甜菊醇糖苷制造技术

本发明专利技术涉及甜菊醇糖苷。本发明专利技术涉及一种具有式(I)的甜菊醇糖苷，其中在位置R1上存在至少三个糖部分且在位置R2上存在至少三个糖部分，且其中所述甜菊醇糖苷包括至少七个糖部分，其全部均直接或间接地通过β键联接到甜菊醇糖苷配基。醇糖苷配基。醇糖苷配基。

【技术实现步骤摘要】
甜菊醇糖苷
[0001]本专利技术是申请人于2016年4月4日提交的申请号为201680020186.4、题为“甜菊醇糖苷”的中国专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及甜菊醇糖苷，制备其的方法，包括甜菊醇糖苷的甜味剂组合物、风味组合物、食品、饲料和饮料以及甜菊醇糖苷在甜味剂组合物、风味组合物、食品、饲料和饮料中的用途。

技术介绍

[0003]多年生草本植物甜叶菊(Stevia rebaudiana Bert.)的叶子积聚大量被称为甜菊醇糖苷的具有强烈甜味的化合物。虽然这些化合物的生物功能尚不清楚，但它们作为替代性高效甜味剂具有商业意义。
[0004]这些甜的甜菊醇糖苷的功能和感官特性表现为优于许多高效甜味剂的功能和感官特性。此外，研究表明甜菊苷能够降低II型糖尿病患者的血糖水平，并且能够降低轻度高血压患者的血压。
[0005]甜菊醇糖苷积聚在甜叶菊叶中，其中它们可占叶干重的10％至20％。甜菊苷和莱鲍迪甙A均是热和pH稳定的，并且适用于碳酸饮料和许多其他食物。甜菊苷比蔗糖甜110与270倍之间，莱鲍迪甙A比蔗糖甜150与320倍之间。此外，莱鲍迪甙D也是在甜叶菊叶中积聚的高效二萜糖苷甜味剂。它可比蔗糖甜约200倍。莱鲍迪甙M是另一种高效二萜糖苷甜味剂。它在某些甜叶菊品种叶中以痕量存在，但已表明其具有优异的味道特征。
[0006]传统上已从甜叶菊植物中提取了甜菊醇糖苷。在甜叶菊中，(
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)
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贝壳杉烯酸(赤霉酸(GA)生物合成中的中间体)被转化成四环二萜甜菊醇，其然后通过多步糖基化途径进行以形成各种甜菊醇糖苷。然而，产率可以是可变的，并且受到农业和环境条件的影响。此外，甜叶菊种植需要大量的土地面积、在收获前的很长时间、密集劳动以及用于提取和纯化糖苷的额外成本。
[0007]但是，仍需要具有替代和/或改善的味道谱的额外的甜菊醇糖苷，这是因为不同的甜菊醇糖苷可更适合于不同的应用。

技术实现思路

[0008]本专利技术基于从已进行修饰以制备包括rebA的甜菊醇糖苷的微生物获得的发酵液中鉴定新的甜菊醇糖苷。与已知的甜菊醇糖苷相比，新的甜菊醇糖苷将具有不同的感官特性。其可以单独使用或与其他甜菊醇糖苷组合使用，特别是作为甜味剂或用于甜味剂组合物中。
[0009]因此，本专利技术涉及：
[0010]‑
一种具有式(I)的甜菊醇糖苷，
[0011][0012]其中在位置R1上存在至少三个糖部分且在位置R2上存在至少三个糖部分，且其中甜菊醇糖苷包括至少七个糖部分，其全部均直接或间接地通过β键联接到甜菊醇糖苷配基。
[0013]‑
一种具有式(I)的甜菊醇糖苷，
[0014][0015]其中在位置R1上存在至少四个糖部分且在位置R2上存在至少三个糖部分。
[0016]‑
一种具有式(I)的甜菊醇糖苷，
[0017][0018]其中在位置R1上存在至少三个糖部分且在位置R2上存在至少三个糖部分，其中甜菊醇糖苷包括至少七个糖部分，且其中存在于位置R1的糖中的至少一个通过α键被联接到甜菊醇糖苷配基或糖分子。
[0019]‑
一种具有式(I)的甜菊醇糖苷，
[0020][0021]其中在位置R1上存在至少三个糖部分且在位置R2上存在至少四个糖部分，其中存在于位置R2上的糖部分中的至少四个为葡萄糖部分。
[0022]‑
一种具有式(II)的甜菊醇糖苷
[0023][0024]‑
一种具有式(III)的甜菊醇糖苷
[0025][0026]‑
一种具有式(IV)的甜菊醇糖苷
[0027][0028]‑
一种发酵制备的具有式(I)的甜菊醇糖苷，
[0029][0030]其中在位置R1上存在至少三个糖部分且在位置R2上存在至少三个糖部分，且其中甜菊醇糖苷包括至少七个糖部分；
[0031]‑
一种用于制备根据前述权利要求中任一项所述的甜菊醇糖苷的方法，该方法包括：
[0032]提供重组酵母细胞，其包括编码多肽的重组核酸序列，所述多肽包括由下列编码的氨基酸序列：SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：73和SEQ ID NO：75；
[0033]在合适的发酵培养基中使重组酵母细胞发酵；以及，可选地，
[0034]回收根据前述权利要求中任一项所述的甜菊醇糖苷。
[0035]‑
一种组合物，其包括本专利技术的甜菊醇糖苷以及一种或多种不同的甜菊醇糖苷(其中不同的甜菊醇糖苷可以是或可以不是本专利技术的甜菊醇糖苷)；
[0036]‑
一种甜味剂组合物、风味组合物、食品、饲料或饮料，其包括本专利技术的甜菊醇糖苷或组合物；
[0037]‑
本专利技术的甜菊醇糖苷或组合物在甜味剂组合物或风味组合物中的用途；以及
[0038]‑
本专利技术的甜菊醇糖苷或组合物在食品、饲料或饮料中的用途。
附图说明
[0039]图1显示了质粒pUG7
‑
EcoRV的示意图。
[0040]图2显示了将ERG20、tHMG1和BTS1过表达盒设计(A)和整合(B)至酵母基因组中的
方法的示意图。(C)示出在通过Cre重组酶移除KANMX标记后的最终情况。
[0041]图3示出了ERG9敲低构建体的示意性图示。所述构建体由ERG9的500bp长的3'部分、TRP1启动子的98bp、TRP1开放阅读框和终止子、随后ERG9的400bp长的下游序列组成。由于在ERG9开放阅读框末端处引入Xbal位点，所以最后一个氨基酸变成Ser，并且终止密码子变成Arg。新的终止密码子位于TPR1启动子中，从而导致18个氨基酸的延伸。
[0042]图4示出了UGT2如何整合到基因组中的示意性图示。A.在转化中使用的不同片段；B.整合后的情况；C.在Cre重组酶表达后的情况)。
[0043]图5示出了从GGPP至RebA的途径如何整合到基因组中的示意性图示。A.在转化中使用的不同片段；B.在整合后的情况。
[0044]图6a示出使用高分辨率质谱法，在乙醇提取物(用于纯化的起始物料)中的含有7个葡萄糖(7.1、7.2和7.3)的甜菊醇糖苷混合物的m/z 1451.5820的提取的离子色谱图；且图6b为使用LC
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MS的含有7个葡萄糖(7.1、7.2和7.3)的纯化甜菊醇糖苷的m/z 1451.5的提取的离子色谱图。
[0045]图7示出莱鲍迪甙7.1的结构。
[0046]图8示出莱鲍迪甙7.2的结构。
[0047]图9示出莱鲍迪甙7.3的结构。
[0048]图10示出莱鲍迪甙M的结构。
[0049]图11示出(a)甜菊醇本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有式(I)的甜菊醇糖苷，其中在位置R1上存在至少三个糖部分且在位置R2上存在至少三个糖部分，且其中所述甜菊醇糖苷包括至少七个糖部分，所述至少七个糖部分全部均直接或间接地通过β键联接到甜菊醇糖苷配基。2.一种具有式(I)的甜菊醇糖苷，其中在位置R1上存在至少四个糖部分且在位置R2上存在至少三个糖部分。3.一种具有式(I)的甜菊醇糖苷，其中在位置R1上存在至少三个糖部分且在位置R2上存在至少三个糖部分，其中所述甜菊醇糖苷包括至少七个糖部分，且其中存在于位置R1的糖中的至少一个通过α键被联接到甜菊醇糖苷配基或糖分子。4.一种具有式(I)的甜菊醇糖苷，其中在位置R1上存在至少三个糖部分且在位置R2上存在至少四个糖部分，其中存在于位置R2上的所述糖部分中的至少四个为葡萄糖部分。5.一种具有式(II)的甜菊醇糖苷
6.一种具有式(III)的甜菊醇糖苷7.一种具有式(IV)的甜菊醇糖苷
8.根据前述权利要求中任一项所述的甜菊醇糖苷，其为发酵制备的。9.一种发酵制备的具有式(I)的甜菊醇糖苷，其中在位置R1上存在至少三个糖部分且在位置R2上存在至少三个糖部分，且其中所述甜菊醇糖苷包括至少七个糖部分。10.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗伯托，
申请(专利权)人：帝斯曼知识产权资产管理有限公司，
类型：发明
国别省市：