一种小干扰核酸和药物组合物及其用途制造技术

本公开涉及一种小干扰核酸和药物组合物及其用途，该siRNA含有正义链和反义链，所述正义链含有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，反义链含有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；且所述siRNA的磷酸

【技术实现步骤摘要】
一种小干扰核酸和药物组合物及其用途
[0001]相关申请
[0002]本申请是申请日为2016年12月21日，申请号为201611193911.6的中国专利申请的分案申请。


[0003]本公开涉及生物医药
，具体地，涉及一种小干扰核酸(siRNA)、一种药物组合物以及它们的用途。

技术介绍

[0004]血脂异常，又名高脂血症，是脂肪代谢或运转异常，使血浆脂质高于正常值的一种全身性疾病。高脂血症的临床表现主要包括两大方面：(1)脂质在真皮内沉积所引起的黄色瘤；(2)脂质在血管内皮沉积所引起的动脉粥样硬化，产生冠心病和周围血管病等。据报道，全世界大约有35％的二型糖尿病患者也患有血脂异常；另外，1800万人患有高脂血症中的高甘油三酯症。我国18岁及以上人群血脂异常患病率约为18.6％，甚至儿童中也有近10％者血脂升高，还有逐渐上升的趋势。血脂异常严重威胁着患者的健康。
[0005]现有的治疗血脂异常的药物主要有他汀类、胆固醇吸收抑制剂、树脂类、普罗步考、贝特类和烟酸及其衍生物。这些药物使用后或多或少都会有一些禁忌症和副反应，例如在2001年被曝出有31例服用他汀类降脂药拜斯亭的病人先后死于严重的肌病的案例。因此，亟需开发针对血脂异常的新药物和新疗法。
[0006]血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)是一种主要在肝脏表达的分泌蛋白，因其基因结构与血管生成素相似得名。现有研究证实血脂异常与ANGPTL3的高表达量是有相关性的，ANGPTL3通过与脂肪组织结合，抑制脂蛋白脂肪酶的活性来调节脂质代谢。ANGPTL3的低表达可以减缓血脂异常引起的动脉粥样硬化。因此抑制ANGPTL3的活性可以有效预防和/或治疗血脂异常，设计合适的小干扰RNA(Small interfering RNA；siRNA)序列可以专一性的降低ANGPTL3的表达。siRNA通过装载入沉默复合体(RNA
‑
induced silencing complex，RISC)，与靶标基因的mRNA的靶核酸互补配对，使靶标基因的mRNA降解从而抑制靶标基因的表达。但是靶核酸存在种属间差异，增加了针对靶核酸的siRNA药物研发的困难，同时siRNA的稳定性较差，系统给药存在易被核酸酶降解的缺点。开发有效预防和/或治疗血脂异常的siRNA及其药物存在临床研究的必要性和商业化的现实性。

技术实现思路

[0007]本公开的目的是提供一种针对ANGPTL3基因的高效siRNA序列和其药物组合物，该药物组合物有效预防和/或治疗血脂异常。
[0008]为了实现上述目的，本公开第一方面提供了一种siRNA，该siRNA含有正义链和反义链，其中，所述正义链含有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述反义链含有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，其中，
[0009]正义链5
’‑
CCAAGAGCACCAAGAACUA
‑3’
(SEQ ID NO.2)；
[0010]反义链5
’‑
UAGUUCUUGGUGCUCUUGG
‑3’
(SEQ ID NO.3)。
[0011]第二方面，本公开提供了一种药物组合物，该药物组合物含有如上所述的siRNA和药学上可接受的载体；所述siRNA与药学上可接受的载体的重量比为1:(1
‑
500)，优选为1:(1
‑
50)。
[0012]第三方面，本公开提供了一种试剂盒，该试剂盒含有如第一方面所述的siRNA和/或如第二方面所述的药物组合物。
[0013]第四方面，本公开提供了如第一方面所述的siRNA和/或如第二方面所述的药物组合物在制备预防和/或治疗血脂异常的药物中的用途。
[0014]第五方面，本公开提供了一种预防和/或治疗血脂异常的方法，该方法包括将如第一方面所述的siRNA和/或如第二方面所述的药物组合物给予有需要的患者。
[0015]第六方面，本公开提供了一种抑制肝细胞中ANGPTL3基因表达的方法，该方法包括将如第一方面所述的siRNA和/或如第二方面所述的药物组合物导入所述肝细胞。
[0016]通过上述技术方案，本公开提供了一种有效预防和/或治疗血脂异常的全新手段，通过siRNA或者siRNA的药物组合物抑制ANGPTL3基因的表达引起了血液中胆固醇和甘油三酯含量的下降，有效预防和/或治疗血脂异常，具备临床研究的必要性和商业化的现实性。尤其是本公开提供的由有机胺、辅助脂质、聚乙二醇化脂质形成的药学上可接受的载体与本公开的siRNA形成的特定药物组合物，显著抑制了高脂模型小鼠ANGPTL3在肝脏组织中的表达，抑制率达到了90％以上；经本公开药物组合物治疗的高脂模型小鼠血清内的总胆固醇和甘油三酯含量比给药前显著下降，抑制率在30％
‑
50％之间。
[0017]本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
[0018]附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：
[0019]图1是siRNA在体外人血浆中的稳定性检测的电泳图。
具体实施方式
[0020]以下结合附图对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。
[0021]在本公开中，ANGPTL3是指mRNA序列如Genbank注册号NM_014495.3所示的基因。
[0022]第一方面，本公开提供了一种siRNA，该siRNA含有正义链和反义链，其中，所述正义链含有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述反义链含有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，其中，
[0023]正义链5
’‑
CCAAGAGCACCAAGAACUA
‑3’
(SEQ ID NO.2)；
[0024]反义链5
’‑
UAGUUCUUGGUGCUCUUGG
‑3’
(SEQ ID NO.3)。
[0025]按照本公开的一个实施方式，所述正义链和所述反义链中至少一条单链的3
’
末端还连接有1至3个核苷酸，从而在所述正义链和所述反义链互补配对后形成至少一个由1至3个核苷酸构成的3
’
突出端；优选地，所述3
’
突出端为连续的2个脱氧胸腺嘧啶核苷酸(即
dTdT)或尿嘧啶核苷酸(即UU)；更优选地，正义链和反义链都含有3
’
突出端。
[0026]本公开siRNA的靶核酸如SEQ ID NO.1(CCAAGAGCACCAAGAACUA)所示，其中，所述siRNA的靶核酸是指ANGPTL3的mRNA(NM_014495.3)编码区中第658
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种siRNA，该siRNA含有正义链和反义链，其中，所述正义链含有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述反义链含有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，其中，正义链5
’‑
CCAAGAGCACCAAGAACUA
‑3’
(SEQ ID NO.2)；反义链5
’‑
UAGUUCUUGGUGCUCUUGG
‑3’
(SEQ ID NO.3)。2.根据权利要求1所述的siRNA，其中，所述正义链和所述反义链中至少一条单链的3
’
末端还连接有1至3个核苷酸，从而在所述正义链和所述反义链互补配对后形成至少一个由1至3个核苷酸构成的3
’
突出端；优选地，所述3
’
突出端为连续的2个脱氧胸腺嘧啶核苷酸或尿嘧啶核苷酸；更优选地，正义链和反义链都含有3
’
突出端。3.根据权利要求1或2所述的siRNA，其中，所述siRNA的磷酸
‑
糖骨架中的磷酸酯基中的至少一部分为具有修饰基团的磷酸酯基，所述siRNA的磷酸
‑
糖骨架中的核糖基中的至少一部分为具有修饰基团的核糖基。4.根据权利要求3所述的siRNA，其中，所述具有修饰基团的核糖基选自2
’‑
羟基被甲氧基取代而成的2
’‑
甲氧基核糖基和/或2
’‑
羟基被氟取代而成的2
’‑
氟代核糖基；所述具有修饰基团的磷酸酯基为磷酸酯基中的磷酸二酯键中的一个氧原子被硫原子取代而成的硫代磷酸酯基；所述硫代磷酸酯基结构如式(1)所示：5.根据权利要求4所述的siRNA，其中，该siRNA的磷酸
‑
糖骨架分别具有如下修饰基团：所述siRNA的正义链核苷酸序列的第1、2、8、10、11、17和18位的糖基为2
’‑
甲氧基核糖基，所述siRNA的反义链核苷酸序列的第2位的糖基为2
’‑
甲氧基核糖基，第4、6、8、13、15和17位的糖基为2
’‑
氟代核糖基；或者，所述siRNA的正义链核苷酸序列的第1、2、8、11、14和18位的糖基为2
’‑
甲氧基核糖基，所述siRNA的反义链核苷酸序列的第2位的糖基为2
’‑
甲氧基核糖基，第7、8和17位的糖基为2
’‑
氟代核糖基；或者，所述siRNA的正义链核苷酸序列的第1、2、8、10、11、17和18位的糖基为2
’‑
甲氧基核糖基，所述siRNA的反义链核苷酸序列的第2位的糖基为2
’‑
甲氧基核糖基，第5、7、8、13、16和17位的糖基为2
’‑
氟代核糖基；或者，所述siRNA的正义链核苷酸序列的第1、2、8、10、11、17和18位的糖基为2
’‑
甲氧基核糖基，所述siRNA的反义链核苷酸序列的第2位的糖基为2
’‑
甲氧基核糖基，第5、8、11、15和17位的糖基为2
’‑
氟代核糖基。6.根据权利要求5所述的siRNA，其中，所述siRNA的正义链和/或反义链...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鸿雁，高山，
申请(专利权)人：苏州瑞博生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：