用于治疗眼咽肌营养不良(OPMD)的组合物和方法技术

本发明专利技术涉及包括

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗眼咽肌营养不良(OPMD)的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年2月28日提交的美国临时No.62/812,187的优先权，其全部内容通过引用整体并入本文。
[0003]对通过EFS
‑
Web以电子方式提交的序列表的引用
[0004]本申请包括通过EFS
‑
Web以电子方式提交的序列表(名称：“4226_0190001_SeqListing_ST25.txt”；大小：55,600字节；并创建于2019年2月26日)，其通过引用整体并入本文。


[0005]本专利技术涉及包括
‘
沉默和替代
’
DNA构建体的经修饰的腺相关病毒(AAV)递送载体(vector)、包括其的组合物，以及经修饰的AAV和组合物用于治疗患有眼咽肌营养不良(OPMD)或对其易感的个体的OPMD的用途。

技术介绍

[0006]OPMD是一种常染色体显性遗传性，进展缓慢，迟发性退行性肌肉疾病。该病的主要特征是进行性眼睑下垂(上睑下垂)和吞咽困难(噎膈)。咽肌和环咽肌是OPMD的特定靶点。近端肢体无力倾向于在疾病进展的较晚阶段随之而来。引起该疾病的突变是多聚(A)结合蛋白核1(PABPN1)编码区中的(GCN)n三核苷酸重复的异常扩增。这种扩增导致PABPN1蛋白N端的聚丙氨酸束扩增：正常蛋白中存在10个丙氨酸，扩增到11至18个突变形式的丙氨酸(expPABPN1)。该疾病的主要病理标志是expPABPN1的核聚集体。扩增的PABPN1的错误折叠导致不溶性聚合物纤维状聚集体在受影响细胞的核内累积。PABPN1是一种易聚集的蛋白，在OPMD中突变的丙氨酸扩增的PABPN1具有比野生型正常蛋白更高的聚集率。然而，仍然不清楚OPMD中的核聚集体是否由于细胞防御机制而具有病理功能或保护作用。
[0007]目前没有批准的治疗、药理学或其他治疗可用于OPMD。有症状的手术干预可以部分矫正上睑下垂并改善中度至严重患病个体的吞咽功能。例如，环咽肌切开术目前是可用于改善这些患者吞咽功能的唯一可能的治疗。然而，这并不能纠正咽肌系统的进行性退化，其通常会导致吞咽困难和窒息后死亡。
[0008]因此，仍然需要治疗剂来治疗患有OPMD和/或易患OPMD的患者。

技术实现思路

[0009]本专利技术部分基于本专利技术人的认识，即目前不存在用于治疗OPMD的批准的治疗剂。因此，本专利技术提供了一种用于治疗OPMD的治疗剂，其是基于一种经修饰的腺相关病毒(AAV)递送载体(vector)，包括'沉默和替代'构建体，该构建体包括(i)靶向造成OPMD的PABPN1 mRNA转录物的区域的一种或多种RNAi剂，和(ii)用于表达野生型(功能性)人PABPN1蛋白的PABPN1替代构建体，人PABPN1蛋白具有不被本专利技术的RNAi剂靶向的mRNA转录物。本专利技术还提供了使用AAV递送载体(vector)和包括其的组合物治疗OPMD的方法。
[0010]根据一个实例，本专利技术提供了一种腺相关病毒(AAV)，包括：
[0011](a)来自AAV9的病毒衣壳蛋白，其包括经修饰的亚单位1(VP1)序列，其中相对于SEQ ID NO：87中所示的相应野生型AAV9 VP1序列，位置1、26、40、43和44处的氨基酸被修饰；以及
[0012](b)多核苷酸序列，其包括(i)包括核酸的DNA指导的RNAi(ddRNAi)构建体，核酸包括编码短发夹微小RNA(shmiR)的序列；以及(ii)包括核酸的PABPN1构建体，核酸包括编码功能性PABPN1蛋白的序列，功能性PABPN1蛋白具有不被ddRNAi构建体编码的shmiR靶向的mRNA转录物。
[0013]在一个实例中，相对于SEQ ID NO：87所示的AAV9 VP1序列，经修饰的AAV9 VP1序列包括位置1处的丝氨酸、位置26处的谷氨酸、位置40处的精氨酸、位置43处的天冬氨酸和位置44处的丝氨酸。例如，相对于SEQ ID NO：87所示序列，经修饰的AAV9 VP1序列可包括以下修饰：A1S、A26E、Q40R、K43D和A44S。在一个实例中，改性AAV9 VP1序列包括SEQ ID NO：88所示的序列。
[0014]在一个实例中，相对于SEQ ID NO：89所示的全长野生型AAV血清型9衣壳序列，病毒衣壳蛋白包括突变A42S、A67E、Q81R、K84D和A85S。在一个实例中，病毒衣壳蛋白包括SEQ ID NO：90所示的氨基酸序列。
[0015]本专利技术还提供了AAV，其包括：
[0016](a)来自AAV8的病毒衣壳蛋白，其包括经修饰的亚单位1(VP1)序列，其中相对于SEQ ID NO：91中所示的相应野生型AAV8 VP1序列，位置1、26、40、43、44和64处的氨基酸被修饰；以及
[0017](b)多核苷酸序列，其包括(i)包括核酸的(ddRNAi)构建体，核酸包括编码shmiR的序列；以及(ii)包括核酸的PABPN1构建体，核酸包括编码功能性PABPN1蛋白的序列，功能性PABPN1蛋白具有不被ddRNAi构建体编码的shmiR靶向的mRNA转录物。
[0018]在一个实例中，相对于SEQ ID NO：91所示的AAV8 VP1序列，经修饰的AAV8 VP1序列在位置1包括丝氨酸、在位置26包括谷氨酸、在位置40包括精氨酸、在位置43包括天冬氨酸、在位置44包括丝氨酸和在位置64包括赖氨酸。例如，相对于SEQ ID NO：91所示序列，经修饰的AAV8 VP1序列可包括以下修饰：A1S、A26E、Q40R、K43D、A44S和Q64K。在一个实例中，改性AAV8 VP1序列包括SEQ ID NO：92所示的序列。
[0019]在一个实例中，相对于SEQ ID NO：93所示的全长野生型AAV血清型8衣壳序列，病毒衣壳蛋白包括突变A42S、A67E、Q81R、K84D、A85S和Q105K。在一个实例中，病毒衣壳蛋白包括SEQ ID NO：94所示的氨基酸序列。
[0020]在每个前述实例中，修饰的病毒衣壳蛋白是包括ddRNAi构建体和PABPN1构建体的多核苷酸的递送载体(vector)。在一个实例中，多核苷酸序列在5'至3'方向包括ddRNAi构建体和PABPN1构建体。在另一个实例中，多核苷酸序列在5'至3'方向包括PABPN1构建体和ddRNAi构建体。
[0021]多核苷酸还可包括来自AAV血清型的反向末端重复序列(ITR)。例如，ITR可侧接包括ddRNAi构建体和PABPN1构建体的序列。在一些实例中，ITR来自AAV2血清型(例如，SEQ ID NO：95和/或SEQ ID NO：96)。
[0022]在一个实例中，编码功能性PABPN1蛋白的DNA序列是密码子优化的，使得其mRNA转
录物不被ddRNAi构建体的shmiR靶向。例如，编码功能性PABPN1蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种腺相关病毒(AAV)，其包括：(a)来自AAV9的病毒衣壳蛋白，其包括经修饰的亚单位1(VP1)序列，其中相对于SEQ ID NO：87中所示的相应野生型AAV9 VP1序列，位置1、26、40、43和44处的所述氨基酸被修饰；以及(b)多核苷酸序列，其包括(i)包括核酸的DNA指导的RNAi(ddRNAi)构建体，所述核酸包括编码短发夹微小RNA(shmiR)的序列；以及(ii)包括核酸的PABPN1构建体，所述核酸包括编码功能性PABPN1蛋白的序列，所述功能性PABPN1蛋白具有不被ddRNAi构建体编码的shmiR靶向的mRNA转录物。2.根据权利要求1所述的AAV，其中，所述经修饰的VP1序列相对于SEQ ID NO：87中所示的所述野生型AAV9 VP1序列包括位置1处的丝氨酸、位置26处的谷氨酸、位置40处的精氨酸、位置43处的天冬氨酸和位置44处的丝氨酸。3.根据权利要求1或2所述的AAV，其中，所述经修饰的AAV9 VP1序列包括SEQ ID NO：88中所示的所述序列。4.根据权利要求1至3中任一项所述的AAV，其中，所述多核苷酸序列在5'至3'方向上包括所述ddRNAi构建体和所述PABPN1构建体。5.根据权利要求1至3中任一项所述的AAV，其中，所述多核苷酸序列在5'至3'方向上包括所述PABPN1构建体和所述ddRNAi构建体。6.根据权利要求1至5中任一项所述的AAV，其中，(b)处的所述多核苷酸序列包括来自AAV血清型的反向末端重复序列(ITR)，并且其中所述ITR侧接包括所述ddRNAi构建体和PABPN1构建体的所述序列。7.根据权利要求6所述的AAV，其中，所述ITR来自AAV2血清型。8.根据权利要求1至7中任一项所述的AAV，其中，编码所述功能性PABPN1蛋白的所述序列是密码子优化的，使得其mRNA转录物不被所述ddRNAi构建体的所述shmiR靶向。9.根据权利要求1至8中任一项所述的AAV，其中，编码所述功能性PABPN1蛋白的所述序列如SEQ ID NO：73所示。10.根据权利要求1至9中任一项所述的AAV，其中，所述ddRNAi构建体和编码所述功能性PABPN1蛋白的所述序列可操作地连接至位于所述ddRNAi构建体和编码所述功能性PABPN1蛋白的所述序列上游的启动子。11.根据权利要求10所述的AAV，其中，所述启动子是肌肉特异性启动子。12.根据权利要求1至11中任一项所述的AAV，其中，所述shmiR包括：长度至少17个核苷酸的效应子序列；效应子互补序列；茎环序列；以及初级微小RNA(pri
‑
miRNA)骨架；其中所述效应子序列与SEQ ID NO：1
‑
13中任一个所示RNA转录物中相应长度的区域基本上互补。13.根据权利要求1至12中任一项所述的AAV，其中，所述shmiR选自由以下组成的组：包括SEQ ID NO：15所示效应子序列和SEQ ID NO：14所示效应子互补序列的shmiR；包括SEQ ID NO：17所示效应子序列和SEQ ID NO：16所示效应子互补序列的shmiR；
NO：31所示的效应子序列和SEQ ID NO：30(shmiR13)所示的效应子互补序列；包括编码shmiR的DNA序列或由编码shmiR的DNA序列组成的核酸，shmiR包括SEQ ID NO：33所示的效应子序列和SEQ ID NO：32(shmiR14)所示的效应子互补序列；以及包括编码shmiR的DNA序列或由编码shmiR的DNA序列组成的核酸，shmiR包括SEQ ID NO：39所示的效应子序列和SEQ ID NO：38(shmiR17)所示的效应子互补序列。21.根据权利要求19所述的AAV，其中，所述至少两种核酸选自由以下组成的组：包括SEQ ID NO：56(shmiR2)所示的DNA序列或由SEQ ID NO：56(shmiR2)所示的DNA序列组成的核酸；包括SEQ ID NO：57(shmiR3)所示的DNA序列或由SEQ ID NO：57(shmiR3)所示的DNA序列组成的核酸；包括SEQ ID NO：59(shmiR5)所示的DNA序列或由SEQ ID NO：59(shmiR5)...

【专利技术属性】
技术研发人员：V，
申请(专利权)人：贝尼泰克知识产权控股股份有限公司，
类型：发明
国别省市：