用于辐射诱导的肺损伤的生物标志物和使用方法技术

本公开内容涉及使用烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)作为辐射诱导的肺损伤(RILI)的生物标志物的方法(例如，体外方法)。本文提供了一种体外方法，其用于通过提供来自受试者的组织或血浆样本并检测其中的NAMPT水平来诊断、预后和/或监测人类受试者中的RILI，其中相比于健康对照或参考值，来自所述受试者的所述组织或血浆样本中的更高NAMPT水平指示在所述受试者中存在RILI。本文还提供了一种方法，所述方法通过以下方法检测人类受试者中的NAMPT：从所述受试者中获得生物样本，通过将所述样本与特异性结合NAMPT的捕获剂接触检测在所述样本中NAMPT的存在情况，和检测NAMPT与所述捕获剂之间的结合。剂之间的结合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于辐射诱导的肺损伤的生物标志物和使用方法
[0001]相关申请
[0002]本申请要求2018年10月31日提交的美国临时申请号62/753,802和2019年9月5日提交的美国临时申请号62/896,483的优先权。这些优先权申请的内容在此通过引用并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请包含一个序列表，该序列表已以ASCII格式以电子方式提交，并且其全部内容通过引用并入本文。所述ASCII副本创建于2019年10月30日，名为A105818_1010WO_SL.txt，大小为10,316字节。

技术介绍

[0005]对于接受胸部放疗的个体(例如，癌症患者)或暴露于电离辐射(IR)(例如，来自核事故)的个体，辐射诱发的肺损伤(RILI)的发展是一种致残且可能致命的毒性。在RILI的两个主要组成部分中，最突出的是放射性肺炎，这是一种亚急性并发症，发生在IR暴露后4
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20周，由对IR的严重炎症反应诱发。导致放射性肺炎发展的危险因素是多因素的，但包括总辐射剂量、剂量率分数大小(每日剂量增量)、肺受照体积、共病因素(例如，肺气肿)和未知的遗传因素。尽管估计值各不相同，但在接受IR肺部照射后，放射性肺炎通常发生在约10％的患者中，包括5
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15％接受放疗的肺癌患者和约2
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3％的乳腺癌患者在保乳手术后接受术后放疗时出现局灶性放射性肺炎。放射性肺炎的严重程度范围从轻微的、自限性非特异性呼吸道症状到需要机械通气的严重呼吸功能不全，具有严重残疾或死亡。而相比之下，第二个RILI组成部分，辐射诱导的肺纤维化(RILF)，是在IR暴露后6
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24个月出现的晚期延迟毒性，如果纤维化区域广泛，可导致严重的呼吸系统损害、残疾和死亡。不幸的是，肺功能减弱的RILF的发展限制了有效杀死肿瘤细胞所需的辐射剂量的使用。由于促血管生成和促纤维生成刺激，RILF的病理生理学包括持续炎症、细胞因子释放和微血管变化。RILF的管理的选择有限，主要包括支持性护理。迄今为止，还没有经过验证的疗法可用于限制RILF的发展或严重程度。
[0006]最近的核事故，如2011年的福岛事件和潜在的恐怖主义行为，加剧了对灾难性IR辐射的担忧。毫不奇怪，急性、高剂量IR暴露会产生急性
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亚急性
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慢性炎症，最终可能导致致命的多器官衰竭，包括肺炎和RILF。超过50％的辐射事故受害者都患有RILI，单次8Gy照射会导致约30％的患者出现肺炎，有时甚至会导致死亡。不幸的是，目前国家战略储备中没有RILI对策，这是严重未满足的医疗和社会需求。
[0007]由全胸肺照射(WTLI)、全身照射(TBI)或局部照射(PBI)引起的RILI的病理学是复杂的，包括不受控制的炎症(例如，活性氧物质、细胞因子、炎症细胞等)的恶化作用，其增加血管通透性，损害气体转移和促进纤维化。尽管Toll样受体(TLR)和细胞因子(IL
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1β、TNF
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α、IL
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4等)是RILI发展的贡献者，但是中和IR诱导的促炎细胞因子效应或阻断炎症细胞浸润的实验和临床策略令人失望。血管紧张素转换酶抑制剂(例如，赖诺普利和卡托普利)、己酮茶碱和抗氧化剂(例如，氨磷汀)等疗法虽然在临床前模型中显示出前景，但未能在人类
中显示出实质性的临床获益。此外，其中只有少数在大型动物模型中进行了实际测试。作为RILI护理标准的高剂量皮质类固醇的有用性仍然存在争议。尽管具有急性疗效，但使用类固醇会出现长期并发症，包括预后不良、需要持续的类固醇治疗和频繁的、可能致命的复发(“召回”肺炎)。多项研究发现预防性类固醇给药几乎没有益处。临床前研究发现，使用泼尼松龙(10mg/kg/天)时，暴露于IR的小鼠的死亡率降低，并且类固醇戒断导致最终死亡加速，与未经治疗的小鼠相比，肺炎持续时间延长。此外，过早停药会加剧肺炎的严重程度。因此，在RILI中使用类固醇缺乏共识、其有限的疗效和严重的副作用(可能致命的复发)要求寻找更安全、更有效的RILI治疗策略，这是一个严重未满足的需求。

技术实现思路

[0008]本公开内容涉及使用烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)作为辐射诱导的肺损伤(RILI)的生物标志物的方法(例如，体外方法)。
[0009]第一个方面提供了一种用于在人类受试者中诊断、预后(prognosis)和/或监测辐射诱导的肺损伤(RILI)的体外方法，其包括以下步骤：(a)提供来自所述人类受试者的组织或血浆样本，(b)检测在所述组织或血浆样本中烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)的水平，其中相比于健康对照或参考值，如在步骤(b)中确定的来自所述人类受试者的所述组织或血浆样本中的更高NAMPT水平指示在所述人类受试者中存在RILI。
[0010]在上述方面的一些实施方式中，步骤(b)包括检测NAMPT蛋白的水平。在某些实施方式中，NAMPT蛋白的水平是通过放射自显影检测的。在某些实施方式中，NAMPT蛋白的水平是通过western印迹分析检测的。在某些实施方式中，NAMPT蛋白的水平是通过免疫组织化学检测的。在某些实施方式中，NAMPT蛋白的水平是通过ELISA检测的。
[0011]在一些实施方式中，NAMPT蛋白的水平是通过抗NAMPT抗体检测的。在某些实施方式中，抗NAMPT抗体是放射性标记的。
[0012]在上述方面的其他实施方式中，步骤(b)包括检测NAMPT mRNA的水平。在某些实施方式中，NAMPT mRNA的水平是通过RT
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PCR检测的。在特定实施方式中，通过与SEQ ID NO:1的核酸序列的全部或一部分互补的引物对检测NAMPT mRNA的水平。
[0013]在一些实施方式中，人类受试者显示出RILI的症状。
[0014]在一些实施方式中，人类受试者处于发展RILI的风险中。在某些实施方式中，人类受试者是正在接受放射疗法的癌症患者。在特定实施方式中，人类受试者是正在接受胸部(thoracic)放射疗法的癌症患者。在某些实施方式中，人类受试者暴露于电离辐射(IR)中。
[0015]在上述方面的一些实施方式中，健康对照或参考值是在对照受试者中的NAMPT表达水平。在某些实施方式中，对照受试者是无RILI的受试者。在特定实施方式中，对照受试者是无任何肺部疾病的受试者。
[0016]在前述方面的一些实施方式中，组织是肺组织。在一些实施方式中，组织是胸部组织。在一些实施方式中，组织是扁桃体组织。
[0017]另一个方面提供了一种在人类受试者中检测NAMPT的方法：(a)从所述人类受试者中获得生物样本；(b)通过将所述生物样本与特异性结合NAMPT的捕获剂接触而检测在所述生物样本中是否存在NAMPT；和(c)检测NAMPT与所述捕获剂之间的结合。
[0018]在前述方面的一些实施方式中，捕获剂检测NAMPT蛋白和在步骤(c)中NAMPT与所
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于在人类受试者中诊断、预后和/或监测辐射诱导的肺损伤(RILI)的体外方法，其包括以下步骤：(a)提供来自所述人类受试者的组织或血浆样本，(b)检测在所述组织或血浆样本中烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)的水平，其中相比于健康对照或参考值，如在步骤(b)中确定的来自所述人类受试者的所述组织或血浆样本中的更高NAMPT水平指示在所述人类受试者中存在RILI。2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(b)包括检测NAMPT蛋白的水平。3.根据权利要求2所述的方法，其中通过放射自显影、western印迹分析、免疫组织化学或ELISA检测所述NAMPT蛋白的水平。4.根据权利要求3所述的方法，其中通过抗NAMPT抗体检测所述NAMPT蛋白的水平。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述抗NAMPT抗体是放射性标记的。6.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(b)包括检测NAMPT mRNA的水平。7.根据权利要求6所述的方法，其中通过RT
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PCR检测所述NAMPT mRNA的水平。8.根据权利要求7所述的方法，其中通过与SEQ ID NO:1的核酸序列的全部或一部分互补的引物对检测所述NAMPT mRNA的水平。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述人类受试者显示出RILI的症状。10.根据权利要求1所述的方法，其中所述人类受试者处于发展RILI的风险中。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述人类受试者是正在接受放射疗法的癌症患者。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述人类受试者是正在接受胸部放射疗法的癌症患者。13.根据权利要求10所述的方法，其中所述人类受试者暴露于电离辐射(IR)中。14.根据权利要求1所述的方法，其中所述健康对照或参考值是在对照受试者中的NAMPT表达水平。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述对照受试者是无RILI的受试者。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述对照受试者是无任何肺部疾病的受试者。17.根据权利要求1所述的方法，其中所述组织是肺组织、胸部组织或扁桃体组织。18.一种在人类受试者中检测NAMPT的方法，所述方法包括：(a)从所...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：亚利桑那大学评议会，
类型：发明
国别省市：