用于恶性女性生殖细胞肿瘤诊断和治疗试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及用于女性恶性生殖细胞肿瘤诊断和治疗试剂盒，所述试剂盒包括OVOL2表达水平的检测试剂以及用于化疗的顺铂药物。通过采用本发明专利技术用于女性恶性生殖细胞肿瘤诊断和治疗试剂盒，有助于提早预测女性恶性生殖细胞肿瘤对顺铂化疗的敏感程度，从而优化治疗方案，减少不必要的化疗，提高患者生活质量的同时改善患者的预后。善患者的预后。善患者的预后。

【技术实现步骤摘要】
用于恶性女性生殖细胞肿瘤诊断和治疗试剂盒


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种用于女性恶性生殖细胞肿瘤诊断和治 疗试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]卵黄囊瘤(YSTs)是卵巢恶性生殖细胞肿瘤(MOGCTs)常见的组织学亚型，多见 于青少年和年轻女性，甲胎蛋白(AFP)是其较为特异的肿瘤标志物。绝大多数YSTs在 组织形态上表现出原始的胚外结构和网状微囊结构，这是最常见的诊断性特征。由于 Schiller-Duval小体的形态与小鼠胎盘中的内胚窦相似，因此YSTs也被称为内胚窦瘤。与 其他MOGCTs相似，YSTs的标准治疗是手术和以顺铂为基础的化疗。尽管＞80％的 MOGCTs患者经正规治疗后可得以长期生存，但与其他组织学亚型相比，YSTs患者的预 后相对较差。一旦复发，治疗十分棘手，即使经过手术和挽救性化疗，仍有超过50％的 复发患者死于疾病进展。化疗耐药是复发难治的主要原因。因此，阐明YSTs化疗耐药相 关的分子机制在临床上具有十分重要的意义。
[0003]目前，在分子水平上对YSTs的理解非常有限，并且主要来源于对睾丸生殖细胞肿瘤 (TGCTs)的研究。MOGCTs和TGCTs均来源于原始生殖细胞，并具有相似的发病年龄、 组织学亚型和治疗方案。TGCTs的分子特征包括低体细胞突变率和高体细胞拷贝数改变 (SCNAs)。KIT和KRAS是两个最常见的突变基因。与几乎所有其他实体瘤不同，TP53 突变在TGCTs中很少见，完整的p53通路被认为是化疗敏感性的重要机制，在DNA损 伤时可迅速诱导凋亡反应。但是，YSTs具有一些不同于其他MOGCTs和TGCTs的特定 分子特征。例如，与无性细胞瘤和GCTs相比，YSTs中参与WNT/β-catenin和TGF-β/BMP 通路的基因高表达。尽管近年来有众多癌症基因组学特征的研究，但YSTs的基因组特征、 肿瘤演化模式以及与化疗抗性相关的机制在很大程度上仍是未知的，从而影响了用于研 发新的诊断、治疗策略的进程。

技术实现思路

[0004]基于上述现有技术的状况，专利技术人尝试阐明与YST对化疗抗性相关的分子机制，从 而提供一种有助于得到提高对于顺铂化疗的敏感性的试剂盒。为了实现本专利技术的专利技术目 的，拟采用如下技术方案：
[0005]本专利技术一方面涉及用于女性恶性生殖细胞肿瘤诊断和治疗试剂盒，所述试剂盒包括 OVOL2表达水平的检测试剂以及用于化疗的顺铂药物。
[0006]OVOL2(NCBI RefSeq ID：NM_021220.4；Ensembl Gene ID：ENSG00000125850； Ensembl Transcript ID：ENST00000278780.7)是Ovo基因家族中的一员，编码进化上保守 的锌指转录因子，在胚胎发育和肿瘤进展过程中发挥重要作用。OVOL2调控血管生成、 颅神经管及心脏的形成，其典型的编码序列如SEQ ID NO.1所示。同时，OVOL2参与调 控上皮间充质转化(EMT)，维持细胞的上皮表型。已有研究表明，在结直肠癌、乳腺癌、 肺腺癌中，当
标记的比较。基于Kruskal-Wallistest计算P值。方框中的中线是中位数，方框的底部和顶部 是第一和第三四分位数，并且须分别延伸到较低和较高四分位数的1.5
×
四分位数范围。
[0018]图3.YSTs原发肿瘤样本中体细胞突变模式
[0019](A)在所有原发肿瘤样本(n＝24)中，YSTs体细胞突变图谱，顶部和右侧的条分别 显示了每个肿瘤的突变率和所选基因中突变的组成。两个已知的癌症驱动基因以粗体显示， 并且通过MuSiC2和MutSigCV鉴定了三个新的候选驱动因子基因。(B)YSTs和TCGA中 33种癌症类型中TP53突变频率的比较。(C)YSTs中拷贝数的扩增和缺失，通过GISTIC2 分析，在FDR＝10-3
处鉴定到显着扩增的峰(左图)或缺失的峰(右图)。(D)原发肿瘤样 本的肿瘤驱动拷贝数变化频率。
[0020]图4.性腺发育异常的YSTs患者的关键驱动基因和克隆进化
[0021](A、D)来自患者P02(A)和P03(D)的原发肿瘤样本中全外显子组测序数据映射 到SRY基因。(B、E)来自P02(B)和P03(E)的原发和复发样本中TP53、KRAS、DMRT1 和KCTD1的等位基因频率。(C、F)患者中获得的驱动基因突变P02(C)和P03(F)的 推定演变的示意图。
[0022]图5.一名多次复发患者的肿瘤演变
[0023](A)患者P07在不同诊断时间点的PET-CT断层扫描。(B)来自P07的原发性和三 个复发性肿瘤样品中所有突变的比对。括号中显示用于分析的突变数目。(C)显示肿瘤样 品之间的进化关系的系统树。选择的突变沿谱系显示。(D)对P07的四个肿瘤样本基于LOH 模式构建系统发生树。
[0024]图6.化疗敏感的原发性和复发性YST样品之间差异表达的基因
[0025](A)火山图，显示在原发和复发的YST样品中差异表达的基因(倍数变化＞2且FDR ＜0.1)。(B)癌症标志性途径中差异基因的富集。(C)药物敏感性和表达水平的相关性分析 确定OVOL2为最佳候选基因。(D)OVOL2高表达水平的癌细胞系对顺铂抗性更高(Wilcoxsigned-rank test，p＝4.8
×
10-8
)。(E)OVOL2高表达水平的卵巢癌细胞系对顺铂抗性更高 (Wilcox signed-rank test，p＝6.7
×
10-3
)。(D和E)方框中的中线是中位数，方框的底部和顶 部是第一和第三四分位数，并且须分别延伸到较低和较高四分位数的1.5倍四分位数范围。
[0026]图7.OVOL2表达对NOY1细胞系对顺铂敏感性的影响
[0027](A)OVOL2蛋白在NOY1和HOSEpiC细胞中的表达。(B)在对照和siRNA敲除细 胞中OVOL2基因的相对mRNA表达水平。(C)不同药物浓度下的药物反应。(D)不同治 疗时间点的药物反应。(E)来自不同顺铂处理的细胞组的代表性流式细胞仪图，显示 Annexin-V和PI阳性凋亡细胞。(F)OVOL2 siRNA敲除对细胞凋亡的影响。(G、H)OVOL2 siRNA敲除对caspase-3和裂解的caspase-3的影响。误差bar表示
±
SD；*，p＜0.05，**，p ＜0.01，和***，p＜10-3
。
具体实施方式
[0028]为了进一步理解本专利技术，下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行 清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施 例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所 有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0029]如无特殊说明，本专利技术实施例中所涉及的试剂均为市售产本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于女性恶性生殖细胞肿瘤诊断和治疗试剂盒，所述试剂盒包括OVOL2表达水平的检测试剂以及用于化疗的顺铂药物。2.根据权利要求1所述的试剂盒，所述的试剂盒中还包括OVOL2基因敲除试剂和/或OVOL2基因沉默试剂；优选的，所述的OVOL2基因敲除试剂和/或OVOL2基因沉默试剂为小干扰RNA。3.根据权利要求1所述的试剂盒，所述的女性恶性生殖细胞肿瘤是指卵黄囊瘤(YSTs)组织学亚型。4.根据权利要求l所述的试剂盒，所述的试剂盒中还包括TP53突变检测试剂。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：杨佳欣，张颖，彭鑫鑫，季序我，
申请(专利权)人：普瑞基准生物医药苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：