抗体制造技术

本发明专利技术提供有效治疗肿瘤等的抗体。该抗体识别含有人CD98hc的N

【技术实现步骤摘要】
抗体
[0001]本申请是申请日为2016年8月9日、中国专利申请号为201680058931.4且专利技术名称为“抗体”的中国专利申请的分案申请，并且本申请要求享有申请号为2015
‑
158414的日本申请的优先权。


[0002]本专利技术公开了一种新抗体及其用途等。

技术介绍

[0003]多发性骨髓瘤是导致浆细胞肿瘤性生长的疾病的典型实例，约占所有癌症的1％，占所有恶性血液肿瘤的10％以上。多发性骨髓瘤是一种骨髓中存在的浆细胞发生癌变并进行单克隆生长的疾病。在多发性骨髓瘤中，异常浆细胞(骨髓瘤细胞)扩散到整个身体的骨髓，并在整个身体的骨髓的每个部分中生长。当异常浆细胞生长时，会出现各种症状，包括骨折。骨髓瘤细胞产生为异常免疫球蛋白的M蛋白，从而增加了血液中M蛋白的浓度，因此血液变得粘稠。M蛋白不能像通常的抗体那样发挥功能(正常抗体识别诸如病原体等侵入身体的异物)，从而降低免疫能力。这些现象影响许多器官并导致各种症状。典型症状是骨痛和骨骼损伤、高钙血症、肾病和肾衰竭、贫血等。
[0004]目前主要应用的多发性骨髓瘤的治疗是蛋白酶体抑制剂iMID(如沙利度胺及其衍生物，特别是来那度胺)、使用例如美法仑与泼尼松组合的化学疗法以及造血干细胞移植。然而，在大多数情况下，骨髓瘤细胞最终获得对这些治疗剂的抗性。因此，现实情况是，在目前的治疗方法中，骨髓瘤患者预后并不乐观，发病后平均生存期是3年至5年。此外，还产生了一个问题，这些治疗剂并不仅仅特异地作用于靶肿瘤细胞。因此，所述药剂对正常细胞也显示出毒性，由此引起严重的副作用。
[0005]已经尝试通过使用单克隆抗体开发用于多发性骨髓瘤的治疗方法。例如，仅最近就在临床上应用了抗CS1抗体(专利文献1)和抗CD38抗体(专利文献2)。
[0006]文献列表
[0007]非专利文献
[0008]非专利文献1:Lonial et al.,official journal of the American Society of Clinical Oncology,2012Jun 1；30(16):1953
‑
1959。
[0009]非专利文献2:de Weers et al.,Journal of immunology,2011Feb 1；186(3):1840
‑
1848。
[0010]非专利文献3:J Immunol.2009Nov 1；183(9):5563
‑
74。
[0011]非专利文献4:N Engl J Med.2014Oct 16；371(16):1507
‑
17。
[0012]非专利文献5:Nat Biotechnol.2002Jan；20(1):70
‑
5。

技术实现思路

[0013]技术问题
[0014]抗CS1抗体对骨髓瘤细胞显示出相对高的特异性，但单独使用该抗体不一定显示出高水平的抗骨髓瘤效果。该抗体作为单一药物的功效尚未在临床试验中得到证实。发现抗CS1抗体与来那度胺的组合使用增加了抗CS1抗体的抗肿瘤效果，并且美国FDA批准将抗
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CS1抗体用于该组合使用。虽然抗CD38抗体也被FDA批准，但是由于CD38在正常血细胞(包括许多CD34阳性造血祖细胞)中的表达，作为多发性骨髓瘤治疗靶标的CD38是表现出低特异性的抗原。鉴于这种现状，本专利技术的一个目的是提供一种更有效的手段来治疗涉及浆细胞的肿瘤性生长的疾病，如多发性骨髓瘤。
[0015]解决问题的方案
[0016]本专利技术人为实现该目的而进行了广泛的研究，并提出了新的观点：即使蛋白不是骨髓瘤细胞所特有的，如果蛋白的翻译后修饰是骨髓瘤细胞所特有的，则识别它的抗体对骨髓瘤具有特异性。然后专利技术人预期通过分离与骨髓瘤细胞和骨髓瘤祖细胞特异性结合的抗体并鉴定抗体识别的蛋白，将能够揭示蛋白是否是骨髓瘤细胞所特有的，或者尽管蛋白不是骨髓瘤细胞所特有的，但揭示抗体是否仅识别具有一些骨髓瘤特有的翻译后修饰的蛋白。他们进一步认为，最终，将有可能获得如上所述的抗体，该抗体仅识别具有骨髓瘤细胞和骨髓瘤祖细胞所特有的翻译后修饰的蛋白。
[0017]基于这一概念，本专利技术人使用多发性骨髓瘤细胞系制备了10,000个以上与这些细胞系结合的单克隆抗体的克隆，从克隆中选择不与正常血细胞结合的抗体，并鉴定出被该抗体识别的蛋白。结果如后述的实施例所示，鉴定出R8H283抗体，并揭示了R8H283抗体结合的抗原为CD98hc。尽管CD98hc在正常血细胞中表达，但确认了R8H283抗体特异性识别骨髓瘤细胞，因为R8H283抗体所针对的表位存在于CD98hc上受到N
‑
聚糖的存在影响的区域中，并且N
‑
聚糖在骨髓瘤细胞(包括骨髓瘤浆细胞和骨髓瘤祖细胞)中的附着方式与在正常血细胞中的附着方式不同。另外，本专利技术人证实了R8H283抗体具有细胞毒活性，通过向移植了骨髓瘤细胞的动物施用该抗体可以抑制骨髓瘤细胞的增殖，并且除了骨髓瘤细胞之外，R8H283抗体还识别各种其他肿瘤细胞。在基于这些发现进一步研究和详尽考虑后，专利技术人提出了由以下主题表示的专利技术。
[0018]1.抗体
[0019]第1
‑
1项
[0020]抗人CD98hc抗体，当去除结合至人CD98hc的糖链时，所述抗人CD98hc抗体对人CD98hc的亲和力增加。
[0021]第1
‑
1.5项
[0022]抗人CD98hc抗体，当用衣霉素处理表达人CD98hc的细胞时，所述抗人CD98hc抗体对所述细胞的亲和力增加。
[0023]第1
‑
2项
[0024]抗人CD98hc抗体，其对CD98hc变体的亲和力与其对小鼠来源的CD98hc的亲和力相当，在所述CD98hc变体中，人CD98hc的395
‑
397位上的氨基酸残基被所述小鼠来源的CD98hc的氨基酸残基取代。
[0025]第1
‑
3项
[0026]抗人CD98hc抗体，其对CD98hc变体的亲和力与其对小鼠来源的CD98hc的亲和力相当，在所述CD98hc变体中，人CD98hc的400
‑
401位上的氨基酸残基被所述小鼠来源的CD98hc
的氨基酸残基取代。
[0027]第1
‑
4项
[0028]抗体，其识别包含人CD98hc的N
‑
糖基化位点并通过抑制N
‑
连接糖基化而暴露的表位。
[0029]第1
‑
5项
[0030]抗体，其表位存在于人CD98hc上受到N
‑
聚糖的存在影响的区域内。
[0031]第1
‑
6项
[0032]抗体，其包含选自第1
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗CD98hc的抗体，其对CD98hc变体的亲和力与其对小鼠来源的CD98hc的亲和力相当，在所述CD98hc变体中，人CD98hc的395
‑
397位上的氨基酸残基被所述小鼠来源的CD98hc的氨基酸残基取代。2.抗CD98hc的抗体，其对CD98hc变体的亲和力与其对小鼠来源的CD98hc的亲和力相当，在所述CD98hc变体中，人CD98hc的400位和401位上的氨基酸残基被所述小鼠来源的CD98hc的氨基酸残基取代。3.根据权利要求1或2所述的抗体，其包含：重链可变区，所述重链可变区包含：包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链CDR1，包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链CDR2，和/或包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链CDR3；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含：包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链CDR1，包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2，和/或包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链CDR3。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的抗体，其包含：包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的重链可变区，和/或包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的轻链可变区。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的抗体，其为Fv、scFv、双体抗体、三体抗体、四体抗体或它们的组合。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的抗体，其为单克隆抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：保仙直毅，杉山治夫，熊之郷淳，
申请(专利权)人：国立大学法人大阪大学，
类型：发明
国别省市：