一种含佐剂的新冠DNA疫苗制造技术

本发明专利技术涉及一种DNA疫苗组合物及其用途。具体而言，本发明专利技术涉及针对冠状病毒的DNA疫苗组合物，以及包含所述DNA疫苗组合物的药物组合物。此外，本发明专利技术还涉及所述DNA疫苗组合物的用途。本发明专利技术的DNA疫苗组合物可用于预防和/或治疗冠状病毒感染和/或由所述感染引起的疾病。病。病。

【技术实现步骤摘要】
一种含佐剂的新冠DNA疫苗


[0001]本专利技术涉及免疫学领域和分子病毒学领域，特别是冠状病毒的诊断、预防和治疗领域。具体而言，本专利技术涉及针对新型冠状病毒的 DNA疫苗组合物，以及包含所述DNA疫苗组合物的药物组合物。此外，本专利技术还涉及所述DNA疫苗组合物的用途。本专利技术的DNA疫苗组合物可用于预防和/或治疗冠状病毒感染和/或由所述感染引起的疾病。

技术介绍

[0002]2019年冠状病毒引起的疾病(COVID
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19)已在全球造成健康危机。严重急性呼吸系统综合症2(SARS
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CoV
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2)是一种单链正义核糖核酸(RNA)病毒，其刺突蛋白(Spike蛋白)决定了病毒的传染性以及在宿主中的传播能力。病毒的Spike蛋白也非常不稳定，Spike蛋白的突变可能会导致病毒的传染性增加。由于目前没有对公众有效的治疗方法，因此迫切需要有效的预防方法，尤其是疫苗。
[0003]目前，许多研究发现SARS
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CoV
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2的Spike蛋白基因有多种突变，其中D614G是最重要的突变以及突变组合，例如D614G+I472V (Zhou,B.,et al.,SARS
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CoV
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2 spike D614G variant confers enhancedreplication and transmissibility.bioRxiv,2020；Plante,J.A.,et al.,Spikemutation D614G alters SARS
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2 fitness.Nature,2020；Li,Q.,et al., The Impact of Mutations in SARS
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2 Spike on Viral Infectivity and Antigenicity.Cell,2020.182(5):p.1284
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1294e9.)。其他研究发现，某些突变位点可以降低病毒的传染性，如L452R和V483A，但这些位点可以耐受一些中和抗体(Li,Q.,et al.,The Impact of Mutations in SARS
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CoV
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2 Spike on Viral Infectivity and Antigenicity.Cell,2020. 182(5):p.1284
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1294e9.)。此外，B.1.1.7变体以及许多遗传变化的变体在英国迅速增加，B.1.1.7变体由于N501Y的突变，可能会增加病毒与人血管紧张素转换酶2(ACE2)的结合(Leung,K.,et al.,Earlytransmissibility assessment of the N501Y mutant strains of SARS
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CoV
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2 in the United Kingdom,October to November 2020.Euro Surveill,2021. 26(1).)。独特的南非株系(501Y.V2)也包括多个可能具有功能意义的非同义spike突变，例如spike受体结合域中的K417N、E484K和 N501Y(Tegally,H.,et al.,Emergence and rapid spread of a new severeacute respiratory syndrome
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related coronavirus 2(SARS
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CoV
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2)lineagewith multiple spike mutations in South Africa.medRxiv,2020:p. 2020.12.21.20248640.)。
[0004]此前，DNA疫苗已成功的预防了多种不同的传染病，并且其与常规疫苗相比具有很大优势，因为它们的设计非常简单，只需一步就能克隆到质粒载体中。此外，抗原基因在体内的表达可以保持蛋白质的天然结构，确保其适当的加工和免疫呈递。值得注意的是，DNA疫苗在实际使用中的最大挑战是能否引发足够的免疫原性。
[0005]为了解决这个问题，许多不同的策略已应用于临床前模型中，包括用分子佐剂配制DNA疫苗。佐剂是免疫调节剂，几十年来一直用于治疗各种临床疾病。
[0006]例如，CpG ODN已被公认为多种疫苗的免疫佐剂，因为它可以辅助激活动物和人类先天性和适应性免疫反应。CPG
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ODN还可以直接刺激单核细胞、巨嗜细胞和树突细胞分泌多种细胞因子，如TNF
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α和 GM
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CSF，进而刺激辅助T细胞产生免疫反应。

技术实现思路

[0007]本申请的专利技术人经过大量实验和反复摸索，构建了一种表达SARS
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Cov
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2 Spike蛋白的DNA疫苗，并使用BC01作为佐剂。出人意料的发现，这种组合可以引发有效的产生针对新冠的中和抗体，并产生细胞介导的免疫反应，以预防和/或治疗SRAS
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CoV
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2病毒的引起的感染或疾病。
[0008]在第一方面，本申请提供了一种疫苗组合物，其包含或由以下成分组成：作为佐剂成分的第一核酸分子，以及作为免疫原成分的第二核酸分子；所述第一核酸分子含有编码卡介苗(BCG)非甲基化的CpG基序的核苷酸序列，并且，所述第二核酸分子含有编码SARS
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CoV
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2 Spike蛋白的核苷酸序列。
[0009]在某些实施方案中，所述卡介苗(BCG)非甲基化的CpG基序是通过将卡介苗的菌体裂解，并提取裂解液中的核酸而获得的。
[0010]在某些实施方案中，所述SARS
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CoV
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2S蛋白具有如下所示的序列：GenBank：MN_908947。
[0011]在某些实施方案中，所述第一核酸分子和第二核酸分子包含于同一载体中(例如，pSV10载体)，或者分别包含于不同的载体中。
[0012]所述疫苗组合物中的佐剂成分和免疫原成分，可以处于单一药用制剂中的两种成分的混合物形式，或者处于一个试剂盒中的各个成分的分离形式。并且，所述两种成分可以是分开、顺序或同时进行给药的。在某些实施方案中，两种成分基本上同时进行给药。
[0013]在某些实施方案中，所述第一核酸分子是通过中国专利技术专利 ZL200410033878.1中记载的方法制备的，此专利内容全文引入本申请中。在某些实施方案中，所述第一核酸分子的制备方法包括：将菌种接种于适合分枝杆菌生长的培养基中培养至对数期时收集菌体；菌体经破碎后离心收集上清液；上清液经CTAB的沉淀物用NaCl溶液溶解后用有机溶剂抽提收集无蛋白层，该无蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种疫苗组合物，其包含或由以下成分组成：作为佐剂成分的第一核酸分子，以及作为免疫原成分的第二核酸分子；所述第一核酸分子含有编码卡介苗(BCG)非甲基化的CpG基序的核苷酸序列，并且，所述第二核酸分子含有编码SARS
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2Spike蛋白的核苷酸序列；优选地，所述卡介苗(BCG)非甲基化的CpG基序是通过将卡介苗的菌体裂解，并提取裂解液中的核酸而获得的。2.权利要求1的疫苗组合物，所述疫苗组合物具有选自下列的一项或多项特征：(1)所述第一核酸分子包含或不包含于载体(例如，pSV10载体)中；(2)所述第二核酸分子包含或不包含于载体中；优选地，所述第二核酸分子包含于能够表达所述SARS
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2S蛋白的载体中(例如，pSV10载体)；(3)所述DNA疫苗为可经由注射或可经由粘膜施用的水溶液剂或复溶用冻干粉针剂；(4)所述第一核酸分子和第二核酸分子包含于同一载体中(例如，pSV10载体)，或者分别包含于不同的载体中。3.权利要求1或2的疫苗组合物，其中所述第一核酸分子和所述第二核酸分子的含量比例为1：2至1：10(例如，1：2，1：3，1：4，1：5，1：6，1：7，1：8，1：9或1：10)；优选地，所述第一核酸分子和所述第二核酸分子的比例为1：5；优选地，所述第一核酸分子的含量为1μg至100μg(例如，1μg，10μg，20μg，40μg，60μg，80μg，100μg)；更优选地，所述第一核酸分子的含量为10μg；优选地，所述第二核酸分子的含量为5μg至500μg(例如，5μg，50μg，100μg，200μg，300μg，400μg，500μg)；更优选地，所述第二核酸分子的含量为50μg。4.宿主细胞，其包含权利要求1
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3任一项所述的疫苗组合物中的核酸分子或载体；优选地，所述宿主细胞包含第一核酸分子和第二核酸分子，或者，所述宿主细胞包含第一核酸分子和所述pSV10载体。5.宿主细胞的组合，其中，第一宿主细胞包含权利要求1
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3任一项所述的疫苗组合物中的第一核酸分子或载体；第二宿主细胞包含权利要求1
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3任一项所述的疫苗组合物中的第二核酸分子或载体。6.一种药物组合物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄维金，赵爱华，徐苗，王佑春，周泽华，付丽丽，聂建辉，张黎，赵晨燕，
申请(专利权)人：中国食品药品检定研究院，
类型：发明
国别省市：