YH66-RS07020基因改造得到的工程菌及其在制备缬氨酸中的应用制造技术

本发明专利技术公开了YH66

【技术实现步骤摘要】
YH66
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RS07020基因改造得到的工程菌及其在制备缬氨酸中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种YH66
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RS07020基因改造得到的工程菌及其在制备缬氨酸中的应用，具体的所述改造为C251T。

技术介绍

[0002]缬氨酸是组成蛋白质的20种氨基酸之一，是人体必需的8种氨基酸和生糖氨基酸，它与其他两种高浓度氨基酸(异亮氨酸和亮氨酸)一起工作促进身体正常生长，修复组织，调节血糖，并提供需要的能量。在参加激烈体力活动时，缬氨酸可以给肌肉提供额外的能量产生葡萄糖，以防止肌肉衰弱。缬氨酸还帮助从肝脏清除多余的氮(潜在的毒素)，并将身体需要的氮运输到各个部位。
[0003]缬氨酸是一种必需氨基酸，这意味着身体本身不能生产，必须通过膳食来源获得补充。它的天然食物来源包括谷物、奶制品、香菇、蘑菇、花生、大豆蛋白和肉类。尽管大多数人都可以从饮食中获得足够的数量，但是缬氨酸缺乏症的案例也屡见不鲜。当缬氨酸不足时，大脑中枢神经系统功能会发生紊乱，共济失调而出现四肢震颤。通过解剖切片脑组织，发现有红核细胞变性现象，晚期肝硬化病人因肝功能损害，易形成高胰岛素血症，致使血中支链氨基酸减少，支链氨基酸和芳香族氨基酸的比值由正常人的3.0
‑
3.5降至1.0
‑
1.5，故常用缬氨酸等支链氨基酸的注射液治疗肝功能衰竭以及酗酒和吸毒对这些器官造成的损害。此外，缬氨酸也可作为加快创伤愈合的治疗剂。L
‑
缬氨酸，别名为2
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氨基
‑3‑
甲基丁酸，CAS号为72
‑
18
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4，MDL号为MFCD00064220，EINECS号为200
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773
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6。目前制备L
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缬氨酸主要是化学合成法。化学合成法的局限性：生产成本高，反应复杂，步骤多，且有许多副产物。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种YH66
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RS07020基因改造得到的工程菌及其在制备缬氨酸中的应用。
[0005]本专利技术提供了用于抑制YH66
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RS07020基因表达的物质或降低YH66
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RS07020蛋白丰度的物质或降低YH66
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RS07020蛋白活性的物质的应用；
[0006]所述应用为如下(Ⅰ)或(Ⅱ)或(Ⅲ)：
[0007](Ⅰ)在提高细菌缬氨酸产量中的应用；
[0008](Ⅱ)在生产缬氨酸中的应用；
[0009](Ⅲ)在提高细菌菌量中的应用。
[0010]所述YH66
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RS07020基因为编码YH66
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RS07020蛋白的基因。
[0011]所述YH66
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RS07020蛋白为如下(a1)或(a2)或(a3)：
[0012](a1)序列表的序列3所示的蛋白质；
[0013](a2)来源于细菌且与(a1)具有95％以上同一性且与细菌产缬氨酸相关的蛋白质；
[0014](a3)将(a1)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添
加得到的且与细菌产缬氨酸相关的由(a1)衍生的蛋白质。
[0015]这里使用的术语“同一性”指与天然氨基酸序列的序列相似性。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。
[0016]所述95％以上同一性具体可为96％以上同一性或97％以上同一性或98％以上同一性或99％以上同一性。
[0017]具体的，所述YH66
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RS07020基因为如下(b1)或(b2)或(b3)：
[0018](b1)编码区如序列表的序列4所示的DNA分子；
[0019](b2)来源于细菌且与(b1)具有95％以上同一性且编码所述蛋白质的DNA分子；
[0020](b3)在严格条件下与(b1)杂交且编码所述蛋白质的DNA分子。
[0021]这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。
[0022]所述95％以上同一性具体可为96％以上同一性或97％以上同一性或98％以上同一性或99％以上同一性。
[0023]所述严格条件可为在0.1
×
SSPE(或0.1
×
SSC)，0.1％SDS的溶液中，在65℃条件下杂交并洗膜。
[0024]所述抑制YH66
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RS07020基因表达可为敲除YH66
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RS07020基因，也可为突变YH66
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RS07020基因。
[0025]示例性的，所述用于抑制YH66
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RS07020基因表达的物质具体可为序列表的序列5所示的DNA分子或具有序列表的序列5所示的DNA分子的重组质粒。
[0026]示例性的，所述用于抑制YH66
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RS07020基因表达的物质具体可为序列表的序列8所示的DNA分子或具有序列表的序列8所示的DNA分子的重组质粒。
[0027]示例性的，所述用于抑制YH66
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RS07020基因表达的物质具体可为实施例中的重组质粒pK18
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YH66
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RS07020
C251T
或重组质粒pK18
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ΔYH66
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RS07020。
[0028]本专利技术还提供了一种重组菌，是抑制细菌中的YH66
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RS07020基因表达得到的。
[0029]所述抑制细菌中的YH66
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RS07020基因表达可为敲除细菌中的YH66
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RS07020基因，也可为突变细菌中的YH66
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RS07020基因。
[0030]所述敲除可为敲除基因的部分区段，也可为敲除基因的整个编码框。
[0031]示例性的，敲除细菌中的YH66
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RS07020基因具体可为：使细菌基因组DNA中缺失序列表的序列4所示的DNA分子。
[0032]对于突变细菌中的YH66
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RS07020基因，本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向突变或基因编辑等。
[0033]示例性的，突变细菌中的YH66
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RS07020基因具体可为：使细菌基因组DNA中编码的YH66
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RS07020蛋白的第84位氨基酸残基的密码子由编码A的密码子突变为编本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于抑制YH66
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RS07020基因表达的物质或降低YH66
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RS07020蛋白丰度的物质或降低YH66
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RS07020蛋白活性的物质的应用；所述应用为如下(Ⅰ)或(Ⅱ)或(Ⅲ)：(Ⅰ)在提高细菌缬氨酸产量中的应用；(Ⅱ)在生产缬氨酸中的应用；(Ⅲ)在提高细菌菌量中的应用；所述YH66
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RS07020基因为编码YH66
‑
RS07020蛋白的基因；所述YH66
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RS07020蛋白为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)序列表的序列3所示的蛋白质；(a2)来源于细菌且与(a1)具有95％以上同一性且与细菌产缬氨酸相关的蛋白质；(a3)将(a1)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且与细菌产缬氨酸相关的由(a1)衍生的蛋白质。2.一种重组菌，是抑制细菌中的YH66
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RS07020基因表达得到的；所述YH66
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RS07020基因为权利要求1中所述的YH66
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RS07020基因。3.权利要求2所述重组菌在制备缬氨酸中的应用。4.一种制备缬氨酸的方法，包括如下步骤：发酵权利要求2所述重组菌。5.一种提高细菌的缬氨酸产量的方法，包括如下步骤：抑制细菌中的YH66
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RS07020基因表达或降低细菌中YH66
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RS07020蛋白丰度或降低细菌中YH66
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RS07020蛋白活性；所述YH66
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：田斌，孟刚，魏爱英，赵春光，贾慧萍，杨立鹏，
申请(专利权)人：黑龙江伊品生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：