一种红霉素菌渣中红霉素A的液质联用检测方法技术

本发明专利技术涉及微生物发酵培养基残渣的检测技术领域，具体涉及一种红霉素菌渣中残留红霉素A的液质联用检测方法。本发明专利技术的检测方法包括如下步骤：(1)使用提取剂溶解菌渣中的残留成分，得到供试品溶液；所述提取剂为有机溶剂和水的混合溶剂；(2)将红霉素A标准品制成标准品溶液；(3)采用超高效液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种红霉素菌渣中红霉素A的液质联用检测方法


[0001]本专利技术涉及微生物发酵培养基残渣的检测
，具体涉及一种红霉素菌渣中残留红霉素A的液质联用检测方法。

技术介绍

[0002]红霉素是由红霉素链霉菌产生的一种十四元大环内酯类抗生素，红霉素A为主要活性成分，对革兰阳性菌具有强大抗菌作用。生产红霉素剩余的培养基残余物(以下简称“菌渣”)含有丰富的营养物质，其中蛋白质和多糖含量较高，故将其处理后转化为肥料、饲料是非常经济的选择。
[0003]但是，菌渣中还含有大量菌丝体，如果处置不当，会引起二次发酵，产生红霉素A等抗生素，造成异味，污染水体，甚至还有使微生物产生耐药性基因的潜在风险。在2008年修订的《国家危险废物名录》中，抗生素菌渣被列为一种危险废弃物，因此，对抗生素菌渣进行资源化利用前，必须要对其进行无害化处理，并对其中的红霉素A残留进行检测。
[0004]中国专利技术专利“CN107907616A一种菌渣中红霉素残留的检测方法”中提供了一种利用高效液相色谱法检测菌渣中红霉素残留的方法。该方法前处理步骤较为繁杂，需要反复有机试剂提取，提取液需要进一步去脂、萃取和氮吹等，而且，上机样品采用紫外检测器进行检测，灵敏度相对较低，无法满足人们更高的需求。另有食品和农业领域采用液相色谱
‑
串联质谱检测红霉素A含量的相关报道，但是，前处理方法均涉及固相萃取、旋转蒸发和氮吹等过程，这样大大提高了样品前处理成本。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中的缺陷，本专利技术提供一种红霉素菌渣中残留红霉素A的液质联用检测方法，目的在于：建立一种准确度高、灵敏度高、专属性强、重现性好的方法，快速有效检测红霉素菌渣中红霉素A残留量。
[0006]一种红霉素菌渣中红霉素A的液质联用检测方法，其中，红霉素A的检出限为25.0μg/kg；
[0007]本专利技术还提供一种红霉素菌渣中残留红霉素A的液质联用检测方法，包括如下步骤：
[0008](1)使用提取剂溶解红霉素菌渣中的残留成分，得到供试品溶液；所述提取剂为有机溶剂和水的混合溶剂，所述有机溶剂的体积比为50～100％；
[0009](2)将红霉素A标准品制成标准品溶液；
[0010](3)采用高效液相色谱
‑
质谱联用检测供试品溶液和标准品溶液，得到供试品溶液和标准品溶液的谱图，计算菌渣中红霉素A的含量；
[0011]其中，色谱条件为：色谱柱为C18柱；流动相包括弱极性相和强极性相，所述弱极性相选自甲醇或乙腈，强极性相选自甲酸水溶液、乙酸水溶液、甲酸
‑
甲酸铵溶液或乙酸
‑
乙酸铵溶液，其中酸含量为0.1％～0.5％(v/v)，铵盐浓度为0.01M～0.20M。
[0012]优选的，步骤(1)中，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈或丙酮。
[0013]优选的，步骤(1)中，所述有机溶剂选自甲醇。
[0014]优选的，步骤(1)中，所述有机溶剂的体积比为100％。
[0015]优选的，步骤(1)中，所述红霉素菌渣含水率为2％～95％；和/或，所述菌渣与提取剂的用量比例为0.5～2.0g:10～50mL；和/或，所述供试品溶液通过如下方式得到：将菌渣用提取剂定容后，涡旋振荡2～10min，然后4000～8000rpm，离心5～10min，取上清液。
[0016]优选的，步骤(3)中，所述色谱条件还包括：色谱柱为Waters
‑
C18柱，2.1
×
50mm，1.7μm；流动相以甲醇为弱极性相，0.1％(v/v)甲酸水溶液为强极性相。
[0017]优选的，步骤(3)中，所述色谱条件还包括：洗脱过程为梯度洗脱，洗脱程序包括初始阶段、中间阶段和末尾阶段，所述初始阶段的时长为1～3min，初始阶段弱极性相的体积比为5％～10％；所述中间阶段的时长为5～15min，中间阶段弱极性相的体积比为40％～95％；所述末尾阶段的时长为2～10min，末尾阶段弱极性相的体积比为5％～10％；和/或，流速为0.2～0.4mL/min；和/或，柱温为25～40℃；和/或，进样量为2～20μL。
[0018]优选的，步骤(3)中，所述色谱条件还包括：流速为0.25mL/min；和/或，柱温为35℃；和/或，进样量为10μL；和/或，所述洗脱程序为：
[0019]初始阶段：0～1.5min，弱极性相的体积比为10％；
[0020]中间阶段：4min，弱极性相的体积比为40％；7～9min，弱极性相的体积比为60％；
[0021]末尾阶段：10～11min，弱极性相的体积比为10％。
[0022]优选的，步骤(3)中，所述质谱条件为：电离方式为电喷雾正离子模式；和/或，离子源温度为150～200℃；和/或，去溶剂气温度为400～600℃；和/或，去溶剂气流量为400～800mL/min；和/或，喷雾电压为2.8～3.5kv；和/或，锥孔电压为28～40V；和/或，碰撞电压25～35V；和/或，扫描模式为多反应监测模式，扫描母离子m/z为734.35，子离子m/z为158.07。
[0023]优选的，步骤(3)中，所述质谱条件为：电离方式为电喷雾正离子模式；和/或，离子源温度为150℃；和/或，去溶剂气温度为450℃；和/或，去溶剂气流量为650mL/min；和/或，喷雾电压为3.2kv；和/或，锥孔电压为34V；和/或，碰撞电压30V；和/或，扫描模式为多反应监测模式，扫描母离子m/z为734.35，子离子m/z为158.07。
[0024]通过本专利技术的技术方案，能够用简单的方法和成本更低的溶剂对红霉素菌渣中的红霉素A进行有效的提取，并通过优选的色谱条件对红霉素A进行分离，进而通过质谱进行含量检测。本专利技术的检测方法具有准确度高、灵敏度高、专属性强、重现性好的优点。
[0025]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0026]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0027]图1为本专利技术方法的流程示意图；
[0028]图2为实施例1中红霉素A标准样品的总离子流图；
[0029]图3为实施例1中红霉素菌渣样品中红霉素A的总离子流图。
具体实施方式
[0030]以下实施例中所用的试剂均为市售品。
[0031]实施例1
[0032]仪器：超高效液相色谱
‑
三重四级杆串联质谱仪。
[0033]色谱条件：色谱柱为Waters
‑
C18柱(2.1
×
50mm，1.7μm)，流动相：甲醇
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种红霉素菌渣中红霉素A的液质联用检测方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)使用提取剂溶解红霉素菌渣中的残留成分，得到供试品溶液；所述提取剂为有机溶剂和水的混合溶剂，所述有机溶剂的体积比为50～100％；(2)红霉素A标准品溶液的配制；(3)采用超高效液相色谱
‑
串联质谱检测供试品溶液和标准品溶液，得到供试品溶液和标准品溶液的谱图，计算菌渣中红霉素A的含量；其中，色谱条件为：色谱柱为C18柱；流动相包括弱极性相和强极性相，所述弱极性相选自甲醇或乙腈，强极性相选自甲酸水溶液、乙酸水溶液、甲酸
‑
甲酸铵溶液或乙酸
‑
乙酸铵溶液，其中酸含量为0.01％～0.5％(v/v)，铵盐浓度为0.01M～0.20M。2.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈或丙酮。3.按照权利要求2所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述有机溶剂选自甲醇。4.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述有机溶剂的体积比为100％。5.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述红霉素菌渣含水率为2％～95％；和/或，所述菌渣与提取剂的用量比例为0.5～2.0g:10～50mL；和/或，所述供试品溶液通过如下方式得到：将菌渣用提取剂定容后，涡旋振荡2～10min，然后4000～8000rpm，离心5～10min，取上清液。6.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述色谱条件还包括：色谱柱为Waters
‑
C18柱；流动相以甲醇为弱极性相，0.1％(v/v)甲酸水溶液为强极性相。7.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述色谱条件还包括：洗脱过程为梯度洗脱，...

【专利技术属性】
技术研发人员：董丽萍，邓留杰，韩丽丽，热沙来提，芦梦楚，安双双，殷文娟，
申请(专利权)人：伊犁川宁生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：