磷酸酶PPP5C在制备抑制肺癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了磷酸酶PPP5C在制备抑制肺癌药物中的应用，属于医学领域。本发明专利技术公开了磷酸酶PPP5C在制备抑制肺癌细胞增殖药物中的应用，以及在制备抑制肺癌细胞转移并逆转顺铂耐药的药物中的应用。本发明专利技术揭示了PPP5C通过促进GLI1去磷酸化入核并激活下游耐药和肿瘤干细胞相关基因表达，并通过试验验证去甲斑蝥素通过结合磷酸酶PPP5C抑制转录因子GLI1活性，从而干扰肺癌干细胞增殖并逆转肺癌细胞耐药性的分子机理，为临床应用提供实验依据。为临床应用提供实验依据。为临床应用提供实验依据。

【技术实现步骤摘要】
磷酸酶PPP5C在制备抑制肺癌药物中的应用


[0001]本专利技术涉及医学领域，特别是涉及一种磷酸酶PPP5C在制备抑制肺癌药物中的应用。

技术介绍

[0002]肿瘤干细胞是肿瘤复发和耐药发生的重要原因，具有以下生物学特性：无限增殖和分化潜能；多重耐药性和早期转移能力；表达与干细胞相关的分子标记和信号通路。以SHH/GLI1为轴的Hedgehog信号通路是调节肿瘤干细胞增殖和分化的三大通路之一，其异常激活是诱发肿瘤细胞耐药和转移的重要机制。作为调控胚胎发育和细胞增殖分化的经典信号通路，Hedgehog轴的关键组分在肺癌、大肠癌、肝癌等多种肿瘤组织中表达上调。Hedgehog信号通路主要由分泌型信号糖蛋白配体SHH(Sonic hedgehog protein)、膜受体补丁蛋白PTCH(Ptched receptor)、G蛋白偶联受体SMO(Smothened protein)以及神经胶质瘤相关癌基因GLI(Glioma associated oncogene)构成。GLI蛋白家族包含三个成员(GLI1,GLI2,GLI3)，其中GLI1是调控Hedgehog通路最关键的转录因子，去磷酸化的GLI1进入细胞核调控下游细胞增殖、耐药和转移等相关基因表达。研究表明，Hedgehog信号通路的异常激活与肿瘤发生相关，许多促进肿瘤细胞增殖的细胞周期调控蛋白(如Cyclin B和CDK 1)是Hedgehog信号通路的下游分子。此外，Hedgehog信号与其它调控细胞分化增殖的关键通路(如Notch，Wnt等)有交叉作用。近期研究发现，Hedgehog通路的异常激活与晚期非小细胞肺癌对顺铂耐药具有相关性，且该通路关键信号转导组分SMO和GLI1的异常表达是导致非小细胞肺癌对EGFR抑制剂耐药和转移发生的重要机制。
[0003]近年来Hedgehog信号通路核心组分SHH、SMO、GLI都已成为抗肿瘤药物研发的热门靶标。其中研究最成功的是靶向SMO的抑制剂，已经有Vismodegib和Sonidegib被FDA批准上市用于治疗转移性和晚期的基底细胞癌。Vismodegib和Sonidegib在治疗过程中出现了严重的耐药、毒副作用以及难溶解的问题。严重的毒副作用如体重下降、味觉丧失及关节疼痛等限制了这两个药物的应用。因此，研发新型的靶向Hedgehog信号通路的抗肿瘤药物仍具有广阔前景，以克服已有药物的毒副作用和耐药性问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种磷酸酶PPP5C在制备抑制肺癌药物中的应用，以解决上述现有技术存在的问题，通过实验发现去甲斑蝥素可以通过特异性的结合磷酸化酶家族PPP5C促进GLI1去磷酸化，从而抑制其进入细胞核行使激活下游细胞增殖和耐药等信号分子的功能，进而阐明了去甲斑蝥素干扰肺癌细胞的增殖并逆转肺癌细胞耐药性的分子机理，为临床应用提供实验依据。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0006]本专利技术提供磷酸酶PPP5C在制备抑制肺癌细胞增殖药物中的应用。
[0007]本专利技术还提供磷酸酶PPP5C在制备抑制肺癌细胞转移并逆转顺铂耐药的药物中的
应用。
[0008]优选的是，通过抑制所述磷酸酶PPP5C表达，实现对转录因子GLI1的活性的抑制，进而干扰肺癌细胞增殖并逆转肺癌细胞耐药性。
[0009]优选的是，所述肺癌细胞包括肺癌细胞株A549和H1299。
[0010]本专利技术还提供磷酸酶PPP5C联合去甲斑蝥素在制备抑制肺癌细胞增殖药物中的应用。
[0011]本专利技术还提供磷酸酶PPP5C联合去甲斑蝥素在制备抑制肺癌细胞转移并逆转顺铂耐药的药物中的应用。
[0012]优选的是，所述去甲斑蝥素作为抑制剂，其与所述磷酸酶PPP5C结合，可抑制转录因子GLI1的活性，实现干扰肺癌细胞增殖并逆转肺癌细胞耐药性。
[0013]优选的是，所述肺癌细胞包括肺癌细胞株A549和H1299。
[0014]本专利技术公开了以下技术效果：
[0015]Hedgehog信号通路在肺癌等多种肿瘤中异常高表达，转录因子GLI1是该通路最关键的终端信号转导分子，是肺癌对靶向药物和传统化疗药物耐药的重要调控分子。在真核细胞中GLI1去磷酸化后进入细胞核，激活下游细胞增殖和耐药等信号分子。本专利技术揭示了PPP5C通过促进GLI1去磷酸化入核并激活下游耐药和肿瘤干细胞相关基因表达，并通过实验验证了去甲斑蝥素通过结合磷酸酶PPP5C抑制转录因子GLI1活性，从而干扰肺癌干细胞增殖并逆转肺癌细胞耐药性的分子机理，这为临床应用提供实验依据。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0017]图1为去甲斑蝥素对肺癌细胞系A549和H1299增殖的抑制作用；A：CCK8细胞增殖曲线B：药物半抑制浓度IC
50
曲线；
[0018]图2为去甲斑蝥素对肺癌细胞多种化疗药物的增敏作用；A：去甲斑蝥素与顺铂(DDP)，紫杉醇(PTX)，吉西他滨(GEM)和5氟尿嘧啶(5
‑
FU)联合有协同抗肿瘤作用；B：低浓度去甲斑蝥素预处理能够增敏上述化疗药的细胞增殖抑制作用；
[0019]图3为去甲斑蝥素对顺铂耐药的肺癌干细胞增殖的影响；A：顺铂对肺癌干细胞增殖的影响；B：去甲斑蝥素对肺癌干细胞增殖的影响；
[0020]图4为不同实验验证去甲斑蝥素特异性抑制GLI1活性及其下游基因转录；A：RT
‑
PCR实验结果；B：免疫印迹实验结果；C：CCK8实验结果；D：克隆形成实验证结果；
[0021]图5为去甲斑蝥素在体内对肺癌皮下移植瘤增殖和转移的抑制作用；A：肿瘤生长曲线显示去甲斑蝥素对瘤组织体内生长的影响；B，小鼠处死后不同加药组瘤组织块重量；C，HE染色显示不同组肺转移情况；D，肺转移统计；
[0022]图6为不同试验验证去甲斑蝥素通过直接结合PPP5C抑制GLI1活性；A：DARTS
‑
WB实验结果；B：肺癌患者PPP5C表达水平与预后呈负相关；C：Co
‑
IP实验结果；D：荧光素酶报导实验结果。
First Strand cDNA Synthesis Kit(Fermentas，美国)将纯化的RNA反转录为cDNA。聚合酶链反应采用2
×
Taq Master Mix(诺唯赞，中国)进行。针对Hedgehog通路关键组份及内参GAPDH的引物如下表1：
[0039]表1引物序列
[0040]引物名称序列(5
’‑3’
)SHH ForTACTCGCAGCTGCTCTACCASHH RevGTCTTTTTGCTTTGCGTTGCPTCH 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.磷酸酶PPP5C在制备抑制肺癌细胞增殖药物中的应用。2.磷酸酶PPP5C在制备抑制肺癌细胞转移并逆转顺铂耐药的药物中的应用。3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，通过抑制所述磷酸酶PPP5C表达，实现对转录因子GLI1的活性的抑制，进而干扰肺癌细胞增殖并逆转肺癌细胞耐药性。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述肺癌细胞包括肺癌细胞株A549和H1299。5.磷酸酶PPP5C联合去甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜静，武艳，陈微微，董洪亮，
申请(专利权)人：滨州医学院附属医院，
类型：发明
国别省市：