一种糖类化合物中苯胺残留的高效液相色谱检测方法技术

本发明专利技术公开了一种糖类化合物中苯胺残留的高效液相色谱检测方法，采用C18色谱柱和DAD检测器，流动相A是乙酸铵水溶液，流动相B为乙腈，并采用梯度洗脱；本发明专利技术先对糖类化合物中的残留的苯胺进行萃取，且萃取剂能进一步起到抑制苯胺与糖类化合物之间的缩合反应，使萃取剂萃取的苯胺的量，更准确地体现出糖类化合物中所含的苯胺的量；使用高效液相色谱法能快速、准确、定量的测出苯胺的量。经方法学验证，本发明专利技术定量限满足残留量指标要求，峰型良好，分离效果好，精密度高，稳定性好，回收率高。回收率高。

【技术实现步骤摘要】
一种糖类化合物中苯胺残留的高效液相色谱检测方法


[0001]本专利技术涉及药物分析
，特别涉及一种糖类化合物中苯胺残留的高效液相色谱检测方法。

技术介绍

[0002]苯胺是一种潜在的基因毒性杂质(PGI,potentially genotoxic impurity)，因此，在药物中需要对其残留量进行严格管控，对于注射制剂的药物，其残留量的指标甚至低于5ppm，苯胺的结构式如式I所示。
[0003][0004]目前，现有技术中，对苯胺残留的测定方法有很多中，例如采用气质联用、液质联用等，这些方法对仪器性能的要求很高，但测试的精密度和重复性又存在较大的缺陷，且耗时较长，因此，亟需开发新的测定方法。
[0005]针对糖类化合物中苯胺残留的测定又存在一定的特殊性，因为糖类化合物中一般都带有醛基，室温条件下，糖类化合物的醛基与苯胺的氨基发生缩合反应(反应式如式II所示)，导致糖类化合物中苯胺含量降低，进而导致用常规方法所测得的糖类化合物中的苯胺含量也会偏低，造成测定结果不准确，不能真实反应糖类化合物中苯胺的含量。
[0006]
技术实现思路

[0007]本专利技术要解决的技术问题是提供一种糖类化合物中苯胺残留的高效液相色谱检测方法，能够快速且准确的检测出糖类化合物中的苯胺残留量，满足对残量指标的要求，且精密度和重复性好，对仪器和方法的要求也较低。
[0008]为解决上述技术问题，本专利技术提供的糖类化合物中苯胺残留的高效液相色谱检测方法，其中：
[0009]色谱柱采用C18色谱柱；
[0010]检测器采用DAD检测器；
[0011]流动相包括流动相A和流动相B；所述流动相A是乙酸铵的水溶液，其中乙酸铵的浓
度为10mmol/L；所述流动相B为乙腈；
[0012]采用梯度洗脱，所述梯度洗脱程序按如下程序进行：流动相A+流动相B＝100％，0
‑
12min，流动相A的体积百分比由90％递减至20％；12
‑
13min，流动相A的体积百分比由20％递增至90％；13
‑
18min，流动相A保持体积百分比为90％。
[0013]为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了一种糖类化合物中苯胺残留量的高效液相色谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
[0014]1)标准对照品溶液制备：称取适量苯胺至含一定量稀释剂的容量瓶中，继续加稀释剂定容并摇匀形成苯胺储备液；移取适量的苯胺储备液至含一定量的稀释剂的容量瓶中，再加入萃取剂定容并摇匀，静置后，得到的上层溶液为标准对照品溶液；
[0015]2)供试品溶液配制：称取适量糖类化合物溶液至容量瓶，加一定量的稀释剂，再加入萃取剂定容并摇匀，静置后，得到的上层溶液为供试品溶液；
[0016]3)色谱条件：
[0017]色谱柱采用C18色谱柱；
[0018]检测器采用DAD检测器；
[0019]流动相包括流动相A和流动相B；所述流动相A是乙酸铵的水溶液，其中乙酸铵的浓度为10mmol/L；所述流动相B为乙腈；
[0020]采用梯度洗脱，所述梯度洗脱程序按如下程序进行：流动相A+流动相B＝100％，0
‑
12min，流动相A的体积百分比由90％递减至20％；12
‑
13min，流动相A的体积百分比由20％递增至90％；13
‑
18min，流动相A保持体积百分比为90％。
[0021]4)测定方法：采用外标法计算出供试品溶液中苯胺的含量。根据标准对照品溶液的浓度、标准对照品溶液和供试品溶液的积分面积计算出供试品溶液中苯胺的含量，具体计算公式如下：
[0022][0023]其中：
[0024]A
STD
表示标准对照品溶液中苯胺的峰面积；
[0025]A
SPL
表示供试品溶液中苯胺的峰面积；
[0026]W
STD
表示标准对照品溶液中苯胺的质量(mg)；
[0027]V
STD
表示标准对照品溶液中苯胺的稀释体积(mL)；
[0028]W
SPL
表示供试品的质量(mg)；
[0029]V
SPL
表示供试品溶液的稀释体积(mL)。
[0030]在一种优选的方案中，所述色谱柱的长度为150mm。
[0031]在一种优选的方案中，其特征在于，所述色谱柱的柱温为20℃
‑
40℃。
[0032]在一种优选的方案中，其特征在于，流速为0.8
‑
1.5mL/min。
[0033]在一种优选的方案中，其特征在于，所述检测器的检测波长为220
‑
240nm。
[0034]在一种优选的方案中，其特征在于，进样量为3
‑
8μL。
[0035]在一种优选的方案中，所述稀释剂为乙腈和水的混合液，其中乙腈和水的体积比为1:9。
[0036]在一种优选的方案中，所述萃取剂为乙酸乙酯。
[0037]在一种优选的方案中，色谱条件中流速为1.0mL/min，检测波长为230nm，柱温为30℃，进样量为5μL。
[0038]本专利技术提供的糖类化合物中苯胺残留的检测方法的优势在于：先对糖类化合物中的残留的苯胺进行萃取，且萃取剂能进一步起到抑制苯胺与糖类化合物之间的缩合反应，使萃取剂萃取的苯胺的量，更准确地体现出糖类化合物中所含的苯胺的量；使用高效液相色谱法能快速、准确、定量的测出苯胺的量。经方法学验证，本专利技术能检测出的苯胺的浓度至少低于2ppm，满足残留量指标低于5ppm的要求；测得的苯胺的拖尾因子0.76，峰型良好；苯胺与其相邻峰的分离度达到2.22，分离效果良好；且在在0.2ug/mL
‑
5ug/mL的范围内，苯胺线性良好，r＝0.9998；该方法精密度高，保留时间RSD％为0.02％；苯胺在回收率溶液中至少26小时稳定，稳定性良好，回收率高。
附图说明
[0039]为了更清楚地说明本专利技术的技术方案，下面对本专利技术所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0040]图1是本专利技术实施例1中得到的标准对照品溶液色谱图；
[0041]图2是本专利技术实施例1中得到的供试品溶液色谱图；
[0042]图3是本专利技术实施例1中得到的空白品溶液色谱图；
[0043]图4是本专利技术实施例2中专属性实验的色谱图；
[0044]图5是本专利技术实施例2中定量限实验的色谱图；
[0045]图6是本专利技术实施例2中回收率实验的色谱图。
具体实施方式
[0046]下面将结合附图，对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种糖类化合物中苯胺残留的高效液相色谱检测方法，其特征在于，采用色谱条件如下：色谱柱采用C18色谱柱；检测器采用DAD检测器；流动相包括流动相A和流动相B；所述流动相A是乙酸铵的水溶液，其中乙酸铵的浓度为10mmol/L；所述流动相B为乙腈；采用梯度洗脱，所述梯度洗脱程序按如下程序进行：流动相A+流动相B＝100％，0
‑
12min，流动相A的体积百分比由90％递减至20％；12
‑
13min，流动相A的体积百分比由20％递增至90％；13
‑
18min，流动相A保持体积百分比为90％。2.一种糖类化合物中苯胺残留量的高效液相色谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：1)标准对照品溶液制备：称取适量苯胺至含一定量稀释剂的容量瓶中，继续加稀释剂定容并摇匀形成苯胺储备液；移取适量的苯胺储备液至含一定量的稀释剂的容量瓶中，再加入萃取剂定容并摇匀，静置后，得到的上层溶液为标准对照品溶液；2)供试品溶液配制：称取适量糖类化合物溶液至容量瓶，加一定量的稀释剂，再加入萃取剂定容并摇匀，静置后，得到的上层溶液为供试品溶液；3)色谱条件：色谱柱采用C18色谱柱；检测器采用DAD检测器；流动相包括流动相A和流动相B；所述流动相A是乙酸铵的水溶液，其中乙酸铵的浓度为10mmol/L；所述流动相B为乙腈；...

【专利技术属性】
技术研发人员：褚乐之，吴丹，鲍华军，叶立文，
申请(专利权)人：泰兴合全药业有限公司泰兴合全生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：