一种幽门螺杆菌突变菌疫苗的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种幽门螺杆菌突变菌疫苗的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：(1)对幽门螺杆菌突变菌进行培养，所述幽门螺杆菌突变菌的保藏编号为CCTCCNO：M2020028；(2)粗提幽门螺杆菌突变菌外膜囊泡；(3)加入Optiprep梯度离心液进行离心，对步骤(2)所得突变菌外膜囊泡进行纯化。本发明专利技术本发明专利技术针对幽门螺杆菌突变菌可以很好的获得其具有疫苗活性的外膜囊泡，提取率比已有技术高出40％以上。提取率比已有技术高出40％以上。

【技术实现步骤摘要】
一种幽门螺杆菌突变菌疫苗的制备方法


[0001]本专利技术涉及疫苗制备技术，具体涉及一种幽门螺杆菌突变菌疫苗的制备方法。

技术介绍

[0002]幽门螺杆菌(H.pylori，简称Hp)是一种微需氧的革兰氏阴性细菌，能够在人的胃及十二指肠等区域终身持续存在，它会引起胃黏膜轻微的慢性发炎，严重者甚至导致胃及十二指肠溃疡与胃癌。幽门螺杆菌感染是人中最常见的细菌感染性疾病，全球有一半以上人口感染有幽门螺杆菌。这种感染与许多胃疾病，例如慢性萎缩性胃炎、消化性溃疡、胃癌或胃部癌症和黏膜相关性淋巴样组织(mucosaassociatedlymphoidtissue，MALT)淋巴瘤相关。
[0003]在此前的研究中，CN111849850A获得了一种可以刺激免疫反应的幽门螺杆菌突变菌，该突变菌具有制备相应疫苗的潜力。但如何更好的获得相应的疫苗还没有进行深入的研究。

技术实现思路

[0004]针对上述现有技术不足，本专利技术的目的在于提供一种一种幽门螺杆菌突变菌疫苗的制备方法，该制备方法可以很好的获得幽门螺杆菌突变菌的外膜囊泡。
[0005]针对上述目的，本专利技术提供的方案如下：
[0006]一种幽门螺杆菌突变菌疫苗的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
[0007](1)对幽门螺杆菌突变菌进行培养，所述幽门螺杆菌突变菌的保藏编号为CCTCCNO：M2020028；
[0008](2)粗提幽门螺杆菌突变菌外膜囊泡；
[0009](3)加入Optiprep梯度离心液进行离心，对步骤(2)所得突变菌外膜囊泡进行纯化。
[0010]作为本专利技术的一个优选方案，步骤(1)中，培养所述幽门螺杆菌突变菌时，采用的培养基为液体布氏肉汤培养基，培养温度为37℃。
[0011]优选的，步骤(2)中，进行粗提时，采用的方法为：对培养得到的菌液进行浓缩，然后进行超速离心，所得沉淀物为粗提的幽门螺杆菌突变菌外膜囊泡。
[0012]优选的，进行离心时，温度为4℃，离心力为150000g，离心时间为2h。
[0013]优选的，步骤(3)中，Optiprep梯度离心液的浓度为35～40％，温度为4℃，离心力为120000g，离心时间为10h。
[0014]本专利技术的有益效果：
[0015]本专利技术针对已有菌株(保藏编号CCTCCNO：M2020028)幽门螺杆菌突变菌，可以很好的获得其具有疫苗活性的外膜囊泡，提取率比已有技术高出40％以上。
具体实施方式
[0016]下面通过实施例对本专利技术进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本专利技术进行进一步的说明，不能理解为对本专利技术保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述
技术实现思路
所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。
[0017]本专利技术中的幽门螺杆菌突变菌，是已有菌株，本专利技术不涉及该菌株的制备，该菌株的保藏编号为CCTCCNO：M2020028。
[0018]实施例1
[0019](1)利用液体布氏肉汤培养基对幽门螺杆菌突变菌(CCTCCNO：M2020028)进行培养，培养温度为37℃，培养至OD值为1。
[0020](2)对培养得到的菌液进行浓缩，然后进行超速离心，所得沉淀物为粗提的幽门螺杆菌突变菌外膜囊泡。进行离心时，温度为4℃，离心力为150000g，离心时间为2h。
[0021](3)加入Optiprep梯度离心液进行离心，对步骤(2)所得突变菌外膜囊泡进行纯化。Optiprep梯度离心液的浓度为35％，温度为4℃，离心力为120000g，离心时间为10h。
[0022]实施例2
[0023](1)利用液体布氏肉汤培养基对幽门螺杆菌突变菌(CCTCCNO：M2020028)进行培养，培养温度为37℃，培养至OD值为1。
[0024](2)对培养得到的菌液进行浓缩，然后进行超速离心，所得沉淀物为粗提的幽门螺杆菌突变菌外膜囊泡。进行离心时，温度为4℃，离心力为150000g，离心时间为2h。
[0025](3)加入Optiprep梯度离心液进行离心，对步骤(2)所得突变菌外膜囊泡进行纯化。Optiprep梯度离心液的浓度为38％，温度为4℃，离心力为120000g，离心时间为10h。
[0026]实施例3
[0027](1)利用液体布氏肉汤培养基对幽门螺杆菌突变菌(CCTCCNO：M2020028)进行培养，培养温度为37℃，培养至OD值为1。
[0028](2)对培养得到的菌液进行浓缩，然后进行超速离心，所得沉淀物为粗提的幽门螺杆菌突变菌外膜囊泡。进行离心时，温度为4℃，离心力为150000g，离心时间为2h。
[0029](3)加入Optiprep梯度离心液进行离心，对步骤(2)所得突变菌外膜囊泡进行纯化。Optiprep梯度离心液的浓度为40％，温度为4℃，离心力为120000g，离心时间为10h。
[0030]对比例1
[0031]采用CN111849850A中的实施例6作为对比。
[0032]对实施例1
‑
3和对比例1进行3次重复实验，实施例1
‑
3中外膜囊泡的提取率比对比例1而言，均至少提高40％。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种幽门螺杆菌突变菌疫苗的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：(1)对幽门螺杆菌突变菌进行培养，所述幽门螺杆菌突变菌的保藏编号为CCTCCNO：M2020028；(2)粗提幽门螺杆菌突变菌外膜囊泡；(3)加入Optiprep梯度离心液进行离心，对步骤(2)所得突变菌外膜囊泡进行纯化。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，培养所述幽门螺杆菌突变菌时，采用的培养基为液体布氏肉汤培养基，培养温度为37℃。3.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘淼文，余昊霖，陈靖萱，陈峰，刘琼，
申请(专利权)人：江西欧姆生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：