一种包含IL-15阳离子脂质体复合物和塞来昔布脂质体的药物组合物及其制备方法和用途技术

本发明专利技术属于医药领域，具体涉及一种包含IL

【技术实现步骤摘要】
一种包含IL
‑
15阳离子脂质体复合物和塞来昔布脂质体的药物组合物及其制备方法和用途


[0001]本专利技术属于医药
，具体地涉及一种包含IL
‑
15阳离子脂质体复合物和塞来昔布脂质体的药物组合物及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]肿瘤免疫疗法是继手术、放疗和化疗之后的一种新的肿瘤治疗策略。其中，基于NK
‑
细胞的免疫治疗技术受到了越来越多的关注。NK
‑
细胞的作用是识别与溶解肿瘤细胞和病毒感染细胞，同时产生免疫调节性细胞因子两大主要功能，是人体抗感染、防自噬和阻止细胞恶性分化的重要免疫调节细胞。肿瘤患者的外周血中NK
‑
细胞的数量和活性明显下降，则若能促进NK
‑
细胞的增殖与活化，产生更多细胞杀伤肿瘤细胞，就能更好地发挥固有免疫抗肿瘤的作用。目前，利用NK
‑
细胞进行免疫治疗有多种策略，但最直接的方案是直接激活NK
‑
细胞使其产生杀伤肿瘤细胞的作用，细胞因子一般用于扩增过继转移的NK
‑
细胞，IL
‑
2是临床应用最广泛的细胞因子。然而，IL
‑
2能够激活Treg细胞，Treg细胞会通过产生免疫抑制细胞因子TGF
‑
β等来阻碍NK
‑
细胞发挥活性。相比之下，IL
‑
15不仅不会激活Treg细胞，而且提供了刺激NK
‑
细胞和细胞毒性CD8+T细胞的额外优势，是更好的选择。
[0003]塞来昔布是一种特定的环氧合酶2(COX
‑
2)抑制剂，具有非甾体抗炎的特性，还具有抗肿瘤特性潜在的机制。此外，COX抑制剂可以抑制免疫逃逸的作用从而降低恶性肿瘤的风险。在肿瘤中运用COX1/2抑制剂如塞来昔布能够显著地通过IFN
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γ、TNF
‑
α上调CXCL9/10在肿瘤组织的分泌量，从而大大提高NK
‑
细胞的浸润。但是塞来昔布的水溶性差是常规化疗的一个最主要问题，塞来昔布会在胃肠道的溶解，使得这类药物的口服生物利用度较低。
[0004]近年来，以阳离子脂质体为主的非病毒载体系统因其制备简便、无目的基因大小限制性、免疫原性低等优点，在基因治疗研究中受到越来越多研究者的青睐，已有大量的文献报导该转导系统介导外源基因的转染，很大程度地提高基因治疗的效果。虽然如此，但是阳离子脂质体仍存在稳定性较差、转染效率低、阻断部分免疫吞噬，易被生物酶降解和被pH环境破坏低肿瘤靶向性等特点，这限制了阳离子脂质体的广泛应用。因此，亟需开发出一种安全性高、靶向性好、转染效率高、稳定性好的用于激活较强的NK免疫作用的方法。
[0005]由上述分析可知，IL
‑
15、塞来昔布以及阳离子脂质体非病毒载体系统在治疗肿瘤中各具特色，也各有缺陷，似乎将其结合在一起使用在抗肿瘤方面能够产生更大获益，但遗憾的是现有技术中并没有将塞来昔布脂质体和IL
‑
15阳离子脂质体复合物组合在一起用于NK免疫激活的教导，更没有将这两者组合使用来治疗肿瘤的教导。

技术实现思路

[0006]为了解决上述技术问题，克服现有技术中存在的缺陷，本专利技术提供了一种包含IL
‑
15阳离子脂质体复合物和塞来昔布脂质体的药物组合物及其制备方法和用途，其能够增强自身固有免疫抗肿瘤的效果。
[0007]具体地，通过以下几个方面的技术方案实现了本专利技术：
[0008]在第一个方面中，本专利技术提供了一种用于NK免疫激活的药物组合物，所述药物组合物包含IL
‑
15阳离子脂质体复合物和塞来昔布脂质体，
[0009]其中，所述IL
‑
15阳离子脂质体复合物由以下原料制备而成：pcDNA3.1/IL
‑
15、pDsRed
‑
M
‑
N1、大肠杆菌DH5α新鲜感受态菌液、DSPE
‑
PEG
2000
‑
NH2、NHS、DOTAP、叶酸(FA)、基本材料磷脂、PEG修饰磷脂和胆固醇；
[0010]所述塞来昔布脂质体由以下原料制备而成：基本材料磷脂、塞来昔布和胆固醇；以及
[0011]所述pcDNA3.1/IL
‑
15和所述塞来昔布脂质体的质量比为1：(4
‑
40)；
[0012]优选地，所述质量比可以是1：(4
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30)、1：(4
‑
25)、1：(4
‑
20)、1：(4
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15)或1：(4
‑
10)，或者所述质量比可以是由上述数值范围中的任何整数所限定的范围。
[0013]作为可选方式，在上述药物组合物中，对于制备所述IL
‑
15阳离子脂质体复合物而言，所述基本材料磷脂为大豆卵磷脂、氢化卵磷脂或人工合成卵磷脂中的一种或两种，优选为纯度>95％的大豆卵磷脂；
[0014]所述DOTAP为(2,3
‑
二油氧基丙基)三甲基氯化铵；
[0015]所述PEG修饰磷脂为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇2000；
[0016]靶向磷脂为叶酸PEG化修饰的磷脂(磷脂聚乙二醇叶酸)；
[0017]DOTAP：基本材料磷脂：胆固醇质量比为8：(2
‑
5)：1；
[0018]所述基本材料磷脂与有机溶剂的质量体积比为20mg：(1
‑
2)mL；
[0019]DSPE
‑
PEG
2000
‑
NH2与FA
‑
COOH的摩尔比为(2
‑
4)：1；
[0020]对于制备所述塞来昔布脂质体而言，所述基本材料磷脂为大豆卵磷脂、氢化卵磷脂或人工合成卵磷脂中的一种或两种，优选为纯度>95％的大豆卵磷脂；
[0021]所述原料中，塞来昔布：基本材料磷脂：胆固醇的质量比为1：(10
‑
20)：2，优选为1：16：2。
[0022]在第二个方面中，本专利技术提供了上述第一个方面所述的药物组合物的制备方法，所述IL
‑
15阳离子脂质体复合物的制备方法包括以下步骤：
[0023](1)提取质粒DNA：
[0024]将pcDNA3.1/IL
‑
15、pDsRed
‑
M
‑
N1质粒分别加入到含有100μL大肠杆菌DH5α新鲜感受态菌液中，进行细菌的转化，取100μL转化pDsRed
‑
M
‑
N1质粒的菌液均匀涂布于含有50μg/mL卡那霉素(Kan)的选择平板上，取10本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于NK免疫激活的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物包含IL
‑
15阳离子脂质体复合物和塞来昔布脂质体，其中，所述IL
‑
15阳离子脂质体复合物由以下原料制备而成：pcDNA3.1/IL
‑
15、pDsRed
‑
M
‑
N1、大肠杆菌DH5α新鲜感受态菌液、DSPE
‑
PEG
2000
‑
NH2、NHS、DOTAP、叶酸(FA)、基本材料磷脂、PEG修饰磷脂和胆固醇；所述塞来昔布脂质体由以下原料制备而成：基本材料磷脂、塞来昔布和胆固醇；以及所述pcDNA3.1/IL
‑
15和所述塞来昔布脂质体的质量比为1：(4
‑
40)。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：对于制备所述IL
‑
15阳离子脂质体复合物而言，所述基本材料磷脂为大豆卵磷脂、氢化卵磷脂或人工合成卵磷脂中的一种或两种，优选为纯度>95％的大豆卵磷脂；所述DOTAP为(2,3
‑
二油氧基丙基)三甲基氯化铵；所述PEG修饰磷脂为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇2000；靶向磷脂为叶酸PEG化修饰的磷脂(磷脂聚乙二醇叶酸)；DOTAP：基本材料磷脂：胆固醇质量比为8：(2
‑
5)：1；所述基本材料磷脂与有机溶剂的质量体积比为20mg：(1
‑
2)mL；DSPE
‑
PEG
2000
‑
NH2与FA
‑
COOH的摩尔比为(2
‑
4)：1；对于制备所述塞来昔布脂质体而言，所述基本材料磷脂为大豆卵磷脂、氢化卵磷脂或人工合成卵磷脂中的一种或两种，优选为纯度>95％的大豆卵磷脂；所述原料中，塞来昔布：基本材料磷脂：胆固醇的质量比为1：(10
‑
20)：2，优选为1：16：2。3.权利要求1或权利要求2所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述IL
‑
15阳离子脂质体复合物的制备方法包括以下步骤：(1)提取质粒DNA：将pcDNA3.1/IL
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15、pDsRed
‑
M
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N1质粒分别加入到含有100μL大肠杆菌DH5α新鲜感受态菌液中，进行细菌的转化，取100μL转化pDsRed
‑
M
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N1质粒的菌液均匀涂布于含有50μg/mL卡那霉素(Kan)的选择平板上，取100μL转化pcDNA3.1/IL
‑
15质粒的菌液均匀涂布于含有50μg/mL氨苄青霉素(Amp)的培养基中，然后在37℃条件下倒置培养12
‑
16h，分别从选择平板上挑取一个pc DNA3.1/IL
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15、pDsRed
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M
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N1的DH5α单菌落，进行培养增殖，提取质粒DNA，将新鲜提取的质粒DNA放在4℃冰箱保存；(2)DSPE
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PEG
2000
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FA的合成：称取适量DSPE
‑
PEG
2000
‑
NH2和FA
‑
COOH，将叶酸(FA)溶解在5mL DMSO中，待完全溶解后加入适量NHS和EDC，再加入1mL三乙胺，在磁力搅拌器上室温条件下搅拌2h，向圆底烧瓶中加入适量的DSPE
‑
PEG
2000
‑
NH2，继续室温、氮气保护下反应20h以上；(3)阳离子脂质体的制备：将8mg DOTAP，2mg大豆磷脂，1mg胆固醇和1mg DSPE
‑
PEG
2000
‑
FA，加入有机溶剂振荡至完全溶解，之后37℃真空旋转蒸发，去除有机溶剂，使溶液在瓶壁上形成均匀的薄膜层，待全部成膜之后，加入Hepes缓冲液，然后进行水化，取出混悬液，用探头超声细胞粉碎仪200W超声处理3min后过0.2μm微孔滤膜进行整粒，即得叶酸PEG修饰的阳离子脂质体溶液(FPCL)，4℃储存，使用相同方法制备普通阳离子脂质体和DSPE
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PEG
2000
修饰的阳离子脂质体溶液；
(4)灭菌磷酸盐缓冲液的制备：称取8g NaCl，0.2gKCl，3.58g...

【专利技术属性】
技术研发人员：江芷萱，宋宝慧，常爽，胡海洋，陈大为，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：