一种提高印度梨形孢产孢的方法技术

本发明专利技术涉及一种提高印度梨形孢产孢的方法。印度梨形孢的培养方法，采用的发酵培养基由土豆粉、葡萄糖和水组成或制成，所述发酵培养基中土豆粉的含量为10

【技术实现步骤摘要】
一种提高印度梨形孢产孢的方法


[0001]本专利技术涉及一种提高印度梨形孢产孢的方法。

技术介绍

[0002]印度梨形孢(Piriformospora indica)是一种能定殖于植物根际且对植物生长发育有益作用的一类真菌。现已报道该菌对12科24种宿主植物具有促进生长的作用，可与200种植物发生共生作用，其中包括农业、园艺业、重要经济作物和药用植物。已知印度梨形孢作用于玉米能够提高玉米抗旱能力，增加玉米产量；印度梨形孢与小白菜共培养时能明显提高小白菜的生物量，促进了小白菜主根的生长、侧根数量增加和长度的加长、根毛等多等；印度梨形孢与烟草共培养时能明显增加烟草叶片中蛋白质含量，烟草的总生物量也有所增加；印度梨形孢与油菜共培养时增加了油菜植株的叶片数量、叶柄长度、叶面积大小、地上和地下部分鲜重，并能促进油菜提前抽薹和开花，增加油菜子的产量；印度梨形孢与水稻共培养时能促进水稻地上部分的生长、提前抽穗，增加了水稻分蘖数，提高水稻叶片水稻的产量等。
[0003]印度梨形孢能对多种植物发挥有益作用，但该菌发酵周期长，培养成本高是制约该菌投入农业生产的限制条件。传统印度梨形孢的培养通常采用的是Kafer培养基，一般适合于实验室小型试验阶段。由于生长速度较慢，现有方法不能满足生产上大批量定期定量对印度梨形孢生物菌肥的需求。因此需要通过有效手段来促进印度梨形孢的液体培养产量，同时提高代谢物的作用。刘慧春报道了印度梨形孢液体发酵产物的制备及其在日本青葱上的应用。该研究通过采用不同的培养基配方，并在印度梨形孢特定的发酵阶段加入不同来源的冷激蛋白和不同外源物，研究不同培养基配方和培养方法对提高印度梨形孢发酵产物的效果。发酵培养基为PDA平板培养基(马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，用水定容至1000mL，自然pH在121℃下灭菌20min。)液体种子培养基(葡萄糖5～20g，酵母粉4g，蛋白胨3g，KH2PO
4 1g，MgSO
4 0.5g，定容至1000mL，自然pH，在121℃下灭菌20min。)液体发酵培养基(葡萄糖15g，玉米粉4g，牛肉浸膏3g，KH2PO
4 1.0g，MgSO
4 0.55g，定容至1000mL，自然pH，在121℃下灭菌20min。)发酵培养：液体种子液的获取(取1～3cm2大小活化后的印度梨形孢菌种接种于1L液体种子培养基中，在22～24℃培养1～9d)液体发酵培养(印度梨形孢液体种子液按占液体发酵培养基体积3％～12％的量接种于添加有外源物固体发酵培养物的液体发酵培养基中，在18～28℃下培养1～5d后加入不同来源的冷激蛋白，然后调整温度在15～25℃继续培养1、5和12d，终止发酵后，得到印度梨形孢发酵产物。液体发酵培养基中外源物固体发酵培养物的添加量为0.8～9.0g/L，液体发酵培养基中冷激蛋白的添加量为0.2～5.0mg/mL)。但以上方法发酵培养需要提取冷激蛋白操作繁琐，发酵用于接种的液体种子液相对较对多，培养基成分复杂、发酵周期长不适合大规模发酵生产。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供一种提高印度梨形孢产孢的方法，可以缩短培养周期，提高孢子产量。
[0005]本专利技术首先提供一种发酵培养基，其为液体培养基，所述发酵培养基由土豆粉、葡萄糖和水组成或制成，或者所述发酵培养基基本上由土豆粉、葡萄糖和水组成或制成；所述发酵培养基中土豆粉的含量为10
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20g/L、葡萄糖的含量为10
‑
20g/L。
[0006]根据本专利技术实施例，所述发酵培养基中土豆粉的含量为10g/L、葡萄糖的含量为10g/L。
[0007]根据本专利技术实施例，所述发酵培养基中土豆粉的含量为10g/L、葡萄糖的含量为20g/L。
[0008]根据本专利技术实施例，所述发酵培养基中土豆粉的含量为20g/L、葡萄糖的含量为10g/L。
[0009]根据本专利技术实施例，所述发酵培养基中土豆粉的含量为20g/L、葡萄糖的含量为20g/L。
[0010]根据本专利技术实施例，所述发酵培养基的7
‑
7.5，优选pH为7。
[0011]若无特殊指明，本专利技术所述pH均指培养基灭菌前的pH。
[0012]可采用本领域常规方法对所述发酵培养基的pH进行调整。
[0013]根据本专利技术实施例，所述发酵培养基的原料除土豆粉、葡萄糖、水，以及必要的pH调节剂(例如本领域常用的酸、碱或盐)外，不含有其他原料。
[0014]根据本专利技术实施例，调整所述发酵培养基的pH调节剂不包括本领域常用的无机盐。
[0015]根据本专利技术实施例，所述发酵培养基的原料不包括冷激蛋白，且所述发酵培养基中也不含有冷激蛋白。
[0016]根据本专利技术实施例，所述发酵培养基的原料不包括本领域常用的无机盐。
[0017]本专利技术意外地发现，以上述发酵培养基对印度梨形孢(Piriformospora indica)进行发酵培养，可以缩短培养周期，提高孢子产量。与传统的发酵培养基、发酵方法相比，主要营养成份减少，不用添加微量元素或无机盐，且接种量少，培养周期短，使印度梨形孢培养成本极大降低。
[0018]基于上述研究，本专利技术还提供一种培养基，其为固体培养基，其由土豆粉和葡萄糖组成，其中土豆粉和葡萄糖的重量比为(1:2)
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(2:1)，优选为1:1。在一些实施例中，该培养基可以直接由土豆粉和葡萄糖按比例配置而成。在使用时，加入适量水可配置成上述发酵培养基，用于对印度梨形孢(Piriformospora indica)进行发酵培养。在一些实施例中，可将上述发酵培养基脱水制成培养基，使用时再复水。
[0019]本专利技术还提供上述发酵培养基或上述发酵培养基在发酵培养印度梨形孢(Piriformospora indica)中的应用。
[0020]本专利技术还提供一种印度梨形孢(Piriformospora indica)的培养方法，包括采用上述发酵培养基对印度梨形孢(Piriformospora indica)进行发酵培养。
[0021]本专利技术人还发现，将印度梨形孢种子液进行匀浆后，使得其菌丝分散，种子液能均匀分布培养基中，从而使得真菌生长更快。经这种匀浆处理后，大大缩短了发酵培养的时间，而且还显著地降低了接种量。在一些实施例中，使用经匀浆处理后的印度梨形孢种子液采用本专利技术上述发酵培养基进行发酵，接种量可降低至1
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3％，可选为2％。为此，本专利技术还提供一种印度梨形孢(Piriformospora indica)的培养方法，包括将印度梨形孢种子液进
行匀浆；然后将匀浆后的印度梨形孢种子液进行接种发酵。发酵所用培养基可为PDB培养基。在一些实施例可为上述发酵培养基。采用上述发酵培养基进行发酵培养，可以进一步缩短产孢时间。
[0022]在一些实施例中，使用经匀浆处理后的印度梨形孢种子液采用本专利技术上述发酵培养基进行发酵，在接种量为2％时(摇瓶发酵)，培养3d出现本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种发酵培养基，其特征在于，其为液体培养基，所述发酵培养基由土豆粉、葡萄糖和水组成或制成，所述发酵培养基中土豆粉的含量为10
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20g/L、葡萄糖的含量为10
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20g/L。2.根据权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于，所述发酵培养基中土豆粉的含量为20g/L、葡萄糖的含量为20g/L。3.根据权利要求1或2所述的发酵培养基，其特征在于，所述发酵培养基的pH为7
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7.5，优选pH为7。4.一种培养基，其特征在于，其为固体培养基，所述培养基由土豆粉和葡萄糖组成，其中土豆粉和葡萄糖的重量比为(1:2)
‑
(2:1)，优选为1:1。5.权利要求1
‑
3任一项所述发酵培养基或权利要求4所述发酵培养基在发酵培养印度梨形孢(Piriformospora indica)中的应用。6.一种印度梨形孢(Piriformospora indica)的培养方法，其特征在于，包括采用权利要求1
‑
3任一项所述发酵培养基或权利要求4所述培养基对印度...

【专利技术属性】
技术研发人员：张桂山，苗少华，王华付，易可可，胡四化，龚旗，孙颖娇，
申请(专利权)人：桐城市畜牧兽医管理中心中牧实业股份有限公司北京至微生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：