中和抗甲型流感抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及中和抗甲型流感抗体及其用途。本发明专利技术涉及能够结合甲型流感病毒血凝素并且中和甲型流感病毒的至少一种1组亚型和至少一种2组亚型的抗体及其结合片段。在一个实施例中，根据本发明专利技术的抗体或结合片段能够结合和/或中和选自H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16和H17及其变体的一种或多种甲型流感病毒1组亚型以及选自H3、H4、H7、H10、H14和H15及其变体的一种或多种甲型流感病毒2组亚型。体的一种或多种甲型流感病毒2组亚型。体的一种或多种甲型流感病毒2组亚型。

【技术实现步骤摘要】
中和抗甲型流感抗体及其用途
[0001]本申请是申请日为2014年10月1日的中国专利申请201480053969.3“中和抗甲型流感抗体及其用途”的分案申请。


[0002]本专利技术涉及具有针对甲型流感病毒的广泛中和活性的抗体并且涉及这类抗体的用途。

技术介绍

[0003]流感病毒引起年度流感流行和偶然的大流行，这对全世界公共卫生构成显著威胁。季节性流感感染与每年200,000
‑
500,000例死亡相关联，特别是在幼儿、免疫功能低下患者和老年人中。死亡率典型地在具有大流行性流感爆发的季节期间进一步增加。对于开发用于预防和治疗流感感染(特别是缺乏服务的群体中)的有效抗病毒治疗剂仍然存在显著未满足的医学需求。
[0004]存在三种类型的流感病毒，甲型、乙型和丙型。甲型流感病毒可以感染各种各样的鸟类和哺乳动物，包括人、猪、鸡、以及雪貂。甲型流感病毒可以基于编码表面糖蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的两种基因的抗原区中的等位基因变异而分类为亚型。HA是受体结合和膜融合糖蛋白，其介导病毒附着和进入靶细胞；HA是保护性体液免疫应答的主要靶标。HA蛋白是三聚体结构的并且包含单一多肽前体HA0的三个相同拷贝，该多肽前体在蛋白水解成熟时裂解成含有球状头部(HA1)和柄区(HA2)的pH依赖性、亚稳定的中间体。膜远侧“球状头部”构成HA1结构的大部分并且包含用于病毒进入的唾液酸结合口袋和主要抗原结构域。从HA2和一些HA1残基组装的膜近侧“柄”结构包含融合机器，其在晚期内体的低pH环境中经历构象变化以便触发膜融合和渗透至细胞中。甲型流感亚型之间的序列同源性程度在HA1中(亚型之间34％
‑
59％同源性)比在HA2区中(51％
‑
80％同源性)低。由流感病毒感染引发的中和抗体通常靶向可变HA1球状头部以便防止病毒受体结合且通常是毒株特异性的。罕见地，已经鉴别了靶向HA的球状头部的广泛交叉反应性单克隆抗体(克劳斯J.C.(Krause J.C.)等人，2011病毒学杂志(J.Virol.)85；惠特尔J.(Whittle J.)等人，2011美国国家科学院院刊(PNAS)108；爱可尔特DC(Ekiert DC)等人，2012自然(Nature)489；李PS(Lee PS)等人，2012美国国家科学院院刊(PNAS)109)。相比之下，柄区的结构是相对保守的并且最近已鉴别了结合HA柄以便防止用于病毒进入的pH引发的融合步骤的少数广泛中和抗体(爱可尔特DC等人，2009科学(Science)324；瑞J.(Sui J.)等人，自然结构与分子生物学(Nat Struct Mol Biol)16；拉马特J(Wrammert J)等人，2011实验医学杂志(J Exp Med)208；爱可尔特DC等人，2011科学333；科尔蒂D(Corti D)等人，2010临床研究杂志(J Clin Invest)120；思罗斯比M.(Throsby M.)，2008公共科学图书馆
·
综合(PLoS One)3)。这些柄反应性中和抗体中的大多数是对甲型流感1组病毒特异性的或对2组病毒特异性的。最近，分离了与1组病毒和2组病毒两者交叉反应的柄结合抗体(科尔蒂D等人，2011科学333；李GM(Li GM)等人，2012美国国家科学院院刊109和西里尔D(Cyrille D)等人，2012科学337；纳卡穆
拉G(Nakamura G)等人，2013，细胞宿主与微生物(Cell Host&Microbe)14)。
[0005]迄今为止，不存在广泛地中和或抑制所有甲型流感病毒感染或减轻由甲型流感病毒引起的疾病的市售抗体。因此，对于保护免受甲型流感病毒的多种1组亚型和2组亚型的新型抗体仍然存在需要。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供一种针对甲型流感病毒的抗体或其结合片段，该抗体或其结合片段能够结合甲型流感病毒血凝素并且中和甲型流感病毒的至少一种1组亚型和至少一种2组亚型。
[0007]优选地，本专利技术的抗体或结合片段能够结合甲型流感病毒血凝素并且中和至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种甲型流感病毒1组亚型和至少1、2、3、4、5或6种甲型流感病毒2组亚型。进一步优选地，本专利技术的抗体或结合片段能够结合甲型流感病毒血凝素并且中和至少5种甲型流感病毒1组亚型和至少1或2种甲型流感病毒2组亚型。
[0008]甲型流感病毒的血凝素亚型分为两个主要系统发育分组，这些分组被鉴别为1组，该组包括亚型H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16、以及H17；和2组，该组包括亚型H3、H4、H7、H10、H14、以及H15。在一个实施例中，根据本专利技术的抗体或结合片段能够结合和/或中和选自H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16和H17及其变体的一种或多种甲型流感病毒1组亚型；以及选自H3、H4、H7、H10、H14和H15及其变体的一种或多种甲型流感病毒2组亚型。在另一个实施例中，根据本专利技术的抗体或结合片段能够结合和/或中和甲型流感病毒1组亚型H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16和H17；以及甲型流感病毒2组亚型H3、H4、H7、H10、H14和H15。在另一个实施例中，该抗体或结合片段能够结合和/或中和1组亚型H1、H2、H5、H6和H9以及2组亚型H3和H7。在另一个实施例中，该抗体或结合片段能够结合和/或中和1组亚型H1、H2、H5和H6以及2组亚型H3和H7。
[0009]本专利技术是基于从作为起始材料的自单个供体收集的IgG记忆B细胞分离天然存在的人单克隆抗体(mAb)。优化用于产生具有改进的特征的抗体变体，如在此所描述。这些优化的抗体变体不是天然存在的；它们是使用重组技术产生的。本专利技术的抗体或其片段结合HA的柄区并且中和甲型流感病毒的多于一种亚型的感染，这些亚型分别选自1组亚型和2组亚型。为抗甲型流感HA柄结合抗体的本专利技术的抗体展示相较于来自公开文献(抗体FI6v4，WO2013/011347A1中所描述)且在实例5的表6中所示的抗体更宽的气息覆盖范围或针对甲型流感病毒的更好中和活性。此外，本专利技术的抗体可在阻断HA成熟方面比一种或多种其他mAb更有效，如在实例6的图1中所示。
[0010]在一些实施例中，该抗体或其结合片段包含一组六个CDR，其中该组六个CDR选自下组，该组由以下各项组成：
[0011](a)SEQ ID NO.:3的HCDR1、SEQ ID NO.:4的HCDR2、SEQ ID NO.:5的HCDR3、SEQ ID NO.:8的LCDR1、SEQ ID NO.:9的LCDR2、以及SEQ ID NO.:10的LCDR3；
[0012](b)SEQ ID NO.:13的HCDR1、SEQ ID NO.:14的HCDR2、SEQ ID NO.:15的HCDR3、SEQ ID NO.:18的LCDR1、SEQ ID NO.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
ID NO.:128的LCDR1、SEQ ID NO.:129的LCDR2、以及SEQ ID NO.:130的LCDR3；(n)SEQ ID NO.:133的HCDR1、SEQ ID NO.:134的HCDR2、SEQ ID NO.:135的HCDR3、SEQ ID NO.:138的LCDR1、SEQ ID NO.:139的LCDR2、以及SEQ ID NO.:140的LCDR3；以及(o)SEQ ID NO.:143的HCDR1、SEQ ID NO.:144的HCDR2、SEQ ID NO.:145的HCDR3、SEQ ID NO.:148的LCDR1、SEQ ID NO.:149的LCDR2、以及SEQ ID NO.:150的LCDR3(p)根据(a)至(o)中任一项的一组六个CDR包含一个或多个氨基酸取代、缺失或插入；(q)根据(a)至(p)中任一项的一组六个CDR包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、或24或25个氨基酸取代；(r)根据(a)至(q)中任一项的一组六个CDR HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3包含：(i)HCDR1，其具有与SEQ ID NO：3一致或相对于SEQ ID NO：3包含3个或更少个氨基酸残基取代的氨基酸序列；(ii)HCDR2，其具有与SEQ ID NO：4一致或相对于SEQ ID NO：4包含5个或更少个氨基酸残基取代的氨基酸序列；(iii)HCDR3，其具有与SEQ ID NO：5一致或相对于SEQ ID NO：5包含6个或更少个氨基酸残基取代的氨基酸序列；(iv)LCDR1，其具有与SEQ ID NO：6一致或相对于SEQ ID NO：6包含5个或更少个氨基酸残基取代和/或一个缺失的氨基酸序列；(v)LCDR2，其具有与SEQ ID NO：7一致或相对于SEQ ID NO：7包含5个或更少个氨基酸残基取代的氨基酸序列；以及(vi)LCDR3，其具有与SEQ ID NO：8一致或相对于SEQ ID NO：8包含1个或更少个氨基酸残基取代的氨基酸序列；(s)根据(a)至(r)中任一项的一组六个CDR HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3包含：(i)HCDR1，其中：Kabat残基31为S，Kabat残基32为N或Y，Kabat残基33为N、S或R，Kabat残基34为A，Kabat残基35为V或T，Kabat残基35A为WKabat残基35B为N；(ii)HCDR2，其中：Kabat残基50为R，Kabat残基51为T，Kabat残基52为Y，Kabat残基52A为Y，Kabat残基53为R，Kabat残基54为S，
Kabat残基55为K或G，Kabat残基56为W，Kabat残基57为Y，Kabat残基58为N或Y，Kabat残基59为D，Kabat残基60为Y，Kabat残基61为A，Kabat残基62为E、V或d，Kabat残基63为S或F，Kabat残基64为V或L，Kabat残基65为K；(iii)HCDR3，其中：Kabat残基95为S或G，Kabat残基96为G，Kabat残基97为H，Kabat残基98为I，Kabat残基99为T，Kabat残基100为V或E，Kabat残基100A为F，Kabat残基100B为G，Kabat残基100C为V或L，Kabat残基100D为N,Kabat残基100E为V或I，Kabat残基100F为D，Kabat残基100G为A，Kabat残基100F为F或Y，Kabat残基101为D，Kabat残基102为M、I或V；(iv)LCDR1，其中：Kabat残基24为R，Kabat残基25为T、A或不存在，Kabat残基26为S或A，Kabat残基27为Q，Kabat残基28为S或R，Kabat残基29为L，Kabat残基30为S、N或RKabat残基31为S，Kabat残基32为Y，Kabat残基33为L、T或D，
Kabat残基34为H；(v)LCDR2，其中：Kabat残基50为A，Kabat残基51为A、T或S，Kabat残基52为S或T，Kabat残基53为S或T，Kabat残基54为L或R，Kabat残基55为Q、L或G，Kabat残基56为S；以及，(vi)LCDR3，其中：Kabat残基89为Q，Kabat残基90为Q或L；Kabat残基91为S，Kabat残基92为R，并且Kabat残基93为T。6.根据以上权利要求中任一项所述的抗体或其结合片段，包含与选自下组的VH具有至少75％一致性的VH和/或与选自下组的VL具有至少75％一致性的VL，该组由以下各项组成：(a)SEQ ID NO.:2的VH和SEQ ID NO.:7的VL，(b)SEQ ID NO.:12的VH和SEQ ID NO.:17的VL，(c)SEQ ID NO.:22的VH和SEQ ID NO.:27的VL，(d)SEQ ID NO.:32的VH和SEQ ID NO.:37的VL，(e)SEQ ID NO.:42的VH和SEQ ID NO.:47的VL，(f)SEQ ID NO.:52的VH和SEQ ID NO.:57的VL，(g)SEQ ID NO.:62的VH和SEQ ID NO.:67的VL，(h)SEQ ID NO.:72的VH和SEQ ID NO.:77的VL，(i)SEQ ID NO.:82的VH和SEQ ID NO.:87的VL，(j)SEQ ID NO.:92的VH和SEQ ID NO.:97的VL，(k)SEQ ID NO.:102的VH和SEQ ID NO.:107的VL，(l)SEQ ID NO.:112的VH和SEQ ID NO.:117的VL，(m)SEQ ID NO.:122的VH和SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：E本杰明，N卡勒瓦勒莱，JM麦考利夫，F帕尔默希尔，L瓦赫特，袁安迪，朱青，D科蒂，A兰扎维基亚，B瓜里诺，A德马科，
申请(专利权)人：胡默波斯生物医学公司，
类型：发明
国别省市：