一种黄皮生物碱的制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种黄皮生物碱的制备方法与应用，属于天然药物技术领域。本发明专利技术提供的黄皮生物碱的制备方法，先用甲醇提取，再经酸碱处理来集中提取生物碱，再采用活性追踪结合TLC检测，对每个活性部分中具有黄皮生物碱显色特征的主斑点进行合并、富集、并对活性生物碱进行集中分离，获得了对梨轮纹病原菌具有较强抑制作用的黄皮生物碱mafaicheenamineE、murrayanine、3

【技术实现步骤摘要】
一种黄皮生物碱的制备方法与应用


[0001]本专利技术属于天然药物
，尤其涉及一种黄皮生物碱的制备方法与应用。

技术介绍

[0002]当今世界，环境保护和食品安全已成为全社会关注的两大焦点问题。然而，以往由于化学农药的长期或不科学使用已经导致多种农作物的病原微生物和害虫产生抗药性、生态环境恶化、生物多样性水平降低等一系列问题。因此，寻找具有高效、低毒、低残留的绿色环境友好新型农药，已成为当今农药研究与创制的主要目标。植物源农药以其在自然环境中自身高选择性、易降解、无公害的优势已成为绿色农药研发的首选之一。由于从天然资源宝库中寻找农药活性化合物具有较好的结构多样性和活性特异性，因此，植物源农药便自然成为新农药创制的重要途径和研究热点。
[0003]黄皮为芸香科黄皮属植物。主要分布于我国南方各省，其果实有消食、顺气等功效，根、叶和果核具有行气、消滞、解表、止痛和化痰等功效，所含化学成分主要包括香豆素类、咔唑生物碱类、酰胺类和萜类等化合物，其生物活性主要包括抗菌、抗肿瘤、抗疟、保肝、抗血小板凝聚及降血脂等。由于黄皮具有重要的药用价值，因此，国内外对黄皮的研究从未间断过，泰国Mae Fah Luang University的Wisanu Maneerat和中国台湾成功大学的吴天赏对黄皮的化学成分进行了较为系统的研究，报道了一系列咔唑生物碱、香豆素以及苯环衍生物等。从上世纪80年代开始，中国医学科学院北京协和医学院药物研究所的黄量院士课题组曾对黄皮中黄皮酰胺及其生物活性方面进行了深入的研究，还完成了黄皮酰胺的全合成。中国台湾学者De
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Yang Shen、泰国学者Uraiwan Songsiang、中国医学科学院北京协和医学院的Hang Liu及江西农业大学的彭文文等先后对黄皮植物的化学成分及药理活性进行了研究，也报道了一系列咔唑生物碱、酰胺、香豆素等化学成分及这些化合物的抗肿瘤、神经保护、抗菌等活性。以上所述研究主要是针对黄皮的医药活性，而黄皮的农用活性方面的研究并不多见。虽然关于黄皮抑菌活性的研究，到目前为止，取得了一定的进展，但是多数还是集中在粗提物水平上，具体到化合物水平上，目前也只有大家所熟知的(E)
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N
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苯乙基肉桂酰胺。黄皮植物中生物碱的种类很多，含量也比较大，有必要对其农业抑菌活性进行系统的研究和评价，挖掘出具有更高活性的化学成分，这将对更好的开发和利用黄皮起到非常积极的作用。
[0004]黄皮植物中的生物碱主要包括咔唑类和酰胺类，黄皮植物的根、茎、叶、果实、种子中均有这两类生物碱的分布，极性多为中等偏小，又因其存在大的共轭体系，黄皮生物碱都具有较强的紫外吸收。此外，咔唑生物碱还具有明显的薄层色谱(TLC)显色特点，在5
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10％硫酸
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无水乙醇显色剂下加热，化合物显色为淡蓝色斑点。以上特点可在黄皮生物碱分离纯化中加以充分利用。迄今为止，对黄皮生物碱提取分离的方法概括起来主要有以下三种：(1) 采用正己烷回流提取，经TLC检测，再经硅胶反复柱层析得到黄皮生物碱，其缺点在于提取不充分，容易漏掉微量的生物碱；(2)采用石油醚和乙酸乙酯分别提取，经氯仿和乙酸乙酯分别萃取，再经反复硅胶柱层析得到生物碱，其缺点是仅用单一的正相分离材料，未使
用反相等材料，容易造成样品的损失；(3)采用丙酮或甲醇回流提取，再经硅胶柱层析和TLC制备薄层板进行分离，其缺点是制备薄层板只适合微量成分的分离，不适用于大量成分。以上提取分离方法都是建立在对黄皮植物中生物碱结构新颖性和多样性的系统研究上，侧重点在于黄皮生物碱的结构，活性成分分离的针对性不强；且分离方法中主要使用硅胶材料，很少用到MCI及反相材料等，容易造成样品的损失和活性成分的离散；此外，检测方法比较单一，主要依靠TLC 检测，其灵敏度不高，微量成分容易漏检。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种新的抑菌活性黄皮生物碱制备方法，含有提取、检测、富集、活性追踪分离步骤，针对性强，可控性和重现性好，目标成分不易离散和损失，杂质少，操作简便，适应于工业生产。另外，采用本专利技术制备方法制备所得的黄皮生物碱具有较强的抑制轮纹病菌活性作用。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种黄皮生物碱的制备方法，包括如下步骤：将黄皮茎叶与甲醇混合回流提取，减压浓缩得到甲醇浸膏；将甲醇浸膏进行酸提碱沉得到黄皮总生物碱和非生物碱部分，对黄皮总生物碱部分进行硅胶柱层析粗分离，得到各次级部分，对以上各部分分别进行抑制轮纹病原菌活性测试后，对活性较强的次级部分进行TLC检测和活性追踪分离，并结合MCI柱层析和RP
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18柱层析分离方法对活性生物碱进行分离，最后采用HPLC分离纯化得到活性黄皮生物碱成分。
[0008]优选的，所述酸为体积分数为4
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6％的盐酸，所述甲醇浸膏与盐酸的质量体积比为1:8
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1:10。
[0009]优选的，所述碱沉为用氨水调节pH至9
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10。
[0010]优选的，所述黄皮生物碱成分为mafaicheenamine E、murrayanine、 3
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formyl
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methoxycarbazole、claulansine A和lansiumamide C。
[0011]优选的，所述MCI柱层析的洗脱剂为甲醇与水的体积比为20:80、40:60、 60:40、80:20、90:10、100:0进行梯度洗脱。
[0012]本专利技术还提供了上述制备方法制备所得的黄皮生物碱中的至少一种及其盐在制备抑制轮纹病菌活性产品中的应用。
[0013]优选的，所述产品包括农药、生长抑制剂。
[0014]优选的，所述轮纹病包括苹果、梨轮纹病。
[0015]本专利技术还提供了一种抑制轮纹病菌活性的农药，所述农药包括上述制备方法制备所得的黄皮生物碱中的至少一种或其农药学上容许的盐或可接受的载体。
[0016]优选的，所述轮纹病包括苹果、梨轮纹病。
[0017]本专利技术的有益效果：
[0018]本专利技术利用甲醇先粗提取，再利用酸提碱沉的方法对总生物碱进行提取和富集，再利用TCL特征性检测、富集和活性筛选相结合的方法进行抑菌活性生物碱的追踪分离，并成功地利用现代色谱技术对黄皮茎叶中的色素等杂质进行去除。本专利技术提供的提取分离方法针对性强、可控性和重现性好，活性成分不容易离散和损失，成本较低，除杂效果好，操作简便，适用于工业生产。而且经本专利技术制备方法制备所得的黄皮生物碱类化合物对梨轮纹
病菌的生长具有较强的抑制活性，目前尚未有文献报道。
附图说明
[0019]图1为本专利技术黄皮植物茎叶中抑菌生物碱制备方法的流程图。
具体实施方式
[0020]本专利技术提供了一种黄皮生物碱的制备方法，包括如下步骤：将黄皮茎叶与本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种黄皮生物碱的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将黄皮茎叶与甲醇混合回流提取，减压浓缩得到甲醇浸膏；将甲醇浸膏进行酸提碱沉得到黄皮总生物碱和非生物碱部分，对黄皮总生物碱部分进行硅胶柱层析粗分离，得到各次级部分，对以上各部分分别进行抑制轮纹病原菌活性测试后，对活性较强的次级部分进行TLC检测和活性追踪分离，并结合MCI柱层析和RP
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18柱层析分离方法对活性生物碱进行分离，最后采用HPLC分离纯化得到活性黄皮生物碱成分。2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述酸为体积分数为4
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6％的盐酸，所述甲醇浸膏与盐酸的质量体积比为1:8
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1:10。3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述碱沉为用氨水调节pH至9
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10。4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述黄皮生物碱成分为mafaicheenamine E、murrayanine、3
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【专利技术属性】
技术研发人员：彭文文，傅小香，刘欣媛，章宇微，黄英金，曹端韬，
申请(专利权)人：江西农业大学，
类型：发明
国别省市：