一种缬沙坦中的2-叠氮基-3-甲基丁酸的检测方法技术

本发明专利技术属于药物分析技术领域，具体涉及一种缬沙坦中的2

【技术实现步骤摘要】
一种缬沙坦中的2
‑
叠氮基
‑3‑
甲基丁酸的检测方法


[0001]本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种缬沙坦中的2
‑
叠氮基
‑3‑
甲基丁酸的检验方法。

技术介绍

[0002]缬沙坦(valsartan)化学名为(S)
‑
N
‑
戊酰基
‑
N
‑
[4
‑
(2
‑
四唑基)苯基]苯甲基缬氨酸，是一种血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ)AT1 受体拮抗剂，它是继钙离子通道阻滞剂和血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)之后又一新型抗高血压药，由于其副作用小，作用机制独特，耐受性好，服用方便，疗效显著，同时具有保护心脏、脑、肾脏等靶器官的效果，应用前景十分广阔。
[0003]2‑
叠氮基
‑3‑
甲基丁酸，CAS No.：81439
‑
78
‑
3，结构式：，是缬沙坦合成过程中的一种工艺杂质，因其具有叠氮基团的基因毒性警示结构，需要对该类杂质进行控制。
[0004]基因毒性杂质是一类可与DNA反应，造成DNA损伤，在很低水平下即可诱发基因突变，并可能致癌的杂质，因其毒性较强，对用药的安全性产生了强烈的威胁，近年来也越来越多的出现因为在已上市药品中发现痕量的基因毒性杂质残留而产生大范围的医疗事故，被FDA强行召回的案例，给药厂造成了巨大的经济损失，近年来的各国法规机构如ICH、FDA、EMA等都对基因毒性杂质有了更明确的要求，越来越多的药企在新药研发过程中就重点关注基因毒性杂质的控制盒检测，ICH发布了关于遗传毒性和致癌性杂质相关的指导原则，ICH M7中基因毒性杂质的毒理学关注阈值（TTC）值为1.5
µ
g/天，而缬沙坦片剂中缬沙坦的最大日剂量为320mg/天，根据公式限度=TTC/最大日剂量，计算得到2
‑
叠氮基
‑3‑
甲基丁酸在成品缬沙坦中的限度为4.7ppm。
[0005]目前还没有任何文献公开检测缬沙坦中的2
‑
叠氮基
‑3‑
甲基丁酸含量的方法，本专利技术首次公开了缬沙坦中的2
‑
叠氮基
‑3‑
甲基丁酸的检测方法，为解决缬沙坦中的2
‑
叠氮基
‑3‑
甲基丁酸的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测缬沙坦中的2
‑
叠氮基
‑3‑
甲基丁酸的含量，从而有效保障用药安全，便于缬沙坦原料药的质量控制。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供一种缬沙坦中的2
‑
叠氮基
‑3‑
甲基丁酸的检测方法，为解决缬沙坦的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测缬沙坦中的2
‑
叠氮基
‑3‑
甲基丁酸的含量，从而有效保障用药安全，便于缬沙坦的质量控制，该方法便捷、高效、准确，在系统适用性、重复性、专属性、准确度方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于缬沙坦原料药的质量控制。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种缬沙坦中的2
‑
叠氮基
‑3‑
甲基丁酸的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、灵敏度溶液、对照品溶液和供试品溶液。
[0008]（2）测定方法：采用LC
‑
MS测定缬沙坦中的2
‑
叠氮基
‑3‑
甲基丁酸的含量，待系统稳定后，分别进空白溶液、灵敏度溶液、对照品溶液和供试品溶液，记录色谱图；色谱条件如下:色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，进样量：5
µ
l，柱温：30℃，流速：0.4ml/min，流动相以甲酸：水体系为流动相A，以乙腈为流动相B，采用梯度洗脱；MS条件如下：干燥气温度：320℃，干燥气流速：8 L/min，雾化气压力：40 psi，鞘气温度：350℃，鞘气流速：10 L/min，毛细管电压：3500V，极性：负极，扫描模式：SIM，采集时间：4.0min
‑
8.0min，EMV：0V，SIM Ion（m/z）：142.0，Fragmentor：66V，Dwell：100ms，加速电压：5V。
[0009]进一步的，所述空白溶液为乙腈：水=50:50（V/V），所述流动相为：流动相A：甲酸：水=1:1000（v/v），流动相B：乙腈，所述对照品溶液：取适量2
‑
叠氮基
‑3‑
甲基丁酸置于容量瓶中，加入适量空白液溶解并稀释至刻度，摇匀；所述灵敏度溶液：取适量对照品溶液，置于容量瓶中，加入适量空白液溶解并稀释至刻度，摇匀；所述供试品溶液：取适量供试品，置于容量瓶中，加空白溶液超声溶解并稀释至刻度，摇匀，所述色谱柱为ThermoAcclaim
TM
RSLC 120 C18 2.1
×
100mm，2.2
µ
m或效能相当的色谱柱。
[0010]进一步的，所述流动相梯度过程如下：进一步的，本专利技术所述的测定方法，包括以下步骤：（1）配制溶液：乙腈：HPLC；甲酸：HPLC；水：超纯水；2
‑
叠氮基
‑3‑
甲基丁酸：自制或外购；空白溶液：乙腈：水=50:50（V/V）；
对照品储备液
①
：取2
‑
叠氮基
‑3‑
甲基丁酸对照品约23.5mg，精密称定，置50ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1.0ml，置25ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：18.8μg/ml）对照品储备液
②
：精密量取对照品储备液
①
1.0ml，置20ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：940ng/ml）对照品溶液：精密量取对照品储备液
②
500μl置10ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：47ng/ml）灵敏度溶液：精密量取对照品溶液1.0ml，置10ml量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：4.7ng/ml）供试品溶液：取供试品约100mg，精密称定，置10ml量瓶中，加稀释液适量，超声使溶解，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：缬沙坦10mg/ml）色谱条件：仪器：Agilent InfinityII 1290 UHPLC+Agilent 6470 ESI（
‑
）
‑
QQQ
‑
MS、电子分析天平；色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（如：ThermoAcclaimTM RSLC 120 C18 2.1
×
100mm，2.2...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种缬沙坦中的2
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叠氮基
‑3‑
甲基丁酸的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、灵敏度溶液、对照品溶液和供试品溶液；（2）测定方法：采用LC
‑
MS测定缬沙坦中的2
‑
叠氮基
‑3‑
甲基丁酸的含量，待系统稳定后，分别进空白溶液、灵敏度溶液、对照品溶液和供试品溶液，记录色谱图；色谱条件如下:色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，进样量：5
µ
l，柱温：30℃，流速：0.4ml/min，流动相以甲酸：水体系为流动相A，以乙腈为流动相B，采用梯度洗脱；MS条件如下：干燥气温度：320℃，干燥气流速：8 L/min，雾化气压力：40 psi，鞘气温度：350℃，鞘气流速：10 L/min，毛细管电压：3500V，极性：负极，扫描模式：SIM，采集时间：4.0min
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【专利技术属性】
技术研发人员：蔡强，陆国琦，李大胜，汤伟彬，兰柳琴，
申请(专利权)人：珠海润都制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：