸出、小眼、虹膜缺损角膜浑浊、嗅觉缺失耳位低唇腭裂、毛细血管瘤、多指(趾)畸形、手指弯曲、足跟后凸右位心、脐疝听力缺陷、肌张力过高及严重精神发育迟滞等，帕陶氏综合征胎儿多数无法熬过孕期。
[0007]特纳氏综合征(X单体)，又称先天性卵巢发育不全综合征，患者比正常女性少了一条X染色体，导致相关临床症状，包括原发性闭经、蹼颈、肘外翻、身材矮小。X染色体数目增多(XXX)，患智能落后及先天性异常的风险则加大，特别是有三个以上X染色体；克氏综合征染色体异常表现为有两条或两条以上的X染色体和一条Y染色体(XXY、XXXY等)，表型为男性，在男性活产儿中发生率为1/800，这类患者临床表现身材一般较高，四肢较长，与身体不成比例，常有小而硬的睾丸，约1/3患者会出现乳房肿大，青春期发育正常，但面部毛发稀少，有学习困难倾向；许多人语言能力不足，听写及阅读亦有困难。XYY综合征的染色体异常表现为有两条Y染色体和一条X染色体，为男性表型，男性中发病率约为1/1000，患者比正常
人高，与其家庭成员相比，其智商降低10～15个百分点。体格发育基本正常，可有微小行为异常，活动过度，注意力缺乏，学习困难等。
[0008]随着对胎儿先天性染色体异常导致遗传性疾病的研究范围的扩大与深入，产前诊断越来越受到重视。以预测胎儿是否患有先天性或遗传性疾病、遗传缺陷、畸形等不正常情况，以便采取措施。现今的产前诊断技术简便、安全、可靠。主要是羊水穿刺技术和有关的实验检查。一般在妊娠16周后抽取羊水，然后进行细胞染色质检查、细胞培养做染色体核型分析或荧光原位杂交分析等。
[0009]染色体核型分析为染色体非整倍体检测的金标准方法，但该方法对样本的需求量较大，需要额外细胞培养时间，且细胞生长速度不一，做染色体的染色与排序耗时费力，平均需两周的时间得到结果，时间与人力的成本高；荧光原位杂交法将荧光素标记的核酸探针与待测样本中的核酸序列按照碱基互补配对杂交，在荧光显微镜下观察，检测的步骤繁琐、周期较长，灵敏度与特异性较低，受限于显微镜分辨率，对操作人员判读的要求较高。
[0010]多重连接探针扩增技术(multiplex ligation
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dependentprobe amplification，MLPA)搭配毛细管电泳仪分析，其原理包括探针和靶序列DNA进行杂交，杂交后的探针通过DNA连接酶连接，再针对连接的探针进行PCR扩增，产物通过毛细管电泳分离及数据收集，分析软件对收集的数据进行分析最后计算染色体数目。但由于需要探针杂交以及连接酶连接，步骤较多检测耗费时间约需要2天。
[0011]有鉴于此，需要一种准确、专一、快速来检测人类个体13号、18号、21号、X和Y染色体数目的方法。
技术实现思路
[0012]本专利技术的目的在于提供一种快速检测染色体数目异常的试剂盒及其应用。所述的染色体指的是13号、18号、31号以及性染色体(X和Y)。
[0013]为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0014]一种快速检测染色体数目异常的扩增引物组合，该引物组合共包括31对引物对，可同时扩增以下DNA位点；具体为8个13号染色体的STR位点(D13S742、D13S765、D13S305、D13S801、D13S634、D13S258、D13S628、D13S796)、8个18号染色体的STR位点(D18S391、D18S976、D18S1002、D18S535、D18S536、D18S386、D18S875、D18S390)、8个21号染色体的STR位点(D21S1432、D21S1414、D21S1437、D21S1435、D21S1809、D21S1412、D21S1411、D21S1446)、3个性染色体的STR位点(DXYS267、DXYS218、DXS6789)和4个与性染色体数目异常相关的基因(ZFX/Y、SRY、AMEL、TAF9L)。
[0015]上述引物对如表1所示：
[0016]表1用于扩增31个DNA位点所对应的引物对
[0017][0018][0019][0020]上述引物对的正向引物的5
’
端标记有荧光基团；所述荧光基团选自选自FAM、VIC、HEX、JOE、TMR、NED、PET、ROX中的任意一种。
[0021]上述一种引物组合在制备染色体非整倍检测试剂盒中的应用，所述试剂盒，组成成分包括ANEU反应液、ANEU引物混合液、热启动核酸聚合酶、ANEU正常女性对照、ANEU正常男性对照、ANEU空白对照；所述ANEU引物混合液中包含上述31对引物对；所述ANEU反应液中包含增强剂，所述增强剂包括甜菜碱、二甲基亚砜、甘油或乙二醇中的一种或多种。
[0022]上述检测试剂盒的检测方法为：利用31对不同引物在一管反应液中，进行PCR扩增反应，同时扩增13号、18本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种快速检测染色体数目异常的扩增引物组合，其特征在于：所述引物组合包括31对引物对，可同时扩增以下STR位点和基因：8个13号染色体的STR位点：D13S742、D13S765、D13S305、D13S801、D13S634、D13S258、D13S628、D13S796；8个18号染色体的STR位点：D18S391、D18S976、D18S1002、D18S535、D18S536、D18S386、D18S875、D18S390；8个21号染色体的STR位点：D21S1432、D21S1414、D21S1437、D21S1435、D21S1809、D21S1412、D21S1411、D21S1446； 3个性染色体的STR位点：DXYS267、DXYS218、DXS6789；4个与性染色体数目异常相关的基因：ZFX/Y、SRY、AMEL、TAF9L。2.根据权利要求1所述的扩增引物组合，其特征在于：所述引物对包括： 扩增D13S742的引物对：SEQ ID NO.1 ~ 2；扩增D13S765的引物对：SEQ ID NO.3 ~ 4；扩增D13S305的引物对：SEQ ID NO.5 ~ 6；扩增D13S801的引物对：SEQ ID NO.7 ~ 8；扩增D13S634的引物对：SEQ ID NO.9 ~ 10；扩增D13S258的引物对：SEQ ID NO.11~ 12；扩增D13S628的引物对：SEQ ID NO.13 ~ 14；扩增D13S796的引物对：SEQ ID NO.15 ~ 16；扩增D18S391的引物对：SEQ ID NO.17 ~ 18；扩增D18S976的引物对：SEQ ID NO.19 ~ 20；扩增D18S1002的引物对：SEQ ID NO.21 ~ 22；扩增D18S535的引物对：SEQ ID NO.23 ~ 24；扩增D18S536的引物对：SEQ ID NO.25 ~ 26；扩增D18S386的引物对：SEQ ID NO.27 ~ 28；扩增D18S875的引物对：SEQ ID NO.29 ~ 30；扩增D18S390的引物对：SEQ ID NO.31 ~ 32；扩增D21S1432的引物对：SEQ ID N...
【专利技术属性】
技术研发人员：萧羽乔，郭亦亦，陈昱玮，邱一帆，
申请(专利权)人：胜亚生物科技厦门有限公司，
类型：发明
国别省市：
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