脂质纳米颗粒在淋巴系统成像中的应用技术方案

本发明专利技术涉及一种包含脂质纳米颗粒和多个吲哚菁绿ICG的组合物在淋巴系统成像中的应用，脂质纳米颗粒含有脂质膜且纳米颗粒的平均尺寸为20nm至100nm，其中，所述多个吲哚菁绿100%嵌入在所述脂质膜内。100%嵌入在所述脂质膜内。100%嵌入在所述脂质膜内。

【技术实现步骤摘要】
脂质纳米颗粒在淋巴系统成像中的应用
[0001]本申请是申请号为2015104045345、申请日为2015年7月10日、专利技术名称为“脂质纳米颗粒及其应用”的中国专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及包含诸如吲哚菁绿(ICG)之类的染料的脂质纳米颗粒的制备和使用，用于增强吲哚菁绿近红外荧光成像的强度和分辨率，并用于体内正常或异常组织和细胞的显影及诊断。

技术介绍

[0003]为了对疾病进行有效治疗和诊断，能够对受影响的器官进行成像是比较有利的。目前在本领域中已有多种被广泛使用的成像技术；然而，这些技术往往不具有通用性或者缺乏能够识别脉管系统或淋巴系统的对比度。一种研究这些系统的新兴技术是光成像技术，其被称为近红外荧光(NIRF)成像(～700
‑
900nm)，该技术因不涉及电离辐射而具有非常高的安全性，具有最小的来自血液和组织自体荧光(～500
‑
600nm)(即，背景信号/荧光)的干扰，并且是无创的。荧光成像方法涉及使用光线激发荧光染料并且检测从染料中发射出的荧光，该荧光成像方法被广泛用于各种类型的生物成像。该方法用于血管造影术，并且可用于手术过程中对血管功能和/或肿瘤转移的评估。不像其他技术那样，NIRF成像还具有使淋巴系统成像的能力，这为临床医师提供了关于患者体内淋巴结构和功能的重要信息。尽管如此，NIRF成像由于无法使深层组织成像(因光散射问题仅能使～1cm深度的组织成像)而面临很多问题。
[0004]ICG是临床上NIRF成像中所使用的染料(具有820nm发射波长)并且是美国食品与药品管理局(FDA)和欧洲药物管理局(EMA)唯一批准的用于人体的NIRF分子。ICG被批准用于心输出量、肝脏功能和肝脏血流检测，以及眼部血管造影术。ICG存在着大量的标签外和以研究为目的的使用情况，包括液体填充的解剖学结构(例如，血液、脑脊液、淋巴或尿液)的可视化，或作为对比剂用于血管、肾脏或其它排泄途径的显影(1)。在水性环境中，ICG分子聚集并且ICG荧光强度容易衰减(降低整体荧光强度)(2
‑
5)。在血液中，ICG与血浆蛋白结合，部分且暂时地改善了其荧光强度，但是最终仍然会与血浆蛋白解离进入水相环境中被降解。在体内，ICG荧光强度和持续时间可随血浆蛋白和脂蛋白浓度的波动以及个体之间的差异而发生变化。
[0005]最近关于具有多种不同的生理化学性质的ICG和脂质体的报道描述了将ICG包裹在脂质体内的资源密集型制备步骤(≥4个步骤)(8
‑
12)。然而，这些具有不同组成的脂质体是在没有完全理解ICG和脂质之间的相互作用的条件下制备的。在一些条件下，当ICG包裹在脂质体的水性腔室内时，ICG可能部分或通过物理键的形式与脂类分子膜发生相互作用。根据这些方法结合的脂质
‑
ICG以及脂质
‑
ICG组合物是不完全且不稳定的。这些制剂不以使ICG插入或嵌入脂质中为目的，从而导致ICG脂质体组合物无论在产品稳定性还是在真正有效被稳定组装的ICG分子数目上均存在着很大的变异度，并且在其用作成像产品方面的结
果也各不相同。而且，哪怕仅一部分ICG可能被包裹进入脂质体的水性腔室，也需要在制备过程中除去游离的ICG，该步骤会增加潜在的污染，并且由于损耗和分离过程而增加成本。
[0006]本领域亟需对ICG递送系统进行改善。

技术实现思路

[0007]一方面，本专利技术提供一种组合物，其包含(i)含有脂质膜和水性核的脂质纳米颗粒，以及(ii)多个吲哚菁绿(ICG)，其中，ICG中的一个或多个嵌入所述脂质膜中。
[0008]在一些实施方式中，脂质分子包含1,2
‑
二硬脂酰基
‑
sn
‑
丙三基
‑3‑
磷酸胆碱(1,2
‑
distearoyl
‑
sn
‑
glycero
‑3‑
phosphocholine，DSPC)和1,2
‑
二硬脂酰基
‑
sn
‑
丙三基
‑3‑
磷酸乙醇胺
‑
N
‑
甲氧基
‑
聚乙二醇
‑
2000(1,2
‑
distearoyl
‑
sn
‑
glycero
‑3‑
phosphoethanolamine
‑
N
‑
methoxy
‑
polyethylene glycol
‑
2000，DSPEmPEG2000)。
[0009]在一些实施方式中，至少约95％的ICG嵌入脂质膜中。在一些实施方式中，至少约99％的ICG嵌入脂质膜中。在一些实施方式中，基本约100％的ICG嵌入脂质膜中。
[0010]在一些实施方式中，脂质纳米颗粒悬浮于盐组合物中，所述盐组合物包含生物相容性缓冲液，例如，pH为5
‑
8且渗透压为约303mOSM的生物相容性缓冲液。这些缓冲液的实例包括生理盐水，林格氏溶液，5％葡萄糖水溶液或0.9％NaCl和约20mM NaHCO3的缓冲液。
[0011]在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸是50nm至100nm。
[0012]在一些实施方式中，纳米颗粒表面带有负电荷。
[0013]在一些实施方式中，纳米颗粒在血清中稳定，并且，在25℃下，在热灭活的大鼠血清中六小时后保留所述纳米颗粒的初始荧光的约90％至约100％。
[0014]在一些实施方式中，所述纳米颗粒的荧光强度是水性溶液中游离ICG的荧光强度的4倍至5倍。
[0015]在一些实施方式中，在4℃下储存0至约300天之后，所述纳米颗粒的荧光强度是水性溶液中游离ICG的荧光强度的4倍至100,000倍。
[0016]在一些实施方式中，所述组合物在低于约0.5mg/kg体重的ICG剂量条件下有效。在一些实施方式中，所述组合物在约0.01mg/kg体重的ICG剂量条件下有效。
[0017]另一方面，本专利技术提供一种试剂盒，所述试剂盒包含本文提供的组合物/LNP以及任选地包含如何使用所述试剂盒的说明书。
[0018]又一方面，本专利技术提供一种使受治者体内的组织或器官成像的方法，所述方法包括：将适量的本文提供的组合物给药于需要进行成像的受治者，获取所述受治者的组织或器官的图像。
[0019]在一些实施方式中，所述组合物的给药途径选自全身给药和局部给药，其中，所述全身给药包括血管内注射，所述局部给药包括皮下注射、皮内注射、粘膜下注射、浆膜下注射、肿瘤内注射、肌肉内注射、口服、经鼻给药和肿瘤内注射。在本专利技术优选的实施方式中，在通过血管内注射的方式给药的情况下，所述组合物的量等于约0.01mg/kg体重ICG剂量至约0.5mg/kg体重IC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包含脂质纳米颗粒和多个吲哚菁绿ICG的组合物在淋巴系统成像中的应用，其特征在于，所述脂质纳米颗粒含有脂质膜且纳米颗粒的平均尺寸为20nm至100nm，其中，所述多个吲哚菁绿100%嵌入在所述脂质膜内。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述纳米颗粒的平均尺寸为50nm至100nm，特别优选为50nm至80nm。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述纳米颗粒悬浮于pH为5
‑
8且渗透压为303mOSM的生物相容性缓冲液中；和/或，所述纳米颗粒表面具有负电荷；和/或，所述纳米颗粒在血清中稳定，在25℃下热灭活的血清中6小时后保留其初始荧光的90%至100%；和/或，所述纳米颗粒的荧光强度是水溶液中游离吲哚菁绿的荧光强度的4倍至5倍；和/或，在储存于4℃下0至300天之后，所述纳米颗粒的荧光强度是水溶液中游离吲哚菁绿的荧光强度的4倍至100,000倍；和/或，所述纳米颗粒可穿透1.5cm的肌肉组织；和/或，将所述组合物应用于受治者体内淋巴脉管系统、初级淋巴结、二级淋巴组织、三级淋巴组织的成像；和/或，所述组合物在低于约0.5mg/kg体重的ICG剂量条件下有效；和/或，所述组合物在约0.01mg/kg体重的ICG剂量条件下有效；和/或，局部单点注射量等于约0.1ng至约0.1mg ICG剂量下有效。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述组合物由如下步骤制备并且不包括过滤步骤、纯化步骤或分离步骤：（a）在有机溶剂中混合吲哚菁绿和脂质分子；（b）蒸发所述有机溶剂以形成包含所述脂质分子和吲哚菁绿的薄膜；以及（c）用缓冲盐水水合所述薄膜并减小粒度；（d）在步骤（c）之后进行超声波浴处理使所述脂质纳米颗粒粒度降低至50
‑
80nm。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述脂质分子由1,2
‑
二硬脂酰基
‑
sn
‑
丙三基
‑3‑
磷酸胆碱DSPC、1,2
‑
二硬脂酰基
‑
sn
‑
丙三基
‑3‑
磷酸乙醇胺
‑
N
‑
甲氧基
‑
聚乙二醇
‑
2000DSPEmPEG2000...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱明心，何仁扬，约翰，
申请(专利权)人：苏州同力生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：