一种胡桃楸成熟胚不定芽诱导植株快速再生的方法技术

本发明专利技术公开了一种胡桃楸成熟胚不定芽诱导植株快速再生的方法，属于植物组织培养技术领域，通过对胡桃楸成熟胚预处理，成熟胚不定芽诱导，不定芽的生长培养，不定芽的生根培养，炼苗和移栽等步骤将胡桃楸带子叶的胚乳通过组织快繁的方式培育成种苗；操作步骤简单、快速和高效，不仅突破了胡桃楸组织培养外植体褐化严重及褐化导致生根困难的技术瓶颈，而且极大的缩短了植株再生时间和育苗周期，对于胡桃楸组培快繁及工厂化育苗具有重要的意义，应用前景广阔。前景广阔。前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一种胡桃楸成熟胚不定芽诱导植株快速再生的方法


[0001]本专利技术涉及植物组织培养
，具体涉及一种胡桃楸成熟胚不定芽诱导植株快速再生的方法。

技术介绍

[0002]胡桃楸(Juglans mandshurica Maxim.)为胡桃科(Juglandaceae)胡桃属(Juglans)落叶乔木，是我国东北地区珍贵的药材树种，同时也是我国重要木本粮油树种和果材兼用的经济林树种，集经济价值、营养价值和药用价值于一身。因此，胡桃楸具有广阔开发利用前景。胡桃楸集中分布于我国东北的东部山地，在华北地区也有零星分布，它向北延伸至大兴安岭与俄罗斯远东地区，往东南至朝鲜北部和日本。然而，由于长期的过度采伐，致使胡桃楸天然林资源已近濒危。目前，对胡桃楸的研究主要集中于它的分布、立地造林、抚育更新和材质材性等方面，其繁殖方面的研究相对较少。
[0003]生产上，胡桃楸的繁殖主要采用种子繁殖，但胡桃楸种子属于休眠性种子，繁殖前需要进行催芽处理，周期长，出苗率低，且苗木质量参差不齐，苗木繁育速度缓慢，难以达到实际市场的需求，严重阻碍了林业生产的发展。研究人员又将目光投向胡桃楸的组织培养，然而，胡桃楸植株内富含多糖多酚类物质，在组织培养过程中外植体切口处易产生褐色坏死层，导致胡桃楸外植体萌发较难，离体培养物褐化、退化严重，成为阻碍胡桃楸组织培养的主要因素。因此，本专利技术提供一种胡桃楸成熟胚不定芽诱导植株快速再生的方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种胡桃楸成熟胚不定芽诱导植株快速再生的方法，有效解决了种子繁殖萌发率低，出苗率低，苗木质量参差不齐；组织繁殖外植体切口处易产生褐色坏死层，导致胡桃楸外植体萌发较难的技术问题，提供了一种效果更好的可快速获得胡桃楸组培苗的方法。
[0005]本专利技术提供了一种胡桃楸成熟胚不定芽诱导植株快速再生的方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0006]S1，胡桃楸果实预处理
[0007]选取单株的胡桃楸果实，去青皮后压碎，将带子叶的胚乳于水中浸泡2～3h，并用流水冲洗0.5～1h，消毒后，得到预处理胚乳。
[0008]S2，成熟胚不定芽诱导
[0009]将S1得到的预处理胚乳接种于基本培养基中，调节pH值为5.6～5.8，并于23～25℃，无光条件下培养5d，然后于弱光下培养3d，接着于1500～2000Lx光照条件下，每日光照12～14h培养10～15d后，得到萌发的不定芽；
[0010]S3，不定芽的生长培养
[0011]将S2得到的萌发的不定芽接种于继代培养基中，调节pH值为5.6～5.8，并于23～25℃温度下、1500～2000Lx光照条件下，每日光照12～14h培养10～15d后，得到成长的不定
芽；
[0012]S4，不定芽的生根培养
[0013]将S3得到的成长的不定芽接种于生根培养基中，控制pH值为5.6～5.8，并于23～25℃温度下、1500～2000Lx光照条件下，每日光照12～14h培养15～25d后，得到生根的不定芽；
[0014]S5，炼苗和移栽
[0015]将S4得到的生根的不定芽置于温度为23～25℃，湿度为65％～75％环境中培养2～3d后，移栽至基质中，并于育苗室内培养得到胡桃楸再生植株。
[0016]优选的，S1中，所述消毒处理的具体方法为：采用无菌水清洗流水冲洗后的带子叶的胚乳，并于75％的酒精中浸泡带子叶的胚乳30s，重复两次后，采用0.1％HgCl2溶液浸泡10min，无菌水冲洗5次，吸干种子表面水分后，剥去成熟胚种皮并去除已被氧化的胚乳。
[0017]优选的，S2中，所述基本培养基由以下质量份的原料组成：1416份NH4NO3、4.8份H3BO3、112.5份CaCl2·
H2O、1367.0份Ca(NO3)2、0.25份CuSO4·
5H2O、45.4份a2
‑
EDTA、33.8份FeSO4·
7H2O、361.49份MgSO4·
7H2O、33.5份MnSO4·
H2O、0.39份Na2MoO4、0.005份NiSO4·
6H2O、265.0份KH2PO4、1559.0份K2SO4、17.0份N2O6Zn
·
6H2O、5.22份盐酸硫胺素、1000份Na2S2O3、2.5份6
‑
苄氨基嘌呤、0.1份吲哚丁酸、4500份琼脂、2000份蔗糖、1000份腺嘌呤、950～1000份蒸馏水。
[0018]优选的，S3中，所述继代培养基由以下质量份的原料组成：1416.0份NH4NO3、4.8份H3BO3、112.5份CaCl2·
H2O、1367.0份Ca(NO3)2、0.25份CuSO4·
5H2O、45.4份a2‑
EDTA、33.8份FeSO4·
7H2O、361.49份MgSO4·
7H2O、33.5份MnSO4·
H2O、0.39份Na2MoO4、0.005份NiSO4·
6H2O、265.0份KH2PO4、1559.0份K2SO4、17.0份N2O6Zn
·
6H2O、5.22份盐酸硫胺素、1000份Na2S2O3、2.5份6
‑
苄氨基嘌呤、0.01～0.1份吲哚丁酸、0.2～0.25份赤霉素、4500份琼脂、2000份蔗糖、950～1000份蒸馏水。
[0019]优选的，S4中，所述生根培养基由以下质量份的原料组成：1416.0份NH4NO3、4.8份H3BO3、112.5份CaCl2·
H2O、1367.0份Ca(NO3)2、0.25份CuSO4·
5H2O、45.4份a2
‑
EDTA、33.8份FeSO4·
7H2O、361.49份MgSO4·
7H2O、33.5份MnSO4·
H2O、0.39份Na2MoO4、0.005份NiSO4·
6H2O、265.0份KH2PO4、1559.0份K2SO4、17.0份N2O6Zn
·
6H2O、5.22份盐酸硫胺素，1000份Na2S2O3、2.5份6
‑
苄氨基嘌呤、0.1份吲哚丁酸、0.2份赤霉素、0.2份活性炭、30000份蔗糖、4500份琼脂、950～1000份蒸馏水。
[0020]优选的，S4中，所述生根的不定芽根部长度为2～5cm。
[0021]优选的，S5中，所述基质是由草炭土和蛭石按照3:1的比例组成，所述基质的湿度为65％～75％。
[0022]优选的S5中，所述育苗室的温度为25～28℃。
[0023]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0024](1)本专利技术以胡桃楸成熟胚带子叶的胚乳为外植体进行不定芽诱导和植株再生，通过组织培养离体快繁，保持种苗优良品质的一致性，培育时间较短，不定芽诱导10～15d，不定芽生长10～15d，不定芽生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胡桃楸成熟胚不定芽诱导植株快速再生的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，胡桃楸果实预处理选取单株的胡桃楸果实，去青皮后压碎，将带子叶的胚乳于水中浸泡2～3h，并用流水冲洗0.5～1h，消毒后，得到预处理胚乳。S2，成熟胚不定芽诱导将S1得到的预处理胚乳接种于基本培养基中，调节pH值为5.6～5.8，并于23～25℃，无光条件下培养5d，然后于弱光下培养3d，接着于1500～2000Lx光照条件下，每日光照12～14h培养10～15d后，得到萌发的不定芽；S3，不定芽的生长培养将S2得到的萌发的不定芽接种于继代培养基中，调节pH值为5.6～5.8，并于23～25℃温度下、1500～2000Lx光照条件下，每日光照12～14h培养10～15d后，得到成长的不定芽；S4，不定芽的生根培养将S3得到的成长的不定芽接种于生根培养基中，控制pH值为5.6～5.8，并于23～25℃温度下、1500～2000Lx光照条件下，每日光照12～14h培养15～25d后，得到生根的不定芽；S5，炼苗和移栽将S4得到的生根的不定芽置于温度为23～25℃，湿度为65％～75％环境中培养2～3d后，移栽至基质中，并于育苗室内培养得到胡桃楸再生植株。2.根据权利要求1所述的胡桃楸成熟胚不定芽诱导植株快速再生的方法，其特征在于，S1中，所述消毒处理的具体方法为：采用无菌水清洗流水冲洗后的带子叶的胚乳，并于75％的酒精中浸泡带子叶的胚乳30s，重复两次后，采用0.1％HgCl2溶液浸泡10min，无菌水冲洗5次，吸干种子表面水分后，剥去成熟胚种皮并去除已被氧化的胚乳。3.根据权利要求1所述的胡桃楸成熟胚不定芽诱导植株快速再生的方法，其特征在于，S2中，所述基本培养基由以下质量份的原料组成：1416份NH4NO3、4.8份H3BO3、112.5份CaCl2·
H2O、1367.0份Ca(NO3)2、0.25份CuSO4·
5H2O、45.4份a2
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EDTA、33.8份FeSO4·
7H2O、361.49份MgSO4·
7H2O、33.5份MnSO4·
H2O、0.39份Na2MoO4、0.005份NiSO4·
6H2O、265.0份KH2PO4、1559.0份K2SO4、17.0份N2O6Zn
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6H2O、5.22份盐酸硫胺素、1000份Na2S2O3、2.5份6
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苄氨基嘌呤、0.1份吲哚丁酸、4500份琼脂、2000份蔗糖、1000份腺嘌呤、950～...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽杰，范新蕊，王斯彤，金星，陈清霖，李海燕，朱瑞，周强，
申请(专利权)人：沈阳农业大学，
类型：发明
国别省市：