一种抗乙型肝炎病毒e抗原的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及免疫学领域和分子病毒学领域，特别是乙型肝炎病毒的诊断、预防和治疗领域。具体而言，本发明专利技术涉及乙型肝炎病毒e抗原的单克隆抗体，还涉及乙型肝炎病毒e抗原的检测试剂(特别是化学发光法)。剂(特别是化学发光法)。剂(特别是化学发光法)。

【技术实现步骤摘要】
一种抗乙型肝炎病毒e抗原的单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫学领域和分子病毒学领域，特别是乙型肝炎病毒的诊断、预防和治疗领域。具体而言，本专利技术涉及乙型肝炎病毒的单克隆抗体，还涉及乙型肝炎病毒e抗原的检测试剂，特别是化学发光法检测。

技术介绍

[0002]乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，简称HBV)是一种呈世界性分布、危害严重的传染病。目前，乙型肝炎病毒感染已成为世界范围内共同而且重要的公共卫生问题。临床以肝功能异常为主要特征并且伴多样性的临床表现。目前全世界共有3.5亿～4亿慢性HBV感染者，20亿人曾感染HBV，约占全球人口的6％，慢性HBV携带者中有相当一部分发展成为慢性乙型肝炎(CHB)，部分患者发展成为肝硬化患者(HC)、肝细胞癌(HCC)或非致癌性HC并发症，每年因HBV感染而死亡的人数超过110万。
[0003]目前临床上用于检测乙型肝炎的主要血清学指标是乙肝六项即：乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)，乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)，乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)，乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)，乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)及乙型肝炎病毒核心IgM抗体(HBcAb-IgM)。其中HBsAg是乙型肝炎的早期诊断指标之一，出现于患者血清转氨酶(ALT)升高前2周～8周，至恢复期HBsAg滴度逐渐降低乃至消失，最终产生保护性的HBsAb。HBeAg与HBcAg由同一启动子控制，其表达可能与HBcAg相关进而与HBV的载量相关，故常被作为HBV活跃复制的血清学指标；同时，HBeAg向HBeAb的转化目前是判断抗病毒药物治疗效果的主要指标。
[0004]乙型肝炎病毒e抗原(hepatitis B virus e antigen，HBeAg)是乙型肝炎病毒在人体内复制过程中的一个主要产物，由前c和c基因编码，具有重要的生物学功能。HBeAg是临床判定HBV复制程度及判断慢性乙型肝炎患者预后的重要指标之一，是抗病毒治疗疗效判定的重要依据。HBeAg是乙型肝炎核心抗原的可溶性成分，常常与血清HBV-DNA、DNA.P及Dane颗粒同时存在，为HBV复制和具有传染性的标志，也是急性乙型肝炎发展为慢性的重要指标。
[0005]目前国内外的用于检测HBeAg的试剂都是针对1-149aa表位的抗体，对HBcAg存在一定的交叉反应，对于HBeAg的终点判断有一定的限制作用。
[0006]开发一种简单、准确的HBeAg发光检测试剂在HB患者抗病毒疗效及病程预后方面都有迫切的现实意义以及对于抗病毒药物的筛选也提供了一种评估手段。

技术实现思路

[0007]本专利技术的第一个方面提供了针对乙型肝炎病毒e抗原的单克隆抗体抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合乙型肝炎病毒e抗原的-10至-1位氨基酸表位。
[0008]优选地，所述抗体包含分别如SEQ ID NO:1-3所示的重链CDR序列CDR1-3；和SEQ ID NO:4-6所示的轻链CDR序列CDR1-3。
[0009]更优选地，所述抗体包含如SEQ ID NO:7所示的重链可变区序列和SEQ ID NO:8所示的轻链可变区序列。
[0010]在优选的实施方式中，本专利技术的单克隆抗体是于2019年11月28日保藏于中国典型培养物保藏中心(中国，武汉，武汉大学)的杂交瘤细胞株16D9分泌的单克隆抗体，该杂交瘤细胞株的保藏编号为C2019301。
[0011]在另一个方面，本专利技术提供了一种分离的核酸分子，其包含编码本专利技术的抗体或其抗原结合片段，或其重链可变区和/或轻链可变区的核苷酸序列。在某些优选的实施方案中，所述分离的核酸分子编码本专利技术的抗体或其抗原结合片段，或其重链可变区和/或轻链可变区。
[0012]在另一个方面，本专利技术提供了一种载体(例如克隆载体或表达载体)，其包含本专利技术的分离的核酸分子。在某些优选的实施方案中，所述载体能够在受试者(例如哺乳动物，例如人)体内表达本专利技术的抗体或其抗原结合片段。
[0013]在另一个方面，本专利技术提供了一种宿主细胞，其包含本专利技术的分离的核酸分子或本专利技术的载体。此类宿主细胞包括但不限于，原核细胞例如大肠杆菌细胞，以及真核细胞例如酵母细胞，昆虫细胞，植物细胞和动物细胞(如哺乳动物细胞，例如小鼠细胞、人细胞等)。在某些优选的实施方案中，本专利技术的宿主细胞是哺乳动物细胞。
[0014]本专利技术的抗体或其抗原结合片段能够特异性结合乙型肝炎病毒e抗原，从而可用于检测乙型肝炎病毒e抗原在样品中的存在或其水平。
[0015]因此，在另一个方面，本专利技术提供了一种试剂盒，其包括本专利技术的抗体或其抗原结合片段。在某些优选的实施方案中，本专利技术的抗体或其抗原结合片段带有可检测的标记。在本专利技术中，所述可检测的标记可以是可通过荧光、光谱、光化学、生物化学、免疫学、电学、光学或化学手段检测的任何物质。特别优选的是，此类标记能够适用于免疫学检测(例如，酶联免疫测定法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法、化学发光免疫测定法等)。这类标记是本领域熟知的，包括但不限于，酶(例如，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、脲酶、葡萄糖氧化酶，等)、放射性核素(例如，3H、125I、35S、14C或32P)、荧光染料(例如，异硫氰酸荧光素(FITC)、荧光素、异硫氰酸四甲基罗丹明(TRITC)、藻红蛋白(PE)、德克萨斯红、罗丹明、量子点或花菁染料衍生物(例如Cy7、Alexa 750))、发光物质(例如化学发光物质，如吖啶酯类化合物)、磁珠(例如，)、测热标记物例如胶体金或有色玻璃或塑料(例如，聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶，等)珠、以及用于结合上述标记物修饰的亲和素(例如，链霉亲和素)的生物素。教导该标记物的使用的专利包括，但不限于，美国专利3,817,837；3,850,752；3,939,350；3,996,345；4,277,437；4,275,149；及4,366,241(全部通过引用并入本文)。本专利技术中涵盖的标记物可通过本领域已知的方法检测。例如，放射性标记可使用摄影胶片或闪烁计算器检测，荧光标记物可使用光检测器检测，以检测发射的光。酶标记物一般通过给酶提供底物及检测通过酶对底物的作用产生的反应产物来检测，及测热标记物通过简单可视化着色标记物来检测。在某些实施方案中，可通过不同长度的接头将如上所述的可检测的标记连接至本专利技术的抗体或其抗原结合片段，以降低潜在的位阻。
[0016]在另一个方面，本专利技术提供了检测乙型肝炎病毒e抗原在样品中的存在或其水平的方法，其包括使用本专利技术的抗体或其抗原结合片段的步骤。在一个优选的实施方案中，本专利技术的抗体或其抗原结合片段还带有可检测的标记。在另一个优选的实施方案中，所述方
法还包括，使用带有可检测的标记的试剂来检测本专利技术的抗体或其抗原结合片段。所述方法可以用于诊断目的，或者非诊断目的(例如，所述样品是细胞样品，而非来自患者的样品)。
[0017]在另一个方面，提供了本专利技术的抗体或其抗原结合片段在制备试剂盒中的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与乙型肝炎病毒e抗原-10至-1位氨基酸特异性结合的单克隆抗体，其中所述抗体与CGMCC保藏编号为C2019301的杂交瘤产生的抗体16D9特异性结合相同的乙型肝炎病毒e抗原表位。2.一种与乙型肝炎病毒e抗原特异性结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含CGMCC保藏编号为C2019301的杂交瘤产生的抗体16D9的轻链可变区互补决定区(CDR)和重链可变区CDR。3.一种与乙型肝炎病毒e抗原特异性结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO：4的氨基酸序列的CDR1、具有SEQ ID NO：5的氨基酸序列的CDR2和具有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的CDR3，所述重链可变区包含具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的CDR1、具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的CDR2和具有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的CDR3。4.权利要求3的单克隆抗体，其中所述抗体包含：(a)具有SEQ ID NO：8的氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的重链可变区。5.一种与乙型肝炎病毒e抗原特异性结合的单克隆抗体，其中所述抗体包含抗原结合区，所述抗原结合区来源于CGMCC保藏编号为C2019301的杂交瘤产生的抗体16D9的轻链和重链可变区。6.权利要求1-5任一项的单克隆抗体，其是抗原结合片段、单链抗体、嵌合抗体、单价抗体、多特异性抗体、人抗体或Fab片段。7.一种与乙型肝炎病毒e抗原特异性结合的单克隆抗体，其中所述抗体获自CGMCC保藏编号为C2019301的杂交瘤。8.CGMCC保藏编号为C2019301的杂交瘤细胞株。9.编码权利要求1-7中任一项的抗体的重链可变区和/或轻链可变区的多核苷酸。10.一种包括权利要求9的多核苷酸的载体。11.一种包括权利要求9的多...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈自敏，王邵娟，刘嘉祺，熊君辉，袁权，葛胜祥，宋浏伟，孙旭东，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：