一种大泷六线鱼规模化授精孵化方法技术

本发明专利技术提供了一种大泷六线鱼规模化授精孵化方法，是在陆地上取促熟的大泷六线鱼雄鱼和雌鱼的精液和卵子进行人工受精，将受精卵制成卵片后，将卵片转移到海上进行发育，待受精卵发育出现眼点后，再将卵片运输到陆地室内进行孵化至仔鱼破膜。本发明专利技术的方法能在降低亲鱼获取成本的同时，提高人工授精效率并减少孵化管理难度，提高大泷六线鱼受精卵孵化率，为大泷六线鱼规模化人工繁育提供了一条可行途径。泷六线鱼规模化人工繁育提供了一条可行途径。

【技术实现步骤摘要】
一种大泷六线鱼规模化授精孵化方法


[0001]本专利技术属于鱼类繁殖
，具体涉及一种大泷六线鱼规模化授精孵化方法。

技术介绍

[0002]大泷六线鱼(Hexagrammos otakii)又名欧氏六线鱼、六线鱼，俗称黄鱼，隶属鲉形目(Scorpaeniformes)、六线鱼科(Hexagrammidate)、六线鱼属(Hexagrammos)，为冷温性近海底层岩礁鱼类。主要分布于黄海和渤海沿岸，也见于朝鲜、日本和俄罗斯远东诸海。此鱼耐低温，生存温度2～26℃，在中国主要产自山东和辽宁等地的近海多岩礁海区。其肉质细嫩、味道鲜美，素有“北方石斑”之称，深受广大消费者喜爱，经济价值较高。大泷六线鱼是中国北方网箱养殖的理想种类，也是开拓礁湾增殖和发展游钓业的理想品种，作为北方特有的名贵海水鱼类具有广阔的推广前景。
[0003]大泷六线鱼亲鱼怀卵量低，鱼卵为黏性卵，易黏结成块，是水产界公认的人工繁育技术难度大的品种。直到本世纪初，大泷六线鱼人工繁育技术才取得突破，从而解决了大泷六线鱼产业发展的缺少苗种的困境，为大泷六线鱼产业的发展奠定了基础。
[0004]但目前大泷六线鱼的规模化人工繁育还存在一些难点：
[0005]1)大泷六线鱼的生活习性决定了其适合海上网箱养殖，不适合工厂化养殖，因此目前大泷六线鱼的人工育苗多采用野生或海上网箱养殖的成鱼，但是无论将野生或是网箱养殖的成鱼转入车间促熟培育，都会导致其生活环境和条件发生巨大改变，易出现聚堆、受惊吓、不摄食等不适应的现象，导致鱼体受伤感染、烂鳍烂尾，降低了鱼体免疫水平，进而导致性腺退化，甚至大量死亡，大大制约了大泷六线鱼亲鱼培育的成功率。
[0006]2)目前采用的人工繁育技术，每次仅能制作一片受精卵片，生产效率较低，不适应大规模人工育苗，苗种产量较低。
[0007]因此，如何提高大泷六线鱼苗人工授精的工作效率就成为大泷六线鱼人工养殖的关键因素。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供了一种大泷六线鱼规模化授精孵化方法，从而解决了大泷六线鱼人工繁育过程中亲鱼培育难度较大，和受精卵生产效率较低的问题。
[0009]本专利技术的方法，是在陆地上取促熟的大泷六线鱼雄鱼和雌鱼的精液和卵子进行人工受精，将受精卵制成卵片后，将卵片转移到海上进行发育，待受精卵发育出现眼点后，再将卵片运输到陆地室内进行孵化至仔鱼破膜；
[0010]所述的方法，其中促熟的大泷六线鱼雄鱼和雌鱼，其中雄鱼体重300～500g，雌鱼体重400～800g；
[0011]所述的促熟过程中，在饲料中添加氨基酸序列为SRSMKTDHKRYLATIPFHAIERS(SEQ ID NO:1)的抗菌肽；
[0012]所述的卵片，作为实施例的一种具体记载，是有3～4层受精卵，大小为15CM
×
15CM；此种规格的卵片既能保证卵片中部氧气交换，又使卵片保持一定强度，防止刷卵时卵片破碎；经对比试验，这种规格的卵片孵化率显著高于其他规格的卵片。
[0013]所述的方法，再海上进行发育时，使用氟苯尼考溶液刷洗卵片；
[0014]作为实施例的一种具体记载，将卵片转移到海上进行发育，是使发育积温达到150℃
·
d。
[0015]作为优选，在陆地室内进行孵化时，在孵化池中设置能提供反冲水流的装置；
[0016]更进一步的，陆地室内孵化的条件如下：水温14～16℃，盐度29～31
‰
，pH 7.8～8.1，溶解氧保持在6mg/L以上，光照强度100～300Lx，充气量控制在0.2～0.4L/min。
[0017]本专利技术方法能在降低亲鱼获取成本的同时，提高人工授精效率并减少孵化管理难度，提高大泷六线鱼受精卵孵化率，为大泷六线鱼规模化人工繁育提供了一条可行途径。
具体实施方式
[0018]本专利技术的方法，包括如下的步骤：
[0019]1、亲鱼的选择与促熟
[0020](1)亲鱼的选择体型体色正常，鳞被、鳍条完整，活动正常，反应灵敏，体质健壮。雄鱼体重300～500g，雌鱼体重400～800g。
[0021](2)亲鱼促熟饲料的配制
[0022]为保证大泷六线鱼亲鱼促熟期间所需要的营养需求，以人工配合饲料(可选用已报道的其它海水鱼类的配合饲料)为基础，在其中添加玉筋鱼、鹰爪虾、牡蛎肉、贻贝肉、沙蚕、鱿鱼等鱼糜混合物，混匀后加入复合维生素、胡萝卜素、卵磷脂，使用饲料加工机进行混匀加工，制成粒径5mm大小的颗粒。饲料的一种具体组分如下：人工配合饲料粉末30份、玉筋鱼18份、鹰爪虾8份、牡蛎肉8份、贻贝肉8份、沙蚕8份、鱿鱼8份，复合维生素1份、胡萝卜素1份、卵磷脂1份。
[0023]为了提高促熟期间养殖的大泷六线鱼的免疫力，避免在产卵后被病害菌感染，在投喂的饵料中添加氨基酸序列为SRSMKTDHKRYLATIPFHAIERS(SEQ ID NO:1)的抗菌肽，添加浓度为20
‑
50mg/Kg饲料。该抗菌肽是从六线鱼的弧菌感染鱼与对照鱼的消减文库中的差异片段通过牛津杯方法进行抗菌性筛选筛选获得的。
[0024]使用pH为7.0的，含TTC(氯化三苯四氮唑)的灭菌的MH肉汤培养基检测AP22多肽的抗菌性，检测的细菌包含有大肠杆菌、迟缓爱德华氏菌，副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌。
[0025]表1：多肽的最低抑菌浓度值MIC(μg/mL)
[0026][0027]从上述的结果可看出，本专利技术所使用的抗菌多肽对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌都具有抗菌、抑菌效果，是一种广谱的抗菌肽。
[0028]将6μg/ml浓度的抗菌肽添加到大肠杆菌的LB液体培养基中，在37℃培养90min后，将菌液在5000r/min离心10min，将菌体沉淀使用0.1mol/L的磷酸盐缓冲液(PH7.5)进行漂洗。然后将漂洗后的菌体加入2.0％的戊二醛溶液制成细菌悬浮液；悬液在4℃固定3
‑
5h，然后在5000r/min离心10min，用PBS溶液使离心收集的细菌悬浮散开制成悬液；然后让细菌自由下沉干燥，并在真空下溅射喷金；通过扫描电镜观察细菌结构，工作电压10KV。正常细菌对照组样品的制备方法同抗菌肽组。
[0029]结果显示抗菌肽处理过的大肠杆菌的扫描电镜显示细菌形态结构发生改变，细菌变形。表明抗菌肽能够破坏大肠杆菌的细胞壁，使细胞壁失去完整性，从而杀灭细菌。
[0030]投喂结果表明添加抗菌肽的饲料投喂组相比于对照组，亲鱼在产卵后的养殖过程中发病死亡率明显降低。
[0031](3)投喂方法
[0032]9月
‑
11月为亲鱼强化培育阶段，在这个阶段，投喂上述配方的配合饲料，每天投喂2次，投喂量为鱼体质量的2％～3％。
[0033]2、规模化人工授精方法
[0034](1)取10尾雄鱼的混合精液10～20ml，放入暂存管中，置于冰盒中保存；
[0035](2)取40尾本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大泷六线鱼规模化授精孵化方法，其特征在于，所述的方法是在陆地上取促熟的大泷六线鱼雄鱼和雌鱼的精液和卵子进行人工受精，将受精卵制成卵片后，将卵片转移到海上进行发育，待受精卵发育出现眼点后，再将卵片运输到陆地室内进行孵化至仔鱼破膜。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的用于促熟的大泷六线鱼雄鱼和雌鱼，其中雄鱼体重300～500g，雌鱼体重400～800g。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于,所述的促熟的大泷六线鱼雄鱼和雌鱼，其在促熟过程中，在饲料中添加抗菌肽。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于,所述的抗菌肽的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于,所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：高凤祥，胡发文，菅玉霞，李莉，王晓龙，王雪，潘雷，郭文，
申请(专利权)人：山东省海洋科学研究院青岛国家海洋科学研究中心，
类型：发明
国别省市：